“醫(yī)聯(lián)體”新模式支持下的益氣溫陽(yáng)方對(duì)慢性心力衰竭大鼠血漿血管緊張素II、醛固酮水平影響的實(shí)驗(yàn)研究

趙志強(qiáng)，韓林延，苑光芬，牟宗毅*

（1.琿春市中醫(yī)醫(yī)院，吉林 延邊 133300；2.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130021）

益氣溫陽(yáng)湯是以漢張仲景《金匱要略》中溫經(jīng)湯為基礎(chǔ)方加減化裁而來(lái)，經(jīng)趙志強(qiáng)醫(yī)生20余年廣泛應(yīng)用于慢性心力衰竭（CHF）在臨床取得較好療效，但其治療作用機(jī)制尚不十分明確，我科室2015年3月～2016年3月收治的心腎陽(yáng)虛型CHF患者80例作為研究對(duì)象，證明其總有效率達(dá)到90%[1]。近年來(lái)越來(lái)越多的研究證實(shí)以血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)和醛固酮 (ALD)為主導(dǎo)的神經(jīng)內(nèi)分泌激活是CHF發(fā)病的關(guān)鍵機(jī)制。AngⅡ和ALD水平可作為心衰嚴(yán)重程度以及療效判斷的重要指標(biāo)[2]，隨著對(duì)中醫(yī)藥治療CHF的重視程度的提高，相關(guān)中藥治療CHF時(shí)AngⅡ和ALD水平變化影響的報(bào)道逐漸增多。本研究通過隨機(jī)、對(duì)照的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，應(yīng)用益氣溫陽(yáng)方干預(yù)CHF大鼠模型，測(cè)定大鼠血漿中AngⅡ、ALD水平，探索此方治療CHF有效的可能機(jī)制。

1 材 料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)SD大鼠50只，雌雄各半，體重250～300 g。購(gòu)自于遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)股份有限公司，動(dòng)物合格證許可證號(hào)：SCXK（遼）2015-0001。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品的配制與試劑

①實(shí)驗(yàn)藥物采用北京康仁堂藥業(yè)有限公司的配方顆粒其基本方劑組成：吳茱萸，桂枝，當(dāng)歸，黃芪等13味中藥，每付共含生藥127 g。

②福辛普利鈉：規(guī)格：10 mg/片，批號(hào)：20181201，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H19980197 ，中美上海施貴寶制藥有限公司產(chǎn)品；③鹽酸阿霉素：規(guī)格：25 mg，批號(hào)：313A028，北京索萊寶科技有限公司產(chǎn)品；④AngII酶聯(lián)免疫試劑盒：規(guī)格，96T，批號(hào)：20190101A，美國(guó)R&D公司產(chǎn)品；⑤ALD酶聯(lián)免疫試劑盒：規(guī)格，96T，批號(hào)：20190101A，美國(guó)R&D公司產(chǎn)品。

2 方 法

2.1 實(shí)驗(yàn)用藥制備

益氣溫陽(yáng)方吳茱萸、黃芪、桂枝、當(dāng)歸等11味中藥免煎顆粒制劑購(gòu)自于北京康仁堂藥業(yè)有限公司，一付藥加蒸餾水60 ml研磨混勻后，繼續(xù)加蒸餾水定容至72.58 ml，配制為益氣溫陽(yáng)方混懸液，4℃保存?zhèn)溆?。?shí)驗(yàn)時(shí)，配制原液即為益氣溫陽(yáng)方高劑量組給藥制劑（相當(dāng)于人臨床用藥2倍）；將原液用蒸餾水稀釋2倍后，即為益氣溫陽(yáng)方低劑量組給藥制劑（相當(dāng)于人臨床用藥等倍）。

福辛普利鈉混懸液：稱取福辛普利鈉10 mg，加蒸餾水60 ml研磨混勻后，繼續(xù)加蒸餾水定容至72.58 ml，配制為福辛普利鈉混懸液，4℃保存?zhèn)溆?。?shí)驗(yàn)時(shí)，配制原液即為福辛普利鈉給藥制劑（相當(dāng)于人臨床用藥2倍）。

2.2 造模方法

慢性心力衰竭大鼠模型的復(fù)制：鹽酸阿霉素腹腔注射15 mg/kg，分6次2周內(nèi)注射完畢。

2.3 實(shí)驗(yàn)分組與給藥

將SPF級(jí)SD大鼠50只適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按體重以1:4比例分成2組：①空白對(duì)照組10只；②慢性心力衰竭造模組40只。動(dòng)物單籠飼養(yǎng)，自由進(jìn)食飲水。慢性心力衰竭造模組40只，腹腔注射鹽酸阿霉素腹腔注射15 mg/kg，分6次2周內(nèi)注射完?？瞻讓?duì)照組10只(Con)，腹腔注射生理鹽水，給藥容積同鹽酸阿霉素；在第4次腹腔注射阿霉素后慢性心力衰竭造模組隨機(jī)分為4組，模型組(Adr)、造模+低劑量益氣溫陽(yáng)組(AdrXm)、造模+高劑量益氣溫陽(yáng)組(AdrXh)、造模+福辛普利組(AdrF)。給藥方法：將大鼠分組后， 繼續(xù)完成造模， 同時(shí)開始予治療用藥(即Con、Adr組予生理鹽水灌胃；AdrXm組予低劑量益氣溫陽(yáng)方、AdrXh予高劑量益氣溫陽(yáng)方、AdrF予福辛普利6mg/kg·d-1灌胃，連續(xù)給藥21 d)。給藥方案：設(shè)定低劑量組為等效劑量，高劑量組為等效劑量的2倍。每公斤大鼠每日給藥體積為10 ml/kg。

2.4 大鼠血漿AngⅡ、ALD含量的測(cè)定

采血前每只大鼠準(zhǔn)備好2份試管，①AngⅡ測(cè)試管:加0.03 mol/L的EDTA·Na2、0.34 mol/L的8-羥基喹啉和0.32 mol/L的二巰醇各20 μl;②ALD測(cè)試管:加肝素抗凝。眼眶后靜脈叢取血約6 ml，分別滴入2個(gè)試管中，搖勻，離心(3000 r/min)，分離血漿(試管①、②)，置-20℃保存?zhèn)錂z，采用上述測(cè)試劑盒，按說(shuō)明書進(jìn)行測(cè)試，計(jì)算血管緊張素Ⅱ、醛固酮(ALD)水平。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，全部結(jié)果均用SPSS 10.0 for Windows10 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析處理。組間比較采用單因素方差分析。

3 結(jié) 果

與空白對(duì)照組相比較，模型組大鼠血漿AngII、ALD含量明顯升高 (P＜0.01)，證明模型組動(dòng)物心衰級(jí)別較嚴(yán)重，CHF動(dòng)物模型復(fù)制成功；與模型組比較，各治療組均可顯著降低AngII、ALD含量(P＜0.01)；造模+福辛普利組、造模+高劑量益氣溫陽(yáng)組動(dòng)物與模型組比較，其血漿中AngII、ALD含量明顯降低（P＜0.001）；造模+低劑量益氣溫陽(yáng)組動(dòng)物與模型組比較，其血漿中AngII、ALD含量顯著性降低（P＜0.05），證明益氣溫陽(yáng)方可減低CHF模型動(dòng)物心衰程度，改善心衰癥狀。其詳細(xì)結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠血漿Ang II、ALD含量變化（±s）

注：與模型組比較：***P＜0.001，**P＜0.01，*P＜0.05

組別 n Ang II nmol/L ALD nmol/L空白對(duì)照組 10 220.84±10.94***46.75±1.83***模型組 10 416.34±5.11 110.57±1.81造模+低劑量益氣溫陽(yáng)組 10 397.00±24.77* 98.65±12.97*造模+高劑量益氣溫陽(yáng)組 10 382.55±15.49***86.98±14.31***造模+福辛普利組 10 386.71±14.79***90.03±14.69***

4 討 論

現(xiàn)今中醫(yī)把CHF歸屬于“心悸、怔忡、咳喘、水腫、胸痹、積聚、虛勞”等范疇。該研究通過對(duì)CHF患者臨床證候?qū)W的研究發(fā)現(xiàn)，陽(yáng)氣虧虛、血淤水停為其主要病機(jī)，以益氣溫陽(yáng)主，活血利水為輔的有效治法，精心篩選了相應(yīng)藥物組成益氣溫陽(yáng)方，經(jīng)臨床運(yùn)用， 療效滿意。益氣溫陽(yáng)湯是以漢張仲景《金匱要略》中溫經(jīng)湯為基礎(chǔ)方加減化裁而來(lái)，為歷代醫(yī)家治療婦科疾病的常用方劑，其具有溫中寓養(yǎng)、溫中寓通、氣血雙補(bǔ)之特點(diǎn)，與中醫(yī)心腎陽(yáng)虛型“心水病”（心力衰竭）的治療大法極為契合，臨床應(yīng)用治療慢性心力衰竭屢收良效。應(yīng)用溫經(jīng)湯化裁而成的益氣溫陽(yáng)方治療心力衰竭，目前國(guó)內(nèi)尚無(wú)報(bào)道。方中吳茱萸、桂枝，溫經(jīng)散寒，通利血脈，其中吳茱萸功擅散寒止痛，桂枝長(zhǎng)于溫通血脈，共為君藥。黨參、黃芪、附子共為臣藥，益氣健脾，以資生化之源，陽(yáng)生陰長(zhǎng)，氣旺血充，助吳茱萸、桂枝以溫經(jīng)散寒。當(dāng)歸、丹參活血祛瘀，養(yǎng)血調(diào)經(jīng)；赤芍助諸藥活血散瘀；麥冬甘苦微寒，養(yǎng)陰清熱，并制吳茱萸、桂枝之溫燥；共為佐藥。甘草尚能調(diào)和諸藥，兼為使藥。諸藥合用，共奏益氣溫陽(yáng)，調(diào)經(jīng)散寒之功。

關(guān)于心衰的病理機(jī)制，1992年P(guān)acker提出解釋心力衰竭進(jìn)展的神經(jīng)內(nèi)分泌假說(shuō)，其對(duì)病理生理的觀點(diǎn)中主要包括兩大因素，即心室重構(gòu)和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞因子系統(tǒng)的激活，其中最主要的為交感神經(jīng)系統(tǒng)(SNS)及腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng) (RAAS)的激活[3]。RAAS中稱為最為重要的活性激素的AngII是在體內(nèi)參與多種重要功能，CHF時(shí)其水平升高已被廣泛認(rèn)同。AngII具有較強(qiáng)的血管收縮作用，能夠維持重要臟器血供和血壓，增加回心血量，使心排血量增多。但持久、過度的AngII升高，會(huì)促使CHF向不良方向發(fā)展[4]。在細(xì)胞水平，AngII促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)生長(zhǎng)和組織肥厚，促進(jìn)心肌間質(zhì)纖維化[5]。在器官組織水平，可引起血管平滑肌收縮，使阻力增加，心室前后負(fù)荷增加，引起心肌肥厚及心室重構(gòu)。此外，AngII促進(jìn)腎上腺皮質(zhì)球狀帶細(xì)胞合成和分泌ALD，血漿中ALD濃度升高，導(dǎo)致鈉水潴留，血容量擴(kuò)張，前負(fù)荷增加，造成體循環(huán)及肺淤血。高ALD血癥可減少交感神經(jīng)末梢對(duì)去甲腎上腺素（NE）的再攝取，增強(qiáng)NE活性，引發(fā)心律失常與冠脈痙攣，在心室重構(gòu)，成纖維細(xì)胞增生，以及膠原沉積中也起重要作用。有研究報(bào)道，人的心肌細(xì)胞有ALD受體，ALD通過其受體可使心肌細(xì)胞壞死[6]，但其具體機(jī)制尚不清楚。

本研究表明，采用鹽酸阿霉素腹腔注射復(fù)制的CHF大鼠模型血漿AngII和ALD的含量升高，提示模型復(fù)制成功。經(jīng)藥物治療后，各治療組可有效降低大鼠血漿AngII和ALD的含量，進(jìn)一步表明各治療組可抑制AngII和ALD的過度分泌和釋放，使其外周血管擴(kuò)張，增強(qiáng)心肌收縮力，減輕心臟前后負(fù)荷，改善心臟縮舒功能，最終達(dá)到改善心力衰竭癥狀的目的，但對(duì)其益氣溫陽(yáng)方的作用機(jī)制仍需進(jìn)一步探討與研究。相信隨著研究模式的不斷開發(fā)與大規(guī)模臨床研究，心衰的中醫(yī)藥治療必將迎來(lái)嶄新的歷程。