土壤因子對(duì)棉花黃萎病拮抗菌Bacillus velezensis BHZ-29數(shù)量及抑菌活性的影響

黨文芳，李雪艷，楊紅梅，楚 敏，高 雁，曾 軍，霍向東， 張 濤，林 青，歐提庫(kù)爾，李玉國(guó)，婁 愷，史應(yīng)武,3,4 *

(1.新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,新疆 烏魯木齊 830052；2. 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物應(yīng)用研究所,新疆 烏魯木齊 830091；3. 新疆特殊環(huán)境微生物實(shí)驗(yàn)室，新疆 烏魯木齊 830091；4. 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部西北綠洲農(nóng)業(yè)環(huán)境重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 新疆 烏魯木齊 830091)

【研究意義】近年來(lái)，棉花黃萎病的生物防治已成為研究熱點(diǎn)[1-2]。生防細(xì)菌因其對(duì)環(huán)境無(wú)污染、病原菌特異性強(qiáng)、人類(lèi)和動(dòng)物傷害小等優(yōu)點(diǎn)成為生物防治中的優(yōu)勢(shì)菌群[3-4]。在生物防治中，由于生防微生物的生防效果受環(huán)境等多種因素的影響，使生防微生物的防效存在不穩(wěn)定性[5]。棉田土壤環(huán)境的復(fù)雜性和土壤理化性質(zhì)等土壤條件都將成為制約生防細(xì)菌在棉花根際土壤環(huán)境中穩(wěn)定定殖的關(guān)鍵因素[6-9]，研究土壤理化性質(zhì)對(duì)生防細(xì)菌數(shù)量的影響，有助于了解生防細(xì)菌在土壤中的定殖情況，進(jìn)而為生防細(xì)菌的大田應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】梁宏等[10]評(píng)價(jià)了在大田環(huán)境中生防菌能否在棉株根際穩(wěn)定繁殖，并在根際微生物群落中是否占據(jù)優(yōu)勢(shì)地位決定了生防菌對(duì)棉花黃萎病的防治效果。趙鳴等[11]評(píng)價(jià)了拮抗微生物只有在活體形式下才能發(fā)揮防病作用，而拮抗微生物所處的環(huán)境條件會(huì)嚴(yán)重影響拮抗微生物的存活和繁殖情況，進(jìn)而影響其防病效果；并且評(píng)價(jià)了不同環(huán)境條件下拮抗微生物的防病效果存在明顯差異：很多微生物在滅菌土壤或溫室內(nèi)防病效果較好，但在田間自然土壤中防病效果卻很差。有關(guān)拮抗微生物在植株內(nèi)定殖及其防效研究較多，而拮抗微生物與土壤環(huán)境的相關(guān)性研究報(bào)道卻很少[12-14]。高圣風(fēng)等[15]研究了生防芽孢桿菌VD18R19在香草蘭上定殖數(shù)量的時(shí)間動(dòng)態(tài)變化， 且通過(guò)田間試驗(yàn)檢測(cè) VD18R19 在自然發(fā)病的條件下對(duì)香草蘭根腐病的生防效果。【本研究切入點(diǎn)】棉花黃萎病拮抗微生物的分離以及防病機(jī)理的研究不斷深入[16-19]，很多研究人員也把棉花黃萎病拮抗研究方向轉(zhuǎn)移到了生物防治的應(yīng)用方面[20-21]?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】以新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物應(yīng)用研究所史應(yīng)武團(tuán)隊(duì)已分離的棉花黃萎病拮抗細(xì)菌BacillusvelezensisBHZ-29為基礎(chǔ)，旨在研究平皿條件下土壤理化性質(zhì)對(duì)棉花黃萎病拮抗細(xì)菌BacillusvelezensisBHZ-29和V.dahliensis數(shù)量的影響，揭示拮抗細(xì)菌在土壤不同理化條件下的定殖能力和對(duì)V.dahliensis的抑制能力。為進(jìn)一步的盆栽及大田應(yīng)用提供數(shù)據(jù)支撐，為棉花黃萎病生物防治的實(shí)際應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 土樣 取自烏魯木齊安寧渠試驗(yàn)場(chǎng)灰漠土。由中國(guó)科學(xué)院新疆生態(tài)與地理研究所胡明芳老師測(cè)定該土壤的理化性質(zhì)，其中有機(jī)質(zhì)含量15.2 g/kg，全氮0.868 g/kg，全磷0.667 g/kg，全鉀19.8 g/kg，堿解氮55.2 mg/kg，速效磷3.4 mg/kg，速效鉀288 mg/kg，緩效鉀1567 mg/kg，pH 8.1，CEC 16.2 mg/100g土，土壤容重平均為1.25 g/cm3。

1.1.2 供試病原菌V.dahliensis(Verticilliumdahliae)由新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所劉海洋副研究員饋贈(zèng)。

1.1.3 供試拮抗菌BacillusvelezensisBHZ-29為實(shí)驗(yàn)室已分離篩選獲得的1株棉花健康相關(guān)優(yōu)勢(shì)內(nèi)生拮抗細(xì)菌。

1.1.4 供試培養(yǎng)基 NB培養(yǎng)基：蛋白胨10 g，牛肉浸出粉3 g，氯化鈉5 g，蒸餾水1000 mL，pH 7.2±0.2。121 ℃滅菌15 min。

NA培養(yǎng)基：蛋白胨10 g，牛肉粉3 g，氯化鈉5 g，瓊脂15 g，蒸餾水1000 mL，pH 7.3±0.1。121 ℃滅菌15 min。

孟加拉紅培養(yǎng)基：蛋白胨5 g，葡萄糖10 g，磷酸二氫鉀1 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，瓊脂20 g，孟加拉紅0.0333 g，氯霉素0.1 g。121 ℃滅菌15 min。

Czapek’s培養(yǎng)基：NaNO33 g，K2HPO31 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，KCl 0.5 g，F(xiàn)eSO4·4H2O 0.01 g，蔗糖30 g，蒸餾水1000 mL，pH 6.5。121 ℃滅菌15 min。

1.1.5 主要試劑 0.85 %氯化鈉溶液：稱(chēng)取0.85 g氯化鈉用蒸餾水定容至100 mL。

尿素、KH2PO4、碳酸鈉、重碳酸鈉、氯化鈉、氯化鈣、氯化鎂、硫酸鎂、硫酸鈉、鹽酸、氫氧化鈉。

以上試劑均為分析純。

1.1.6 主要儀器 儀器：ZHWY-211B型落地普通型大容量全溫度恒溫培養(yǎng)振蕩器(上海智誠(chéng)分析儀器制造有限公司)；SWCGCO型超凈工作臺(tái)(蘇州凈化設(shè)備有限公司)；SPX-250BF-2型生化培養(yǎng)箱精密液晶型(上海?，攲?shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；YXQ-LS-75SⅡ型立式壓力蒸汽滅菌器(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 土樣的滅菌、病原菌種子液制備、拮抗細(xì)菌BHZ-29種子液制備同文獻(xiàn)[22]。

1.2.2 土壤理化性質(zhì)對(duì)拮抗細(xì)菌BacillusvelezensisBHZ-29數(shù)量的影響 土壤水分對(duì)拮抗細(xì)菌BHZ-29數(shù)量的影響。試驗(yàn)設(shè)3個(gè)土壤水分處理，土壤相對(duì)含水率分別為 25 %、37.5 %、50 %。每個(gè)土壤含水率處理中有3個(gè)處理，不加菌、加V.dahliensis和BHZ-29、只加BHZ-29，其中不加菌為對(duì)照。每個(gè)處理重復(fù)3次。稱(chēng)量10，15，20 mL滅菌水于培養(yǎng)皿中，其中V.dahliensis3 mL，BHZ-29 1 mL，搖勻后再稱(chēng)取40 g土壤于培養(yǎng)皿中，放入28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔10 d進(jìn)行平板計(jì)數(shù)，確定V.dahliensis和BHZ-29的數(shù)量。試驗(yàn)開(kāi)始后，每天下午6：00用稱(chēng)重法測(cè)定土壤容積含水量，補(bǔ)充當(dāng)天失去的水分，使各處理保持設(shè)定的含水量。

土壤肥力對(duì)生防細(xì)菌BHZ-29數(shù)量的影響。試驗(yàn)設(shè)3個(gè)土壤肥力處理，分別為1 T、2 T、3 T，(由尿素和KH2PO4通過(guò)從大田中換算在培養(yǎng)皿中的比例混入蒸餾水中滅菌后使用)。每個(gè)肥力處理中有3個(gè)處理，不加菌、加V.dahliensis和BHZ-29、只加BHZ-29，其中不加菌為對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)3次。稱(chēng)量15 mL滅菌肥力水于培養(yǎng)皿中，其中加V.dahliensis3 mL，BHZ-29 1 mL，搖勻后再稱(chēng)取40 g土壤于培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)方式同土壤水分處理，其中用滅菌肥力水補(bǔ)充當(dāng)天失去的水分。

土壤鹽分對(duì)拮抗細(xì)菌BHZ-29數(shù)量的影響。試驗(yàn)設(shè)3個(gè)土壤鹽分處理，含鹽率分別為 0 %、0.3 %、0.6 %(由碳酸鈉、重碳酸鈉、氯化鈉、氯化鈣、氯化鎂、硫酸鎂、硫酸鈉 7 種鹽類(lèi)成分等比例混入蒸餾水中滅菌后使用)。每個(gè)鹽分處理中有3個(gè)處理，不加菌、加V.dahliensis和BHZ-29、只加BHZ-29，其中不加菌為對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)3次。稱(chēng)量15 mL滅菌鹽分水于培養(yǎng)皿中，其中加V.dahliensis3 mL，BHZ-29 1 mL，搖勻后再稱(chēng)取40 g土壤于培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)方式同土壤水分處理，其中用滅菌鹽分水補(bǔ)充當(dāng)天失去的水分。

土壤pH對(duì)拮抗細(xì)菌BHZ-29數(shù)量的影響。試驗(yàn)設(shè)3個(gè)土壤pH處理，分別調(diào)滅菌水pH于5，7，9。每個(gè)pH處理中有3個(gè)處理，不加菌、加V.dahliensis和BHZ-29、只加BHZ-29，其中不加菌為對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)3次。稱(chēng)量15 mL滅菌水于培養(yǎng)皿中，其中加V.dahliensis3 mL，BHZ-29 1 mL，搖勻后再稱(chēng)取40 g土壤于培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)方式同土壤水分處理，其中用已調(diào)過(guò)pH的滅菌水補(bǔ)充當(dāng)天失去的水分。

土壤溫度對(duì)拮抗細(xì)菌BHZ-29數(shù)量的影響。試驗(yàn)設(shè)3個(gè)溫度處理，溫度分別為15、20、30 ℃。每個(gè)溫度處理中有3個(gè)處理，不加菌、加V.dahliensis和BHZ-29、只加BHZ-29，其中不加菌為對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)3次。稱(chēng)量15 mL滅菌水于培養(yǎng)皿中，其中加V.dahliensis3 mL，BHZ-29 1 mL，搖勻后再稱(chēng)取40 g土壤于培養(yǎng)皿中，放入15、20、30 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)方式同土壤水分處理。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理與分析 本研究采用SPSS Statistics 22、GraphPad Prism 6和Excel軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析并作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 土壤水分含量對(duì)拮抗細(xì)菌BHZ-29數(shù)量的影響

從圖1可知，在不同土壤水分含量下，棉花黃萎病拮抗細(xì)菌BHZ-29隨著時(shí)間的延長(zhǎng)均呈下降趨勢(shì)。只接種棉花黃萎病拮抗細(xì)菌BHZ-29的土壤中，在土壤含水量在37.5 %時(shí)BHZ-29的數(shù)量下降趨勢(shì)最緩慢，接著是土壤含水量在50 %時(shí)，而在土壤含水量在25 %的土壤中下降速度最快。從圖2可知，接種棉花黃萎病拮抗細(xì)菌BHZ-29后V.dahliensis在土壤不同含水量條件下的數(shù)量均比只接種V.dahliensis的土壤中的數(shù)量高，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，不同土壤含水量條件下土壤中V.dahliensis數(shù)量變化呈25 % > 37.5 % > 50 %，而圖1中，不同土壤含水量條件下土壤中BHZ-29的數(shù)量變化呈37.5 % > 50 % > 25 %?？傮w而言，接種V.dahliensis和BHZ-29兩種菌后BHZ-29在不同土壤含水量條件下的數(shù)量變化較只接種棉花黃萎病生防細(xì)菌BHZ-29的土壤中BHZ-29在不同土壤含水量條件下的數(shù)量變化較慢，且根據(jù)數(shù)量變化推測(cè)在3種土壤含水量條件下土壤含水量在37.5 %左右時(shí)更適宜BHZ-29的生長(zhǎng)。

A:只施BHZ-29；B：同施BHZ-29和大麗輪枝菌。不同的小寫(xiě)字母代表同一時(shí)間下不同處理間BHZ-29數(shù)量變化的差異顯著(P<0.05) A: Single application of BHZ-29 bacteria; B: BHZ-29 bacteria and V. dahliae. Different lowercase letters represent significant differences in the number of BHZ-29 changes between treatments at the same time (P<0.05)圖1 不同土壤水分含量下棉花黃萎病拮抗細(xì)菌BHZ-29的數(shù)量變化Fig.1 Variation of number of biocontrol bacteria BHZ-29 against cotton verticillium wilt under different soil moisture content

2.2 土壤肥力對(duì)拮抗細(xì)菌BHZ-29數(shù)量的影響

從圖3可知，不同土壤肥力條件下，棉花黃萎病拮抗細(xì)菌BHZ-29隨著時(shí)間的延長(zhǎng)均呈下降趨勢(shì)。只接種棉花黃萎病拮抗細(xì)菌BHZ-29的土壤中，在土壤肥力在3T時(shí)BHZ-29的數(shù)量下降趨勢(shì)最緩慢，接著是土壤肥力在2T時(shí)，而在土壤肥力在1T的土壤中下降速度最快。從圖4可知，接種棉花黃萎病拮抗細(xì)菌BHZ-29后V.dahliensis在土壤不同肥力條件下的數(shù)量均比只接種V.dahliensis的土壤中的數(shù)量高，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，在不同土壤肥力下土壤中V.dahliensis數(shù)量變化呈3T >1T >2T，而圖3中，在不同土壤肥力下土壤中BHZ-29的數(shù)量變化呈3T>2T>1T?？傮w而言，接種V.dahliensis和BHZ-29兩種菌后BHZ-29在不同土壤肥力條件下的數(shù)量變化相較只接種棉花黃萎病生防細(xì)菌BHZ-29的土壤中BHZ-29在不同土壤肥力條件下的數(shù)量變化較慢，且根據(jù)數(shù)量變化推測(cè)在3種土壤肥力條件下土壤肥力含量在3T時(shí)更適宜BHZ-29的生長(zhǎng)。

A:只施BHZ-29；B：同施BHZ-29和大麗輪枝菌。不同的字母代表同一時(shí)間下不同處理間大麗輪枝菌數(shù)量變化的差異顯著(P<0.05) A: Single application of BHZ-29 bacteria; B: BHZ-29 bacteria and V. dahliae. Different letters represent significant differences in the number of V. dahliensis changes between treatments at the same time(P<0.05)圖2 不同土壤水分含量下V. dahliensis 的數(shù)量變化Fig.2 Variation of number of V. dahliensis under different soil moisture content

A:只施BHZ-29；B：同施BHZ-29和大麗輪枝菌。不同的小寫(xiě)字母代表同一時(shí)間下不同處理間BHZ-29數(shù)量變化的差異顯著(P<0.05) A: Single application of BHZ-29 bacteria; B: BHZ-29 bacteria and V. dahliae. Different lowercase letters represent significant differences in the number of BHZ-29 changes between treatments at the same time (P<0.05)圖3 不同土壤肥力條件下棉花黃萎病拮抗細(xì)菌BHZ-29的數(shù)量變化Fig.3 Variation of number of biocontrol bacteria BHZ-29 against cotton verticillium wilt under different soil fertility

A:只施BHZ-29；B：同施BHZ-29和大麗輪枝菌。不同的字母代表同一時(shí)間下不同處理間大麗輪枝菌數(shù)量變化的差異顯著(P<0.05) A: Single application of BHZ-29 bacteria; B: BHZ-29 bacteria and V. dahliae. Different letters represent significant differences in the number of V. dahliensis changes between treatments at the same time(P<0.05)圖4 不同土壤肥力下V. dahliensis 的數(shù)量變化Fig.4 Variation of number of V. dahliensis under different soil fertility

2.3 土壤鹽分對(duì)拮抗細(xì)菌BHZ-29數(shù)量的影響

由圖5可知，在不同土壤鹽分條件下，棉花黃萎病拮抗細(xì)菌BHZ-29隨著時(shí)間的延長(zhǎng)均呈下降趨勢(shì)。只接種棉花黃萎病拮抗防細(xì)菌BHZ-29的土壤中，在土壤鹽分含量在0.3 %時(shí)BHZ-29的數(shù)量下降趨勢(shì)最緩慢，接著是土壤鹽分含量在0.3 %時(shí)，而在無(wú)人為施加鹽分的土壤中下降速度最快。從圖6可知，接種棉花黃萎病拮抗細(xì)菌BHZ-29后V.dahliensis在土壤不同鹽分施加下的數(shù)量均比只接種V.dahliensis的土壤中的數(shù)量高，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，土壤鹽分含量在0.6 %的土壤中V.dahliensis數(shù)量相較土壤鹽分含量在0.3 %而言，其數(shù)量較大且變化較快，而圖5中，土壤鹽分含量在0.3 %土壤中BHZ-29的數(shù)量相較土壤鹽分含量在0.6 %而言，其數(shù)量變化較緩慢。總體而言，接種V.dahliensis和BHZ-29兩種菌后BHZ-29在不同土壤鹽分條件下的數(shù)量變化較只接種棉花黃萎病生防細(xì)菌BHZ-29的土壤中BHZ-29在不同土壤鹽分條件下的數(shù)量變化較快，且根據(jù)數(shù)量變化推測(cè)在3種土壤鹽分條件下土壤鹽分含量在0.3 %更適宜BHZ-29的生長(zhǎng)。

A:只施BHZ-29；B：同施BHZ-29和大麗輪枝菌。不同的小寫(xiě)字母代表同一時(shí)間下不同處理間BHZ-29數(shù)量變化的差異顯著(P<0.05) A: Single application of BHZ-29 bacteria; B: BHZ-29 bacteria and V. dahliae. Different lowercase letters represent significant differences in the number of BHZ-29 changes between treatments at the same time (P<0.05)圖5 不同土壤鹽分下棉花黃萎病拮抗細(xì)菌BHZ-29的數(shù)量變化Fig.5 Variation of number of biocontrol bacteria BHZ-29 against cotton verticillium wilt under different soil salinity

A:只施BHZ-29；B：同施BHZ-29和大麗輪枝菌。不同的字母代表同一時(shí)間下不同處理間大麗輪枝菌數(shù)量變化的差異顯著(P<0.05) A: Single application of BHZ-29 bacteria; B: BHZ-29 bacteria and V. dahliae. Different letters represent significant differences in the number of V. dahliensis changes between treatments at the same time(P<0.05)圖6 不同土壤鹽分下V. dahliensis 的數(shù)量變化Fig.6 Variation of number of V. dahliensis under different soil salinity

2.4 土壤pH對(duì)拮抗防細(xì)菌BHZ-29數(shù)量的影響

由圖7可知，在不同土壤酸堿處理下，棉花黃萎病拮抗細(xì)菌BHZ-29隨著時(shí)間的延長(zhǎng)均呈下降趨勢(shì)。只接種棉花黃萎病拮抗細(xì)菌BHZ-29的土壤中，在土壤pH 5時(shí)BHZ-29的數(shù)量下降趨勢(shì)最緩慢，接著是pH 9時(shí)，而在pH 7的土壤中下降速度最快。從圖8可知，接種棉花黃萎病拮抗細(xì)菌BHZ-29后V.dahliensis在土壤不酸堿處理下的數(shù)量均比只接種V.dahliensis的土壤中的數(shù)量高，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，pH 9的土壤中V.dahliensis數(shù)量相較pH 5而言，其數(shù)量較大且變化較快，而圖7中，pH 9土壤中BHZ-29的數(shù)量相較pH 5而言，其數(shù)量變化較緩慢?？傮w而言，接種V.dahliensis和BHZ-29兩種菌后BHZ-29在土壤不同酸堿處理下的數(shù)量變化相較只接種棉花黃萎病生防細(xì)菌BHZ-29的土壤中BHZ-29在土壤不同酸堿處理下的數(shù)量變化較緩慢，且根據(jù)數(shù)量變化推測(cè)在3種土壤酸堿處理下pH 9更適宜BHZ-29的生長(zhǎng)，即在堿性條件下更適宜BHZ-29的生長(zhǎng)。

A:只施BHZ-29；B：同施BHZ-29和大麗輪枝菌。不同的小寫(xiě)字母代表同一時(shí)間下不同處理間BHZ-29數(shù)量變化的差異顯著(P<0.05) A: Single application of BHZ-29 bacteria; B: BHZ-29 bacteria and V. dahliae. Different lowercase letters represent significant differences in the number of BHZ-29 changes between treatments at the same time (P<0.05)圖7 不同土壤pH下棉花黃萎病拮抗細(xì)菌BHZ-29的數(shù)量變化Fig.7 Variation of number of biocontrol bacteria BHZ-29 against cotton verticillium wilt under different soil pH

A:只施BHZ-29；B：同施BHZ-29和大麗輪枝菌。不同的字母代表同一時(shí)間下不同處理間大麗輪枝菌數(shù)量變化的差異顯著(P<0.05) A: Single application of BHZ-29 bacteria; B: BHZ-29 bacteria and V. dahliae. Different letters represent significant differences in the number of V. dahliensis changes between treatments at the same time(P<0.05)圖8 不同土壤pH下V. dahliensis 的數(shù)量變化Fig.8 Variation of number of V. dahliensis under different soil pH

A:只施BHZ-29；B：同施BHZ-29和大麗輪枝菌。不同的小寫(xiě)字母代表同一時(shí)間下不同處理間BHZ-29數(shù)量變化的差異顯著(P<0.05) A: Single application of BHZ-29 bacteria; B: BHZ-29 bacteria and V. dahliae.Different lowercase letters represent significant differences in the number of BHZ-29 changes between treatments at the same time (P<0.05)圖9 不同土壤溫度下棉花黃萎病拮抗細(xì)菌BHZ-29的數(shù)量變化Fig.9 Variation of number of biocontrol bacteria BHZ-29 against cotton verticillium wilt under different soil temperture

2.5 土壤溫度對(duì)拮抗細(xì)菌BHZ-29數(shù)量的影響

由圖9可知，在不同土壤溫度下，棉花黃萎病拮抗細(xì)菌BHZ-29隨著時(shí)間的延長(zhǎng)均呈下降趨勢(shì)。只接種棉花黃萎病拮抗細(xì)菌BHZ-29的土壤中，在土壤溫度為15 ℃時(shí)BHZ-29的數(shù)量下降趨勢(shì)最緩慢，接著是30 ℃，而在25 ℃土壤中下降速度最快。結(jié)合圖10棉花黃萎病V.dahliensis在土壤不同溫度下的數(shù)量變化來(lái)分析接種V.dahliensis和BHZ-29兩種菌后BHZ-29在土壤不同溫度下的數(shù)量變化。由圖10可知，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，25 ℃土壤中V.dahliensis數(shù)量相較30 ℃而言，其數(shù)量變化較緩慢，而圖9中，30 ℃土壤中BHZ-29的數(shù)量相較25 ℃而言，其數(shù)量變化較緩慢?？傮w而言，接種V.dahliensis和BHZ-29兩種菌后BHZ-29在土壤不同溫度下的數(shù)量變化相較只接種棉花黃萎病生防細(xì)菌BHZ-29的土壤中BHZ-29在土壤不同溫度下的數(shù)量變化較迅速，且根據(jù)數(shù)量變化推測(cè)在3種土壤溫度中30 ℃更適宜BHZ-29的生長(zhǎng)。

3 討 論

生防菌能否成為較好防治棉花黃萎病的微生物菌劑，除了生防菌具備穩(wěn)定性和持久性 的特點(diǎn)以外，更重要的是生防菌的定殖作用研究，定殖涉及了寄主植物、細(xì)菌、病原與土壤環(huán)境因子等對(duì)生防菌的影響。陳英化等[23]研究了棉花黃萎病內(nèi)生拮抗細(xì)菌C-28在棉苗根部的定殖狀況及其在棉花體內(nèi)的傳導(dǎo)作用。鹿秀云等[24]研究了棉花黃萎病內(nèi)生拮抗細(xì)菌L-4-2在棉苗根、莖內(nèi)的數(shù)量變化。目前，對(duì)于生防菌適應(yīng)棉田土壤理化環(huán)境的相關(guān)報(bào)道很少，且研究較零碎，缺乏系統(tǒng)性。王濤等通過(guò)盆栽試驗(yàn)，對(duì)棉花黃萎病拮抗細(xì)菌在土壤和棉花根際、根內(nèi)的定殖情況進(jìn)行了分析，且指出拮抗細(xì)菌在滅菌土中的定殖數(shù)量高于自然土中的數(shù)量[25-26]。

A:只施BHZ-29；B：同施BHZ-29和大麗輪枝菌。不同的字母代表同一時(shí)間下不同處理間大麗輪枝菌數(shù)量變化的差異顯著(P<0.05) A: Single application of BHZ-29 bacteria; B: BHZ-29 bacteria and V. dahliae. Different letters represent significant differences in the number of V. dahliensis changes between treatments at the same time(P<0.05)圖10 不同土壤溫度下V. dahliensis 的數(shù)量變化Fig.10 Variation of number of V. dahliensis under different soil temperture

在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)皿土壤環(huán)境中通過(guò)測(cè)量棉花黃萎病拮抗細(xì)菌BHZ-29和V.dahliensis的數(shù)量變化來(lái)進(jìn)行拮抗細(xì)菌適應(yīng)土壤理化環(huán)境及其抑菌活性的相關(guān)分析。為拮抗防細(xì)菌BHZ-29進(jìn)一步就盆栽及棉田土壤理化環(huán)境的研究提供理論依據(jù)。

4 結(jié) 論

以實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)皿土壤環(huán)境為基礎(chǔ)，進(jìn)行了棉花黃萎病拮抗細(xì)菌BHZ-29在不同土壤理化條件下的定殖研究。本文初步分析了棉花黃萎病拮抗細(xì)菌BHZ-29在新疆土壤不同理化性質(zhì)下的數(shù)量變化，研究結(jié)果表明：土壤理化性質(zhì)對(duì)拮抗細(xì)菌BHZ-29的定殖能力影響較顯著，綜合分析得出棉花黃萎病拮抗細(xì)菌BHZ-29更易在土壤溫度為30 ℃、相對(duì)含水量在37.5 %、土壤肥力為3T、土壤鹽分含量在0.3 %、堿性土壤中定殖；且棉花黃萎病拮抗細(xì)菌BacillusvelezensisBHZ-29會(huì)使V.dahliensis在土壤中的定殖能力變?nèi)?。從拮抗?xì)菌BHZ-29的數(shù)量變化趨勢(shì)來(lái)確定拮抗細(xì)菌BHZ-29的適宜環(huán)境生長(zhǎng)因子較單一，有待于進(jìn)一步根據(jù)新疆棉田的特點(diǎn)來(lái)進(jìn)行拮抗細(xì)菌BHZ-29的定殖能力研究。