硫甙分離純化方法

硫甙是十字花科植物中重要的生物活性物質(zhì)，至今已分離出一百多種，具有抑菌、抗氧化、抗腫瘤、抗癌等活性，吸引了眾多研究學(xué)者的興趣。本文簡(jiǎn)要介紹了幾種硫甙的分離純化方法。

硫代葡萄糖苷(Glucosinolates），簡(jiǎn)稱硫甙，是十字花科植物的一類含硫、氮的有機(jī)陰離子次生代謝產(chǎn)物，存在于植物細(xì)胞的液泡中，由相應(yīng)的氨基酸衍生而來(lái)[1]。Ettinger 等采用X- 射線對(duì)硫甙晶體進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)硫甙均由β- 硫甙葡萄糖基、磺酸肟和支鏈R 基三部分組成，R 基不同，硫甙的種類和性質(zhì)不同，R基可以是甲硫基、烯烴基、亞甲基磺?；?、烷基、酮基、芳香基和雜環(huán)等。流行病學(xué)研究表明，硫甙及其降解產(chǎn)物具有明顯的抗癌變、抗腫瘤、抗氧化和抑菌等生物活性，還能形成特殊辛辣風(fēng)味[3]。硫甙粗品中含有機(jī)酸、蛋白、糖等雜質(zhì)，產(chǎn)品純度低、穩(wěn)定性差，在進(jìn)一步對(duì)硫甙的活性進(jìn)行研究分析前，需要對(duì)硫甙粗提液進(jìn)行純化。不同硫甙單體之間，結(jié)構(gòu)上差異小，僅在R 側(cè)鏈基團(tuán)存在著差異，使得對(duì)其分離提純難度較大。本文總結(jié)了硫甙的分離純化方法，為其進(jìn)一步研究提供參考。

柱層析法柱層析法是目前純化硫甙應(yīng)用最廣的一類純化技術(shù)。硫甙中含有硫酸基團(tuán)使之呈現(xiàn)電負(fù)性，帶有陽(yáng)離子特性的材料作為固定相對(duì)其有較好的保留性，可用柱層析法實(shí)現(xiàn)對(duì)硫甙粗提物的精制。周錦蘭等依次通過(guò)酸性氧化鋁色譜柱和反相碳十八硅膠柱分離純化油菜籽中的硫甙，成功分離得到Progoitrin。

膜分離法膜分離技術(shù)是使用選擇透過(guò)性膜為分離介質(zhì)，當(dāng)膜兩側(cè)存在動(dòng)力差時(shí)，物料依據(jù)濾膜孔徑的大小通過(guò)或被截留，達(dá)到分離純化的目的。膜分離技術(shù)得到的硫甙透明度高，穩(wěn)定性好，但對(duì)設(shè)備要求高，純化成本高，提取效率低，在硫甙的分離純化用得比較少。

色譜法色譜法是天然產(chǎn)物分離純化常用的方法，根據(jù)色譜柱的不同，可分為高效液相色譜法、毛細(xì)管電泳色譜法、離子對(duì)色譜法等。利用高效液相色譜法分離純化硫甙己有較深入的研究，趙振東等通過(guò)建立超高效液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜在白芥種子中鑒別出5 種硫甙單體。袁麗鳳等采用液相色譜- 電噴霧接口- 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，再經(jīng)紫外掃描，分離鑒定了7 種油菜籽中的硫甙，7 種硫甙的保留時(shí)間、峰高和峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差均在0.9%～1.7%，具有較高的重現(xiàn)性。高效毛細(xì)管電泳法是指在高壓電場(chǎng)的驅(qū)動(dòng)下，以毛細(xì)管為分離通道，根據(jù)硫甙分子的帶電量和極性差異使完整硫甙實(shí)現(xiàn)分離的技術(shù)。李培武采用膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜，以十六烷基三甲基溴化銨為表面活性劑，使帶有負(fù)電荷的硫甙與CTAB 膠團(tuán)上的正電荷發(fā)生離子對(duì)作用而達(dá)到分離的效果，分析速度快，僅需5～15 min，與HPLC 法分析硫甙含量相比,HPCE 法具有環(huán)境友好、樣品前處理簡(jiǎn)單、分離效率高、運(yùn)行成本低等優(yōu)點(diǎn)。離子對(duì)色譜法是利用硫甙的側(cè)鏈R 基團(tuán)，通過(guò)加入合適的反離子與硫甙形成離子對(duì)，組成的離子復(fù)合物易溶于有機(jī)相，而硫甙離子和反相離子易溶于水相，使硫甙得以分離。離子對(duì)色譜對(duì)強(qiáng)極性的硫甙分離效果差，利用其測(cè)定極性硫甙必須使用由不同離子對(duì)和多種試劑所構(gòu)成的流動(dòng)相，用于非極性硫甙的分離和分析。逆流色譜是一種不用固態(tài)支撐體或載體的將液液逆流分離、液相色譜和離心技術(shù)聯(lián)用分配色譜技術(shù)，它可以實(shí)現(xiàn)連續(xù)高效的分離和制備。崔洪剛采用高速逆流色譜分離西蘭花籽中硫甙，經(jīng)制備高效液相色譜進(jìn)一步純化得到烯丁基硫甙、4- 戊烯基硫甙、3- 甲基亞磺?；蜻?、4- 甲基亞磺酰基正丁基硫甙、7- 甲基亞磺?；蜻? 種硫甙單體。

硫甙熱穩(wěn)定差，會(huì)分解，分解產(chǎn)物無(wú)硫甙特定的生理活性，在精制過(guò)程中需要注意低溫回收溶劑亞臨界流體技術(shù)可實(shí)現(xiàn)在低溫、低壓條件下快速有效地提高硫甙的提取率與純度，實(shí)現(xiàn)大規(guī)模的作業(yè)，但幾乎沒有學(xué)者運(yùn)用亞臨界流體技術(shù)對(duì)硫甙進(jìn)行提取分離。新技術(shù)的運(yùn)用是我們探索研究方法的新思路。