TMEM158、CTEN在乳腺癌組織表達水平及意義

朱雪峰，劉彥魁，張 亞*

(1.無錫市第九人民醫(yī)院普外科，江蘇 無錫 214000；2.江南大學附屬醫(yī)院病理科，江蘇 無錫 214000)

乳腺癌的發(fā)生占據(jù)了女性群體惡性腫瘤的前三位，乳腺癌的高死亡率仍然是導致臨床上女性惡性腫瘤患者不良臨床結局的主要因素[1-2]。越來越多的臨床或者基礎方面的研究證實，分子蛋白或者基礎生物學領域相關機制的改變，通過影響乳腺癌上皮細胞的異常分裂，促進導管上皮細胞生物學行為的惡化，最終參與乳腺癌的進程?？缒さ鞍?58(transmembrane protein 158,TMEM158)是跨膜蛋白家族成員，其通過誘導癌細胞外殼蛋白受體的激活，促進癌細胞信號通路的交叉激活，最終影響腫瘤基因的轉錄和翻譯過程[3]；羥基張力蛋白素(hydroxytensin,CTEN)是細胞間質蛋白成分，其不僅影響癌細胞間結構的穩(wěn)定性，同時還能夠通過影響癌細胞浸潤和侵襲能力，干預到惡性腫瘤細胞的轉移過程[4-5]。為了揭示TMEM158、CTEN蛋白與乳腺癌發(fā)生發(fā)展機制，本文探討了乳腺癌組織TMEM158、CTE與臨床病理特征的關系，旨在為臨床上乳腺癌的診療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年1月至2020年5月本院和江南大學附屬醫(yī)院保存的乳腺癌組織標本110例作為研究對象，同時選取癌旁組織(距癌邊緣≥5 cm)作為對照，納入標準：(1)均經(jīng)病理學確診；(2)女性患者；(3)臨床資料保存完整。排除標準：(1)術前有放療、化療等抗腫瘤治療史；(2)合并有其它系統(tǒng)惡性腫瘤。

1.2 實驗方法

石蠟切片進行脫水操作后用3%H2O2在室溫條件下孵育20 min，再用磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗3次，每次清洗5 min，PBS稀釋后的山羊血清封閉抗體5 min，加入一抗(購自賽默飛世爾中國濃度：1∶1 000)5 mL，在37 ℃條件下孵育2 h，或者放置4 ℃冰箱過夜孵育，再用PBS清洗3次，每次5 min，加入生物素熒光標記的二抗(購自賽默飛世爾中國濃度：1∶2 000)3 mL，37 ℃孵育30 min，再用PBS清洗3次，每次5 min，加入Streptavidin/HRP辣根酶標記鏈霉卵白素，37 ℃孵育30 min，再用PBS清洗3次，每次5 min，采用增強型HRP-DAB底物顯色試劑盒(PA110)顯色，自來水沖洗，復染，封片。

1.3 結果判斷

TMEM158、CTEN主要表達于細胞胞質；采用雙盲法由3名病理科醫(yī)師進行判斷，染色強度判斷：無色、淡黃色、棕黃色和棕褐色分別記為0分、1分、2分和3分；陽性細胞比例判斷：≤10%，11%～25%，26%～50%，51%～75%，>75%分別記為0分、1分、2分、3分和4分。染色強度與陽性細胞比例得分之積，≥4分為陽性表達。

1.4 統(tǒng)計學處理

數(shù)據(jù)分析采用SPSS22.0軟件，計數(shù)資料用百分率(%)表示，用χ2檢驗，采用Spearman秩和檢驗分析兩種變量之間的相關性，檢驗水準：雙側α=0.05。

2 結 果

2.1 乳腺癌和癌旁組織TMEM158、CTEN表達

乳癌癌組織TMEM158、CTEN免疫組化染色見圖1，表1可見乳癌癌組織TMEM158、CTEN陽性表達率顯著高于癌旁組織。

圖1 免疫組化染色圖(200×)A：癌旁組織TMEM158表達；B：乳腺癌TMEM158表達；C：癌旁組織CTEN表達；D：乳腺癌CTEN表達

表1 乳腺癌和癌旁組織TMEM158、CTEN陽性表達率 (例，%)

2.2 TMEM158與乳腺癌臨床病理關系

腫瘤直徑≥2 cm、Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移、PR陰性、ER陰性、Ki-67陰性組織TMEM158陽性表達率顯著高于腫瘤直徑<2 cm、Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移、PR陽性、ER陽性和Ki-67陽性組織。具體數(shù)據(jù)見表2。

2.3 CTEN與乳腺癌臨床病理關系

腫瘤直徑≥2 cm、組織學分級3級、Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移、PR陰性組織CTEN陽性表達率明顯高于腫瘤直徑<2 cm、1級、Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移、PR陽性組織。具體見表3。

2.4 相關性分析

乳腺癌組織TMEM158與CTEN蛋白表達呈顯著正相關，見表4。

表2 TMEM158與乳腺癌患者病理關系

表3 CTEN與乳腺癌患者病理關系

表4 相關性分析

3 討 論

乳腺系統(tǒng)惡性腫瘤的發(fā)生，能夠在患者生存預后、短期內(nèi)生活質量方面產(chǎn)生顯著的影響，進而導致乳腺癌患者整體臨床結局的惡化[6-7]。在雌激素受體密度異常、長期高精神壓力或者快生活節(jié)奏的群體中，乳腺導管或者小葉上皮細胞惡性病變的風險可持續(xù)上升[8]。乳腺癌臨床病理學評價對乳腺癌早期篩查和乳腺癌化療及隨訪提供參考。分子標記物包括乳腺癌胚抗原或者甲胎蛋白等在內(nèi)的相關腫瘤標志物，對于乳腺癌臨床病理特征評估的可靠性較低，與乳腺癌發(fā)生發(fā)展的內(nèi)在聯(lián)系并不密切。腫瘤信號通路調控相關蛋白和腫瘤細胞間質蛋白，對細胞的癌變起著重要作用。本次研究提示乳腺癌患者病灶組織中TMEM158、CTEN的表達上調，可能為乳腺癌的診斷和治療提供重要參考。

TMEM是跨膜蛋白家族成員，其對于腫瘤細胞膜上糖蛋白配體的激活，能夠影響到雙層脂質膜結構的改變，導致癌細胞膜內(nèi)側G蛋白偶聯(lián)通路的激活，進而激活第二信使，導致腫瘤細胞核轉錄基因的異常激活[9]；CTEN為羧基張力蛋白家族的一員，通過對癌細胞骨架結構的影響，降低癌細胞的黏附力，促進癌細胞的侵襲和轉移[10-11]。有文獻報道，在乳腺癌患者中，CTEN蛋白的表達濃度水平可隨著乳腺癌病情的惡化而上升[12-13]，但對于TMEM158的探討較少。

雌激素受體(ER)，孕激素受體(PR)是性激素受體，存在于正常乳腺上皮細胞中，ER，PR可以調節(jié)乳腺細胞的增殖和乳腺的生長發(fā)育。當細胞癌變時，ER，PR或存在或消失，因此將乳腺癌分為兩類：一類為非激素依賴性乳腺癌，表現(xiàn)為雌激素和孕酮在乳腺癌細胞中不表達，ER和PR消失，內(nèi)分泌激素不再調節(jié)乳腺癌的生長和增殖，這種類型腫瘤分化差，預后差。另一類為激素依賴性乳腺癌，表現(xiàn)為ER和PR在乳腺癌細胞中正常表達，ER、PR甚至存在內(nèi)分泌激素，影響乳腺癌的生長和增殖，這種類型腫瘤分化程度高，預后良好。Ki-67是一種與細胞周期相關的蛋白，它只在人增殖細胞的G1、S、G2、M期表達，但在G0期無表達。乳腺癌患者ER、PR、Ki-67和年齡無顯著性差異，但PR的表達與乳腺癌的臨床分期有關。

本次研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌患者病灶組織的TMEM158、CTEN蛋白的表達陽性率顯著高于乳腺癌旁組織，表明TMEM158、CTEN在乳腺癌患者中存在較高的表達。其機制主要是TMEM158能夠在腫瘤信號通路MAPK的激活、癌細胞偽足形成、細胞間質分解等方面發(fā)揮作用，進而整體性影響乳腺癌細胞的生物學行為；CTEN能夠促進癌細胞上皮-間質轉換過程，促進腫瘤細胞對于乳腺基底膜組織的浸潤，從而影響到了乳腺癌的發(fā)生過程[14]。免疫組化染色發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌細胞異型性明顯或者癌細胞分化不佳的區(qū)域，TMEM158、CTEN的染色強度較深。腫瘤≥2 cm、Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移、PR陰性、ER陰性、Ki-67陰性組織中，TMEM156蛋白的表達陽性率較高，表明TMEM158能夠顯著促進乳腺癌臨床病理特征的進展。這主要由于TMEM158能夠提高跨膜受體的激活程度，促進癌細胞內(nèi)鈣離子調控的信號通路的激活，最終促進腫瘤細胞浸潤深度的增加和淋巴結轉移的發(fā)生。在PR陰性、ER陰性、Ki-67陰性的患者中，TMEM158蛋白的陽性率較高，主要由于乳腺癌相關受體陰性能夠通過負反饋調節(jié)機制，進而影響到跨膜內(nèi)外側蛋白的活性；在組織學分級3級、Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移、PR陰性組織的患者中，CTEN蛋白的表達陽性率較高，提示了CTEN蛋白的高表達同樣能夠顯著影響到乳腺癌患者的病情。這主要由于CTEN的高表達，能夠通過加劇癌細胞間層粘蛋白的分解速度，提高腫瘤細胞肌動蛋白的密度，進而影響到乳腺癌細胞的浸潤過程，影響到癌細胞對于淋巴結組織的侵襲[15]。相關關系分析發(fā)現(xiàn)，TMEM158與CTEN蛋白的表達具有一定的內(nèi)在相關關系，表明TMEM158與CTEN蛋白在影響乳腺癌病情進展的過程中可能發(fā)揮了重要的協(xié)調作用。

綜上所述，乳腺癌組織TMEM158、CTEN表達明顯上調，與臨床病理特征有一定關系，兩者表達呈正相關。