基于空彎和李斯特兩種細(xì)菌質(zhì)量安全檢驗(yàn)技術(shù)的探究

鐘雷響 曹愛(ài)巧

1.深圳市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測(cè)中心 廣東深圳 518055

2.廣東省市場(chǎng)監(jiān)督管理局食用農(nóng)產(chǎn)品監(jiān)管重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 廣東深圳 518055

空腸彎曲菌是一種食源性人畜共患的細(xì)菌，許多動(dòng)物都攜帶了這種細(xì)菌，并且通過(guò)食物鏈的傳遞，最終傳遞給人類導(dǎo)致人類生病。我們食用的家禽就是主要的傳染源，感染此菌后會(huì)引起急性的腸炎、格林巴利綜合癥、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎等多種疾病。然而此菌生物量較少，培養(yǎng)環(huán)境較為苛刻，在日常食源性風(fēng)險(xiǎn)檢測(cè)中比較難以檢測(cè)出來(lái)，需要通過(guò)微需氧活化培養(yǎng)方能檢出，所以空腸彎曲菌一直是檢驗(yàn)工作重點(diǎn)和難點(diǎn)[1]。李斯特菌也是一種人畜共患的病菌，它在低溫的環(huán)境下容易生存，從而污染食物，引發(fā)急性的腹瀉、發(fā)熱、腦膜炎等，死亡率較高，其在食品檢測(cè)中也是重點(diǎn)關(guān)注對(duì)象?，F(xiàn)如今許多農(nóng)產(chǎn)品隨著加工技術(shù)的發(fā)展紛紛制成成品送出，其制作的過(guò)程中都需要對(duì)此菌進(jìn)行嚴(yán)格的檢測(cè)控制。

1 細(xì)菌概念

1.1 李斯特菌

李斯特菌是一種單核球增多性李斯特菌，是一種兼性厭氧細(xì)菌，是李斯特菌癥的病原體，屬于革蘭氏陽(yáng)性菌，一般以食物作為傳染媒介，是較為致命的食源性病原體。李斯特菌在環(huán)境中無(wú)處不在，能夠感染大部分的食品，肉類、蛋類、禽類、海產(chǎn)品、乳制品、蔬菜等都已被人們證實(shí)是李斯特菌的感染源，較為嚴(yán)重的感染可能引起血液和腦組織感染。人與動(dòng)物食用污染食品后會(huì)引起很嚴(yán)重的食物中毒，它廣泛引起人與動(dòng)物的疾病，比如我們常見(jiàn)的敗血癥、腦膜炎和單核細(xì)胞增多病。對(duì)于食品安全有著非常嚴(yán)重的威脅，是冷藏食品中最威脅人類健康的病菌之一。

1.2 空腸彎曲菌

空腸彎曲菌屬于彎曲菌屬，是革蘭氏陰性菌?？漳c彎曲菌對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境要求比較嚴(yán)格，需要溫度更高的微氧環(huán)境才能夠生長(zhǎng)，并且其生長(zhǎng)速度較慢。但是如果一旦感染上了空腸彎曲菌，其導(dǎo)致的腸炎大多數(shù)為急性炎癥性腸炎，并且可以進(jìn)一步向下傳染到結(jié)腸和直腸當(dāng)中，引起這兩個(gè)器官的炎癥也是其較為厲害的特點(diǎn)之一，感染時(shí)極易腹瀉且頻率較高。由于空腸彎曲菌影響的腸炎特別表現(xiàn)為腹痛，可以為連續(xù)性的陣痛，與急性闌尾炎極為相似，兒童也極易感染，有一些調(diào)查發(fā)現(xiàn)多數(shù)感染此病的兒童有肉眼可見(jiàn)的便血，新生兒通常沒(méi)有明顯的癥狀，很少病重發(fā)熱,嘔吐為主要表現(xiàn)形式。

2 細(xì)菌質(zhì)量安全檢驗(yàn)技術(shù)

2.1 李斯特菌

隨著我國(guó)科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，除了傳統(tǒng)的《GB 4789.30-2016》方法外，各種新方法不斷出現(xiàn)，主要包括普通PCR方法、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、多重PCR等，并廣泛應(yīng)用于牛奶的檢測(cè)研究中，普通PCR方法應(yīng)用較為廣泛，并且其可以對(duì)李斯特菌進(jìn)行定量的檢測(cè)，RT—PCR是在普通PCR反應(yīng)體系當(dāng)中加入一條與模板特異性結(jié)合起來(lái)，其可以標(biāo)記兩個(gè)熒光基礎(chǔ)的探針并在傳統(tǒng)的儀器上增加了信號(hào)檢測(cè)系統(tǒng)，它的探測(cè)結(jié)果會(huì)以熒光的形式顯現(xiàn)出來(lái)，較為清晰。而Maninis等以mRNA為基礎(chǔ)建立了對(duì)LM進(jìn)行檢測(cè)的RT.PCR方法，這種方法比較快速，其檢測(cè)的時(shí)間縮短了，并且，對(duì)李斯特菌的隨機(jī)基因組DNA片段進(jìn)行研究，開(kāi)發(fā)了一種利用隨機(jī)基因組DNA微陣列檢測(cè)牛奶中李斯特菌的方法，該方法的檢測(cè)限為8 1g（CFU／mL），結(jié)果顯示DNA微陣列法可檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基和牛奶中的uM，并且能將其與其他李斯特菌種和食源性致病菌區(qū)分。DNA微陣列可以同時(shí)應(yīng)用多對(duì)引物通過(guò)多重PCR擴(kuò)增多個(gè)病原體的特異基因，因此該方法最大的優(yōu)點(diǎn)是能夠同時(shí)檢測(cè)不同種類的致病菌。但是目前而言，檢測(cè)方法在實(shí)際應(yīng)用中存在著一些弊端。其比傳統(tǒng)方法雖然說(shuō)操作上較為簡(jiǎn)單，但是它消耗的時(shí)間長(zhǎng)，不能夠滿足人們對(duì)于其快速檢測(cè)的要求，并且也不適用于大規(guī)模的檢測(cè)當(dāng)中。而PCR方法以及基于PCR方 法建立的其他檢測(cè)方法較為快速簡(jiǎn)單，并且其已經(jīng)可以逐步取代傳統(tǒng)的方式，運(yùn)用于生牛乳中的細(xì)菌辨別[2]。但是其也存在弊端，不能夠分辨出細(xì)菌的活性，增加了檢測(cè)的失誤現(xiàn)象，對(duì)于一些產(chǎn)品還是需要用傳統(tǒng)的方法進(jìn)行驗(yàn)證。相信在未來(lái)的新型鑒定中，利用 PCR 技術(shù)和免疫學(xué)方法能夠開(kāi)發(fā)一種較為全面的檢測(cè)方法，解決李斯特菌便捷準(zhǔn)確的檢測(cè)手段。

2.2 空腸彎曲菌

空腸彎曲菌也是如此，其也是能夠引起人類細(xì)菌性腸炎的重要病菌之一。對(duì)空腸彎曲菌的檢測(cè)方法主要還是《GB 4789.9-2016》，其他檢測(cè)方法有ELISA檢測(cè)方法、PCRt31、 熒光定量PCR、蛋白質(zhì)組學(xué)等方法，但是目前這些方法還是存在一定的弊端，如ELISA檢測(cè)方法需要的時(shí)間比較長(zhǎng)，并且對(duì)于實(shí)際的消耗量比較多，容易出現(xiàn)一些特別的反應(yīng)。熒光偏振檢測(cè)法是一種特殊的熒光檢測(cè)技術(shù)，該技術(shù)主要基于熒光基團(tuán)在被偏振光激發(fā)后會(huì)發(fā)出偏振光原理來(lái)進(jìn)行。這樣的檢測(cè)方法是基于其檢測(cè)的體系的，在檢測(cè)的結(jié)果中熒光偏振（FP）值較為穩(wěn)定，不容易受其顏色影響，可以實(shí)現(xiàn)多標(biāo)記物定性定量的檢測(cè)較為有優(yōu)點(diǎn)。而逐漸引起人們的關(guān)注FPIA檢測(cè)時(shí)，如保持液體粘性和溫度恒定，那么分子轉(zhuǎn)動(dòng)速度就只與分子大小相關(guān)[3]。PEB1A熒光素分子相對(duì)比較小，能夠在溶液中自主移動(dòng)，這樣分子的FP值就比較小。如果待測(cè)液中含有PEB1A 特異性抗體，那么抗體就會(huì)和PEB1A熒光素分子結(jié)合，使分子復(fù)合物變大，導(dǎo)致FP值增大，利用熒光素FITC對(duì)空腸彎曲菌進(jìn)行追蹤與標(biāo)記，可以建立一種新的檢測(cè)技術(shù)，實(shí)現(xiàn)對(duì)農(nóng)產(chǎn)品中空腸彎曲菌的快速監(jiān)測(cè)。

3 結(jié)語(yǔ)

空腸彎曲菌和李斯特菌都是常見(jiàn)的菌種，目前檢測(cè)技術(shù)上有許多的方法，不同的方法各有千秋和不足，檢測(cè)技術(shù)還需不斷開(kāi)拓提升，相信在不久的未來(lái)，將會(huì)有更優(yōu)方法適用于兩種細(xì)菌的質(zhì)量安全檢驗(yàn)，達(dá)到便捷準(zhǔn)確的檢測(cè)目的，提升檢測(cè)效率。