黑斑原鮡卵黃囊期仔魚生長與發(fā)育的研究

陳彥伶，鄧曉川，李 華，杜 軍，楊煥超

(四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水產(chǎn)研究所，四川省生物資源保護(hù)與可持續(xù)利用實驗室，四川 成都 611731)

【研究意義】黑斑原鮡(Glyptosternummaculatum)，隸屬于鲇形目(Silurformes)、鮡科(Sisoridae)、原鮡屬(Glyptosternon)，是鰋鮡魚類的原始物種[1]。在我國主要分布在雅魯藏布江波密至日喀則江段的干流及支流中，是藏區(qū)高檔的經(jīng)濟(jì)魚類之一，目前種質(zhì)資源衰竭嚴(yán)重?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】現(xiàn)有對黑斑原鮡的相關(guān)研究主要在其系統(tǒng)分類地位[2-3]、消化系統(tǒng)[4]、外部形態(tài)學(xué)[5]、繁殖生物學(xué)[6-7]等方面?！颈狙芯壳腥朦c】對于黑斑原鮡仔魚發(fā)育的研究還未見報道。【擬解決的關(guān)鍵問題】本文對黑斑原鮡卵黃囊期仔魚的發(fā)育特點進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，以期豐富黑斑原鮡仔魚發(fā)育期的基礎(chǔ)研究，同時為黑斑原鮡早期仔魚的培育提供基礎(chǔ)資料，對提高其仔魚早期發(fā)育過程中的成活率具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 實驗材料與飼養(yǎng)管理

黑斑原鮡仔魚在四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水產(chǎn)研究所基地孵化獲得。養(yǎng)殖用水為曝氣后的地下井水，溶解氧為8.36～11.62 mg/L(平均10.63 mg/L)，pH 6.52～7.89。

實驗期間暫養(yǎng)池用直徑90 cm，高25 cm的塑料圓盤，將囤水池中的水用直徑0.6 cm塑料軟管分兩股引入暫養(yǎng)池，中央排水，水深保持在10 cm左右。仔魚14 日齡開始投喂，開口餌料用浮游動物(輪蟲為主，有少量枝角類)，后期加入鰻魚微粒飼料。剛開口階段每天投喂 4 次,后期每天投喂 3 次。實驗過程中采取 24 h 溢流式換水,每天排污 1 次, 養(yǎng)殖期間水溫保持在(14±1) ℃。

1.2 研究方法與數(shù)據(jù)處理

仔魚出膜當(dāng)日記為0日齡，從0日齡開始每天隨機(jī)抽取10尾，用Leica DM2500體視顯微鏡觀察10 尾樣本的外部形態(tài)變化，用 zen軟件采集圖像，測量全長、體高和眼徑等各個指標(biāo)，精確到0.01 mm，并用SECURA124-1CN型電子分析天平稱量體重，精確到0.01 mg。

實驗數(shù)據(jù)采用spaa 22軟件處理與顯著性統(tǒng)計分析，P<0.05為差異顯著；用線性回歸進(jìn)行曲線估算，以R2最大值和F最大值擬合回歸線性。卵黃囊體積計算公式：V=πRr2/6(R為卵黃囊長徑,r為卵黃囊短徑)。

2 結(jié)果與分析

2.1 黑斑原鮡卵黃囊期仔魚發(fā)育的形態(tài)特征

孵出期(圖1-1)。剛出膜的仔魚體透明，身體纖細(xì)，鰭褶較窄，頭部與卵黃囊尚未分離,勾向卵黃囊彎曲，呈弧形，與身體縱軸成90°，整個卵黃囊均呈淡黃色，形似球形，囊內(nèi)隱約可見血管；眼睛晶狀體透明，聽囊和耳石晶體清晰可見(圖1-1-a，E，H)。仔魚多靜息在水底，側(cè)臥，無明顯運動。

胸鰭原基期(圖1-2)。頭部稍微離開卵黃，與身體縱軸成120°夾角。卵黃囊呈橢圓型。 胸鰭原基出現(xiàn)，半月形。心臟在卵黃囊前下方，心房、心室清晰，心臟收縮舒張有力，心率 67～75次/min，頭部與卵黃囊分離，卵黃囊內(nèi)血管明顯增多，有血液流動，口凹開始形成，向兩邊凸顯呈三角形，眼囊輪廓清晰，視網(wǎng)膜有黑色素沉積，眼囊前方有橢圓形嗅囊(圖1-2-a，PF1，O)。仔魚能靠不停擺動尾部維持正臥。

眼色素沉積期(圖1-3)?？诹焉舷骂M骨分離，口前明顯可見頜須，下頜微微上下合動，口裂出現(xiàn)，頭部進(jìn)一步伸直，遠(yuǎn)離卵黃囊，與身體縱軸成150°夾角。整個眼睛呈黑色，嗅囊、聽囊均擴(kuò)大，頭部皮膚開始出現(xiàn)零星黑色素斑點，體色變深。卵黃囊內(nèi)主動脈血管形成一個U型線，心臟血液流動明顯；魚體鰭褶逐漸增大，尾椎微微上翹 (圖1-3-a，LE，B)。在受刺激的情況下，仔魚能靠尾部擺動以螺旋軌跡迅速游串。

胸鰭形成(圖1-4)。鰭褶變窄，胸鰭移向腹面，呈扇狀；卵黃囊縱軸明顯短于橫軸，3對頜須均可見。鰓部血液流動明顯，鰓弓上出現(xiàn)突起，鰓絲逐漸形成，身體黑色素進(jìn)一步沉積，形成交織網(wǎng)紋覆蓋身體頭部。魚苗身體由側(cè)臥開始轉(zhuǎn)為腹面向下，魚苗活動能力增強(qiáng)，可以上下游動，此時在養(yǎng)殖池內(nèi)放入光滑的鵝卵石，仔魚大部分隱藏在石塊下，有明顯的負(fù)趨光性。

細(xì)齒出現(xiàn)(圖1-5)。鼻孔間的瓣膜開始出現(xiàn)，上頜須從嘴角兩邊伸出與頭部成垂直生長，卵黃囊明顯縮小呈紡錘體，體積減少過半，耳囊逐漸消退；口內(nèi)絨毛狀細(xì)齒在上下頜均出現(xiàn)；腸道開始形成，肝臟開始發(fā)育，從體側(cè)看呈白色小橢圓形(圖版1-5-a，T，L)，魚體開始變?yōu)楸馄?，集群現(xiàn)象十分明顯。

背鰭分化(圖1-6)。背鰭與鰭褶可以明顯分開，尾鰭支鰭條出現(xiàn)，頜須末端尖細(xì)，腸道逐漸發(fā)育貫通，仔魚 18日齡開口攝食，肝臟進(jìn)一步發(fā)育變大，從腹面看呈近似白色三角形(圖1-6-a，L)。

尾鰭形成(圖1-7) 。頭部、背部、肌節(jié)部位色素進(jìn)一步增加，吻須進(jìn)一步增寬增長, 尾鰭與周邊的鰭褶界限明顯，背鰭和尾鰭完全形成，尾鰭近于平截。鰓蓋增大，硬度增加。卵黃囊進(jìn)一步縮小，在30日齡時基本消失，胃內(nèi)可見消化中的食物，腸內(nèi)充滿食物，腸內(nèi)有黃色油滴，開始排出胎糞。投喂輪蟲類浮游動物+鰻魚粉粒料效果良好，魚苗開始逐漸轉(zhuǎn)到外源性營養(yǎng)階段。

2.2 卵黃囊期黑斑原鮡仔魚生長狀況

將體質(zhì)量、體長、體高、眼徑、卵黃囊的橫軸和縱軸進(jìn)行測量，用公式估算出卵黃囊體積，并通過多重比較檢驗，比較分析其差異性是否顯著(表1)，同時用卵黃囊體積與分別與日齡、體質(zhì)量、體長、體高、眼徑進(jìn)行回歸分析。

2.2.1 卵黃囊體積與日齡的關(guān)系 如圖2所示，仔魚卵黃囊體積隨著日齡遞增呈負(fù)相關(guān)，先減少較快，中后期相對較慢，擬合曲線用對數(shù)函數(shù)為最優(yōu)。

2.2.2 卵黃囊體積與體重的關(guān)系 如圖3所示，卵黃囊消失較快體重增長較慢，隨著苗種開始攝食，卵黃囊消失速度趨緩，體重增加變快，擬合三次函數(shù)為最優(yōu)方程。

1.0日齡早期仔魚；2.1日齡早期仔魚；3.2日齡早期仔魚；4.6日齡早期仔魚；5.10 日齡早期仔魚；6.20日齡早期仔魚；7.30 日齡早期仔魚;H:聽囊；O:嗅囊；E:眼睛；PF1:胸鰭；B:吻須；LE:晶狀體；L:肝1. Hatching stage prelarvae; 2. 1 day age prelarvae; 3. 2 day age prelarvae; 4. 6 day age prelarvae; 5. 10 day age prelarvae; 6. 20 day age prelarvae; 7. 30 day age prelarvae; H:hearing;O: olfactory organ; E: eye; PF1: posterior fin;B:barbell;LE:lens; L:liver圖1 黑斑原鮡卵黃囊期仔魚發(fā)育Fig.1 Postembryonic development of yolk-sac Larvae of Glyptosternon maculatum

表1 黑斑原鮡卵黃囊期仔魚的形態(tài)發(fā)育指標(biāo)

圖2 黑斑原鮡卵黃囊期仔魚日齡與卵黃囊體積的關(guān)系(仔魚從0日齡到35日齡)Fig.2 Lorrelation between the yolk-sac volume and day age of yolk-sac larvae of Glyptosternum maculatum (From hatching to Day 35)

2.2.3 卵黃囊體積與全長、體高、體長、眼徑的關(guān)系 如圖4所示，隨著卵黃囊體積減小，全長和體長之間與倒數(shù)的方程擬合度R2較高，體高和眼徑與卵黃囊體積之間函數(shù)相關(guān)性較低。

3 討 論

3.1 黑斑原鮡幼魚發(fā)育特點

黑斑原鮡的初孵仔魚主要運動能力靠鰭褶，寬大的鰭褶對身體起左右平衡的作用。從初孵化到平游前，仔魚基本沒有主動游泳能力，大部分時間在水體底部側(cè)躺，隨著各鰭的發(fā)育，此階段仔魚鰭游泳能力增強(qiáng)，仔魚開始表現(xiàn)出集群性，出現(xiàn)負(fù)趨光性，大部分躲避在鵝卵石下方，或是池底避光的位置。

圖3 黑斑原鮡卵黃囊期仔魚體重與卵黃囊體積的關(guān)系(仔魚從0 日齡到 35 日齡)Fig.3 Lorrelation between the yolk-sac volume and weight of yolk-sac larvae of Glyptosternum maculatum (From hatching to Day 35)

剛孵出仔魚沒有攝食能力，為內(nèi)源性營養(yǎng)期，完全依靠卵黃囊為其提供營養(yǎng)源，此時卵黃營養(yǎng)對于仔魚的生存和發(fā)育具有非常重要的意義。內(nèi)源性營養(yǎng)向外源性營養(yǎng)過度階段是仔魚的開口期, 也是仔魚發(fā)育的關(guān)鍵期，仔魚各個器官的快速發(fā)育和營養(yǎng)攝取從內(nèi)源向外源轉(zhuǎn)換兩者作用的疊加，易造成仔魚大量死亡[9]。故在魚苗培育生產(chǎn)實踐中，應(yīng)創(chuàng)造有利于其開口攝食的環(huán)境條件，以減少仔魚的死亡率。

圖4 黑斑原鮡卵黃囊期仔魚各部分生長與卵黃囊體積的關(guān)系(仔魚從0 日齡到 35 日齡)Fig.4 Lorrelation between the yolk-sac volume and the body parts of yolk-sac larvae of Glyptosternum maculatum (From hatching to Day 35)

表2 黑斑原鮡與其他鲇魚早期仔魚發(fā)育特點的比較

將黑斑原鮡幼魚分別與其它鲇形目的卵黃囊仔魚時期發(fā)育的特點進(jìn)行比較，見表2。黑斑原鮡出膜時體型相對較大，但生長十分緩慢，這與其生活在低溫環(huán)境有直接關(guān)系。同時黑斑原鮡仔魚混合營養(yǎng)期相對較長，在卵黃囊消失前很長一段就開始攝食，這有利于仔魚練習(xí)攝食，減少因無法開口導(dǎo)致的死亡；還與其生活在高原冷水性地區(qū)，攝取食物相對較困難，較長混合營養(yǎng)期可以體高其存活率，這也是長期自然選擇下其適應(yīng)環(huán)境的一種表現(xiàn)。

3.2 黑斑原鮡卵黃囊體積變化與其他生長指標(biāo)的回歸分析

現(xiàn)有研究主要集中在對仔魚日齡與身體各個部分之間函數(shù)關(guān)系，建立異速生長模型[17-19]，魚類在長期進(jìn)化過程中為適應(yīng)環(huán)境，形成不同存活策略和個體發(fā)育機(jī)制，不同種類會優(yōu)先發(fā)育對其存活起首要作用的器官，同一物種在不同發(fā)育階段的優(yōu)先性發(fā)育部位也會有所不同。

本試驗通過研究黑斑原鮡卵黃囊體積與其他生長指標(biāo)的函數(shù)關(guān)系，旨在了解黑斑原鮡仔魚在內(nèi)源性營養(yǎng)和混合營養(yǎng)階段，卵黃囊對其生長發(fā)育的影響。卵黃囊在混合營養(yǎng)時期隨日齡的增加，而呈對數(shù)性的線性減少；卵黃囊體積在開始隨體重增加而明顯減少，在開始攝食之后，在混合營養(yǎng)期，卵黃囊體積減少趨勢相對減緩，使得黑斑原鮡混合營養(yǎng)期較長，全長和體長與卵黃囊表現(xiàn)出倒數(shù)函數(shù)關(guān)系，卵黃囊隨全長和體長的增加也逐漸減少直至消失，體高、眼徑與卵黃囊體積變化線性較弱，前期體高隨卵黃囊形態(tài)變化顯著有關(guān)，眼徑在發(fā)育過程中作為重要的感覺器官，通常是最快完成快速發(fā)育[19]，因而與卵黃囊體積變化相關(guān)性較低。

4 結(jié) 論

根據(jù)黑斑原鮡早期的發(fā)育特點，選擇在開口初期(18 d)開始投喂充足適口的開口餌料, 使其早期能順利渡過開口期，過渡到外源營養(yǎng)期，提高魚苗的成活率。