非洲豬瘟和經(jīng)典豬瘟綜合監(jiān)測計劃—數(shù)據(jù)處理及附件

譯校│劉林青 張淼潔 翟新驗（中國動物疫病預(yù)防控制中心）

一、數(shù)據(jù)

1.數(shù)據(jù)平臺。用于數(shù)據(jù)收集的數(shù)據(jù)平臺應(yīng)包括以下內(nèi)容：野生動物服務(wù)機(jī)構(gòu)（WS）維護(hù)的電子表格；國家動物衛(wèi)生實驗室網(wǎng)絡(luò)（NAHLN）實驗室信息系統(tǒng)（LMS）；國家獸醫(yī)服務(wù)機(jī)構(gòu)實驗室（NVSL）診斷數(shù)據(jù)庫的可搜索檢測結(jié)果應(yīng)用程序（STRAND）；獸醫(yī)服務(wù)綜合監(jiān)測模塊（VSISM）；實驗室提交模塊（CLSM），用于實驗室提交數(shù)據(jù)；應(yīng)急管理響應(yīng)系統(tǒng)（EMRS）。

2.用于非洲豬瘟和經(jīng)典豬瘟監(jiān)測的初始數(shù)據(jù)收集和管理過程（表1）。

非洲豬瘟（ASF）和經(jīng)典豬瘟（CSF）綜合監(jiān)測計劃使用了幾個現(xiàn)有的CSF監(jiān)測采樣方式。目前，通過獸醫(yī)服務(wù)機(jī)構(gòu)實驗室報告互聯(lián)網(wǎng)技術(shù)（IT）系統(tǒng)對部分CSF監(jiān)測數(shù)據(jù)進(jìn)行管理，而新獲得的監(jiān)測數(shù)據(jù)收集正在遷移到新開發(fā)的CLSM-VSISM數(shù)據(jù)系統(tǒng)。VSISM建立在通用模塊化物種和與疫病無關(guān)的軟件結(jié)構(gòu)內(nèi)的CRM框架上，以允許在單次訪問期間進(jìn)行多種疫病采樣。由于這種結(jié)構(gòu)，與CSF數(shù)據(jù)收集相一致地添加ASF監(jiān)測功能相對簡單。隨著新的聯(lián)合監(jiān)測工作的開展，用戶將有機(jī)會一次遷移到針對兩種疫病的新IT管理系統(tǒng)。對于監(jiān)管獸醫(yī)采樣，將通過基于Web的CLSM數(shù)據(jù)門戶輸入采樣數(shù)據(jù)，該門戶將通過下拉列表和受限輸入?yún)f(xié)議來捕獲完整和標(biāo)準(zhǔn)化的現(xiàn)場數(shù)據(jù)。

當(dāng)前，CLSM基于字段的數(shù)據(jù)收集模塊僅限于收集目標(biāo)樣本的監(jiān)管人員使用。但是，類似的數(shù)據(jù)結(jié)構(gòu)和最低限度的要求將被應(yīng)用到與合格的獸醫(yī)提交給NAHLN實驗室的病例兼容的病豬相關(guān)流行病學(xué)數(shù)據(jù)。VS和NAHLN實驗室的IT人員將開發(fā)標(biāo)準(zhǔn)化的消息結(jié)構(gòu)，以便將最小案例數(shù)據(jù)以及ASF、CSF檢測訂單和結(jié)果通過LMS傳遞到VSISM CSF-ASF數(shù)據(jù)集中。將要求實驗室收集或記錄任何必填數(shù)據(jù)字段的條目，無論是來自實驗室的加入表格，還是與提交選定進(jìn)行FAD檢測樣品的獸醫(yī)進(jìn)行溝通。VS將要求所有必需的數(shù)據(jù)都通過LMS上傳給實驗室，以符合報銷ASF-CSF檢測費用的條件。

NVSL-FADDL LMS系統(tǒng)目前無法進(jìn)行電子消息傳遞。最初，所需的WS野生豬場提交數(shù)據(jù)將通過電子表格與VS共享，以包括在監(jiān)測數(shù)據(jù)報告中。VS計劃經(jīng)理將通過STRAND從NVSL-FADDL獲得WS野生豬樣本的ASF、CSF陰性檢測結(jié)果。

3.ASF-CSF監(jiān)測樣本所需的最小數(shù)據(jù)元素。在過去的12年中，審查CSF監(jiān)測數(shù)據(jù)的一個顯著弱點是與樣本相關(guān)的數(shù)據(jù)（即與樣本結(jié)果相關(guān)的數(shù)據(jù)對于評估目標(biāo)監(jiān)測效果至關(guān)重要）的報告不一致。具有記錄風(fēng)險狀況的樣品比沒有已知風(fēng)險因素記錄的隨機(jī)監(jiān)測樣品珍貴很多。此外，樣本池應(yīng)代表在該定義里的各種群體（足夠的覆蓋范圍）。

為了記錄所需的風(fēng)險概況，必須獲得以下關(guān)于樣本的數(shù)據(jù)元素信息（最小數(shù)據(jù)元素可能因監(jiān)測方式而異）：采樣動物的年齡；與條形碼試管或容器編號綁定的動物ID（或組/圍欄說明）；收集、檢測和報告樣品的日期（出廠日期）；豬群的臨床體征和病史（如果有的話），尤其是那些符合病例選擇標(biāo)準(zhǔn)的；實驗室檢測；生產(chǎn)現(xiàn)場、屠宰場或市場的場所識別碼（PIN）（如果沒有PIN，可以輸入經(jīng)緯度，以便于查找或分配PIN）；生產(chǎn)類型；提交者（如果有）；樣本選擇標(biāo)準(zhǔn)/臨床體征（如果有）；樣本類型（例如血清、扁桃體、脾臟、淋巴結(jié)、全血等）；屠宰場代碼（例如FSIS號）；提交方式；要求的檢測；檢測結(jié)果和解釋。

4.未來的統(tǒng)一電子數(shù)據(jù)收集替代方案。VS將與實驗室IT，APHIS（動物衛(wèi)生檢驗局） IT和主題專家緊密合作，旨在探索避免重復(fù)數(shù)據(jù)輸入，改善電子數(shù)據(jù)收集和傳輸。

二、數(shù)據(jù)分析、解釋和度量

由以下幾方面進(jìn)行數(shù)據(jù)分析、解釋和度量。

1.代表性。

（1）地理。診斷實驗室監(jiān)測樣本的地理分布通常應(yīng)反映美國豬群的種群分布。此外，抽樣的群體數(shù)量應(yīng)反映每個州的群體數(shù)量。

屠宰監(jiān)測樣本的地理分布通常應(yīng)反映該計劃針對的豬屠宰場的分布（烘烤市場、聚集點）。商業(yè)屠宰場主要位于中西部地區(qū)的上游，而較小的屠宰場則分布在美國各地。由于著重在佛羅里達(dá)州、得克薩斯州和波多黎各的采樣，預(yù)計這些州的采樣數(shù)會高于其他州。

高風(fēng)險監(jiān)測樣本的地理分布應(yīng)分布在全國各地，重點是佛羅里達(dá)州、得克薩斯州和波多黎各。此外，預(yù)計允許垃圾飼喂的州在該監(jiān)測方式中的樣本數(shù)量要比根據(jù)其豬群養(yǎng)殖量預(yù)期的多。如果可以獲得詳細(xì)信息，則可以在縣一級評估地理代表性，并且預(yù)計會有更多的樣本來自垃圾掩埋場或國際港口附近的縣。

野豬監(jiān)測：野豬樣本的地理分布應(yīng)反映野豬種群分布。大多數(shù)樣品應(yīng)來自已建立野生豬種群的州。

（2）生產(chǎn)類型/年齡。診斷實驗室監(jiān)測：此監(jiān)測中的樣品應(yīng)反映商品豬場的年齡和生產(chǎn)類型分布。

屠宰監(jiān)測：這類監(jiān)測中生產(chǎn)類型的不同與商品、不合格和高風(fēng)險生產(chǎn)動物之間樣品的大致分布接近。預(yù)期年齡分布為4個月，以發(fā)現(xiàn)專門針對焙烤市場銷售的豬只以及生長速度低于同類群的不合格商品豬。

高風(fēng)險監(jiān)測：對于ASF和CSF，此監(jiān)測中的樣本主要是非商品生產(chǎn)類型。其中，應(yīng)包括后院畜群、垃圾飼喂豬和過渡性群體，其中垃圾飼喂豬占CSF樣本的大部分。

野豬監(jiān)測：預(yù)期年齡分布主要是成年動物，少年和幼年的比例較小。生產(chǎn)類型不適用于此監(jiān)測。

表1 當(dāng)前用于ASF-CSF監(jiān)測的類型和業(yè)務(wù)流程

（3）時間分布。診斷實驗室監(jiān)測：在一年中的各個星期和月中，病豬的提交應(yīng)均勻分布。

屠宰監(jiān)測：提交應(yīng)大約每月平均一次。取決于地區(qū)溫度差異和慶?；顒?節(jié)假日的時間，提交烤肉類樣品的時間可能更具季節(jié)性。

高風(fēng)險監(jiān)測：極端溫度下，垃圾飼喂豬樣本更有季節(jié)性，以減少對動物的壓力。

野豬監(jiān)測：這些樣本全年收集，提供具有時間代表性的樣本。

2.檢測概率。對于每種監(jiān)測方式、每種疫病，疫病檢測概率應(yīng)該進(jìn)行研究。表2和表3列出了估計的初始患病率檢測水平和潛在感染動物的數(shù)量。

3.報告的臨床特征與病例定義的相符性。診斷實驗室監(jiān)測樣品提交的理由應(yīng)在一致的臨床體征中分配，最少或沒有檢測到?jīng)]有提交或“一般豬提交”理由的樣品。

屠宰監(jiān)測應(yīng)從定罪的動物提交以進(jìn)行臨床跡象或驗尸病灶與上述提交原因一致。

高風(fēng)險監(jiān)測提交的原因應(yīng)在一致的臨床體征中分配，最少要檢查樣品或沒有樣品，沒有提交或“一般豬的提交”的理由。

4.及時性。應(yīng)盡快提交樣本，對于各類監(jiān)測方式，均應(yīng)采樣后48小時內(nèi)提交。

檢測周期：組織樣品應(yīng)盡快進(jìn)行檢測，保存和檢測時間不超過1周；血清樣本（CSF）應(yīng)在收到后7～10天內(nèi)進(jìn)行檢測。

三、附錄1：非洲豬瘟病例定義

1.臨床體征。ASF是非洲豬瘟病毒（ASFV）引起的家豬和野豬均能感染的傳染病，該病毒是非洲豬瘟病毒科里的惟一病毒。它可以通過直接或間接接觸或通過鈍緣蜱屬進(jìn)行傳播。感染類型包括最急性、急性、亞急性或慢性。感染豬恢復(fù)過來后，可以成為病毒的持續(xù)感染載體。

（1）最急性。由高毒力毒株引起。通常發(fā)現(xiàn)時豬已經(jīng)死亡，有時沒有疫病的臨床特征或剖檢病變。

（2）急性。由高毒力毒株引起。臨床特征包括發(fā)燒、加重的脈搏和呼吸頻率、嗜睡、厭食和臥倒?？赡艹霈F(xiàn)黃疸、嘔吐、出血性腹瀉、眼部有分泌物、鼻腔有出血性分泌物和流產(chǎn)等癥狀。豬通常表現(xiàn)出紅腫、出血和/或瘀斑皮。死亡前一到兩天，豬只可能會出現(xiàn)厭食癥，精神沉郁或精疲力竭，共濟(jì)失調(diào)。感染后2～13天死亡。死亡率接近100%。尸檢后常見病變包括：脾臟腫大、易碎，肝腫大，腎瘀點/出血，淋巴結(jié)腫大，以及其他器官的出血/瘀斑，包括膀胱、肺、心臟、胃和腸。

（3）亞急性。由中等毒力毒株引起。臨床癥狀類似于急性型，但不嚴(yán)重。病程5～30天，死亡率較低（30%～70%）。感染后15～45天死亡。臨床特征、剖檢病變與急性型相似，但通常不太嚴(yán)重。

（4）慢性。由低毒力毒株引起。臨床癥狀超過2～15個月，變化很大，可能包括體重減輕、發(fā)燒、呼吸道癥狀、皮膚壞死、心包炎、肺粘連和關(guān)節(jié)腫脹。死亡率低。剖檢病變包括消瘦和局部干酪樣壞死，以及肺硬化。

2.實驗室標(biāo)準(zhǔn)。

（1）病原分離和鑒定。收集全血（EDTA和肝素）、脾臟、淋巴結(jié)、扁桃體和腎臟。保持樣品盡可能低溫而不凍結(jié)。檢測包括：病毒分離（VI）、直接熒光反應(yīng)（DFA）、測序和實時PCR（rPCR）。

表2 估計的初步流行率檢測水平和可能感染的動物數(shù)量—ASF監(jiān)測

表3 估計的初步流行率檢測水平和可能感染的動物數(shù)量—CSF監(jiān)測

（2）血清學(xué)。通過ELISA檢測血清中的抗體、間接熒光抗體（IFA）和免疫過氧化物酶檢測（IPT）?？贵w會在感染后7～10天出現(xiàn)，并且可以持續(xù)一生。感染強(qiáng)毒的豬可能在產(chǎn)生抗體之前死亡。

3.病例定義和報告標(biāo)準(zhǔn)。

（1）可疑病例。可疑病例：符合ASF臨床特征和流行病學(xué)特點的動物。

（2）推定陽性病例。推定陽性病例：具有非陰性篩查實驗室檢測的可疑病例經(jīng)國家獸醫(yī)服務(wù)機(jī)構(gòu)實驗室（NVSL）境外動物疫病診斷實驗室（FADDL）或國家動物健康局的ASFV（PCR）結(jié)果實驗室網(wǎng)絡(luò)實驗室獲準(zhǔn)進(jìn)行ASF檢測，或在NVSL FADDL通過兩種不同的抗體檢測，可疑病例ASFV抗體呈陽性。

（3）確認(rèn)陽性病例。確認(rèn)陽性病例：從其中分離出ASF病毒并由NVSL FADDL或農(nóng)業(yè)部指定的實驗室鑒定，或假設(shè)陽性病例，經(jīng)NVSL FADDL檢測，ASFV抗原陽性的病例。

注意：在任何ASF暴發(fā)中，病例定義都可以在第一個推定陽性或確診陽性病例（索引病例）后進(jìn)行修改。整個暴發(fā)期間病例定義將被審查，并根據(jù)其他信息或根除工作需要的變化進(jìn)行修改。

四、附錄2：經(jīng)典豬瘟病例定義

1.臨床體征。經(jīng)典豬瘟是由豬瘟病毒引起的，一種很小的黃病毒科和瘟病毒屬的囊膜RNA病毒。潛伏期的范圍可能從2到15天不等，但通常為7～10天。豬瘟有多種不同的臨床癥狀（急性、慢性和先天性感染），這主要取決于動物之前對病毒的接觸情況、病毒毒性（高、中和低）以及諸如年齡之類的宿主因素和營養(yǎng)狀況。

與年長動物相比，年幼動物通常受到的影響更大，死亡率可能高達(dá)90%；在較老的種豬中，感染通常是輕度甚至亞臨床的。年幼動物受到的影響往往更加嚴(yán)重，并且更有可能表現(xiàn)出經(jīng)典的急性表現(xiàn)。經(jīng)典的急性表現(xiàn)很少見了。相反，更溫和的表現(xiàn)和臨床癥狀占主導(dǎo)。流行的CSF病毒株為中度至低度毒力，使臨床診斷變得困難，尤其是在年長動物中。低毒力菌株通常會引起輕度疫病或亞臨床感染，這可能導(dǎo)致長期無法發(fā)現(xiàn)。除了低毒力菌株，白細(xì)胞減少癥是一個相當(dāng)普遍的臨床實驗室發(fā)現(xiàn)。

（1）急性。通常在12周齡以下斷奶的對抗生素?zé)o反應(yīng)的斷奶仔豬中發(fā)生，特征是發(fā)燒，精神沉郁，皮膚充血，結(jié)膜炎和行動遲緩，后跟輕癱，流產(chǎn)（稀有）和/或腹瀉。

（2）慢性。從急性感染中恢復(fù)過來的豬可能會發(fā)展成慢性，在這個過程中，會出現(xiàn)厭食、發(fā)燒、腹瀉、皮炎，并且可能導(dǎo)致群體中出現(xiàn)小個頭豬。特征為急性感染，繼而在發(fā)燒復(fù)發(fā)之前短暫恢復(fù)，厭食導(dǎo)致消瘦，發(fā)病后1～3個月死亡。

（3）先天性感染。先天性感染可導(dǎo)致繁殖功能降低表現(xiàn)，群體中出現(xiàn)流產(chǎn)或仔豬虛弱等臨床表現(xiàn)。妊娠50～70天后母豬感染，生下的幼豬可能患有先天性震顫或臨死前的幾個月持續(xù)感染并表現(xiàn)出正常，目前臨床上發(fā)現(xiàn)出生后11個月的存活期（妊娠50～70天之前感染的母豬可能會流產(chǎn)、分娩死產(chǎn)、產(chǎn)木乃伊胎或?qū)е孪忍煨匀毕莸呢i）。

2.實驗室標(biāo)準(zhǔn)。

（1）病原鑒定：扁桃體、脾臟、腎臟、淋巴結(jié)或回腸遠(yuǎn)端應(yīng)在低溫條件下（不冷凍）運輸，并且不添加防腐劑。臨床患病豬的全血（肝素或EDTA處理）也是合適的樣品。檢測方法包括對樣品組織使用CSF特異性單克隆抗體的免疫組化（IHC）（ABC染色）、PCR（rPCR和RTPCR）以及病毒分離，然后進(jìn)行ABC染色和/或rPCR或RT-PCR。

（2）血清學(xué)檢測：血清學(xué)檢測包括中和過氧化物酶聯(lián)用檢測（也稱為免疫過氧化物酶病毒中和檢測-IPVN），免疫過氧化物酶檢測（IP）和E2抗體ELISA。由于使用強(qiáng)毒株的免疫抑制，在感染后18天之前檢測不到動物體內(nèi)的抗體，后續(xù)抗體會至少持續(xù)數(shù)年。對于慢性感染，如果有抗體的話，可能會在感染第一個月后短暫檢測到抗體，但很快就消失了。先天感染的豬持續(xù)存在病毒血癥，很少產(chǎn)生特異性抗體。

3.病例定義和報告標(biāo)準(zhǔn)。

（1）可疑病例?？梢刹±哂幸韵绿卣鳎号c經(jīng)典豬瘟一致的臨床體征、病史或流行病學(xué)特點；或者常規(guī)監(jiān)測中rPCR/RT-PCR結(jié)果陽性或者不確定的，并且沒有臨床判斷依據(jù)，其他實驗室診斷（測序信息或確認(rèn)性檢測）或流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果待定；或者在常規(guī)檢測過程中對樣品進(jìn)行抗體ELISA監(jiān)測陽性，隨后IP和IP-VN檢測均獲得陽性結(jié)果，但流行病學(xué)信息或臨床癥狀與經(jīng)典豬瘟不一致的。

（2）推定陽性病例。樣品初始rPCR/RT-PCR結(jié)果陽性，豬群有或沒有經(jīng)典豬瘟的臨床體征和/或流行病學(xué)特點，在境外動物疫病診斷中心進(jìn)行重復(fù)rPCR/RT-PCR或基因組測序為陽性的可疑病例；或者流行病學(xué)信息和/或臨床癥狀與經(jīng)典豬瘟一致的豬群；rPCR或RT-PCR陽性；或者對組織樣本進(jìn)行ABC檢測陽性；或者IP-VN檢測陽性的病例稱為推定陽性病例。

（3）確診陽性病例。從豬中分離出CSF病毒，并且經(jīng)國家獸醫(yī)服務(wù)機(jī)構(gòu)實驗室，F(xiàn)ADDL或由農(nóng)業(yè)部指定的實驗室進(jìn)行測序確認(rèn)的病例稱為確診陽性病例。