淋巴細(xì)胞主動免疫治療對原因不明性復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者Treg及Th17細(xì)胞因子的影響

張小玲 王娟

(西安大興醫(yī)院產(chǎn)科，陜西 西安 710002)

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)主要是指持續(xù)出現(xiàn)兩次或兩次以上自然流產(chǎn)[1]。在全部復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者中，有50%左右的患者無法準(zhǔn)確了解其發(fā)病原因[2]。主動免疫治療理念認(rèn)為，出現(xiàn)不明原因性反復(fù)性流產(chǎn)通常與孕婦機(jī)體缺乏保護(hù)胎兒的抗體有關(guān)，從而引起母胎免疫識別紊亂，孕婦機(jī)體內(nèi)免疫系統(tǒng)將胎兒作為“侵入者”，進(jìn)而使得孕婦流產(chǎn)[3]。本文分析對原因不明性復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者實施淋巴細(xì)胞主動免疫治療的效果，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017年10月至2018年10月本院原因不明性復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者50例，患者年齡30～38歲，平均(34.27±2.11)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)[4]：(1)≥2次不明原因自然流產(chǎn)病史；(2)超聲檢查無排卵異常；(3)患者及其丈夫染色體檢查正常；(4)自身抗體檢查均為陰性；(5)無淋巴細(xì)胞主動免疫治療史；(6)患者及其家屬知情同意，簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)[5]：(1)家族遺傳病史；(2)內(nèi)分泌系統(tǒng)異常；(3)自身抗體檢查陽性。

1.2方法 分別于治療前以及治療后3周采集患者空腹上臂靜脈血樣本5 mL，使用乙二胺四乙酸二鈉進(jìn)行抗凝處理，將其中2 mL血液樣本放置在3 000轉(zhuǎn)/min的離心機(jī)中進(jìn)行持續(xù)10 min離心處理，選擇血清標(biāo)本，并放置在冰箱中保存。將其中3 mL血液樣本進(jìn)行淋巴細(xì)胞分離。每位患者均實施一個療程(共3次)淋巴細(xì)胞主動免疫治療，每次治療后暫停3周，隨后繼續(xù)開始治療。其中淋巴細(xì)胞治療濃度30～50×106個/L，細(xì)胞懸液劑量1.5～2.0 mL。淋巴細(xì)胞分離液采購至上海融禾醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒采購至杭州主諾生物技術(shù)有限公司，聚合酶聯(lián)反應(yīng)試劑盒采購至上海聯(lián)邁生物工程有限公司，酶聯(lián)免疫吸附試劑盒采購至上海恪敏生物科技有限公司。提取血液樣本中RNA總量，并進(jìn)行DNA合成。使用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)方法檢測患者血液樣本中Foxp3和ROR-γt的RNA水平，同時使用酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測血液樣本中IL-17A和IL-35水平，全部操作均嚴(yán)格依據(jù)試劑盒使用說明開展。鼓勵全部患者在治療后3個月內(nèi)再次妊娠。

1.3觀察指標(biāo) (1)觀察并比較患者治療前后Foxp3、ROR-γt、EBi3以及IL-17A因子中總RNA表達(dá)量[6]。(2)觀察并比較治療前后患者血清樣本內(nèi)中IL-17A以及IL-35水平。(3)對比妊娠成功以及妊娠失敗孕婦治療前后上述指標(biāo)進(jìn)行比較。持續(xù)隨訪，了解患者妊娠情況，對于妊娠的孕婦持續(xù)隨訪28周，28周后無流產(chǎn)情況發(fā)生即可判定為妊娠成功[7]。

2 結(jié) 果

2.1Foxp3、ROR-γt、EBi3及IL-17A中總RNA表達(dá)量 治療前患者Foxp3以及EBi3總RNA表達(dá)量均低于治療后，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，治療前患者ROR-γt以及IL-17A總RNA表達(dá)量均高于治療后，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 治療前后Foxp3、ROR-γt、EBi3以及IL-17A中總RNA表達(dá)量對比

2.2IL-17A以及IL-35水平 治療前患者IL-17A(16.23±4.19)ng/L，治療后(14.51±1.92)ng/L；IL-35(11.55±2.24)ng/L，治療后(26.37±2.72)ng/L。治療前患者IL-17A水平高于治療后，IL-35水平低于治療后(均P<0.05)。

2.3妊娠成功及妊娠失敗孕婦各因子總RNA表達(dá)量和水平 隨訪發(fā)現(xiàn)，30例患者妊娠成功，20例患者妊娠失敗，兩組IL-35、Foxp3以及EBi3比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 妊娠成功及妊娠失敗孕婦各因子總RNA表達(dá)量和水平對比

3 討 論

在正常孕婦機(jī)體內(nèi)，存在一種與配偶淋巴細(xì)胞發(fā)生抵抗作用的特異性IgG抗體，其可對淋巴細(xì)胞反應(yīng)產(chǎn)生抑制作用，避免孕婦機(jī)體內(nèi)淋巴細(xì)胞對胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行殺滅，從而降低孕婦機(jī)體免疫系統(tǒng)對胚胎的攻擊，其被稱作封閉抗體[8]。對于正常孕婦而言，在妊娠早期即可在機(jī)體內(nèi)檢測出封閉抗體，并且在妊娠中期其水平可達(dá)到峰值。不明原因性反復(fù)性流產(chǎn)患者機(jī)體內(nèi)人類白細(xì)胞抗原水平較高，因此封閉抗體水平偏低，極易導(dǎo)致孕婦機(jī)體免疫系統(tǒng)對胎兒形成攻擊，進(jìn)而出現(xiàn)流產(chǎn)情況[9]。CD4+T淋巴細(xì)胞中包含Treg細(xì)胞以及Th17細(xì)胞兩個亞群，Treg細(xì)胞對自身T細(xì)胞所介導(dǎo)的免疫反應(yīng)具有抑制作用，從而確保機(jī)體內(nèi)環(huán)境平穩(wěn)[10];Foxp3則是Treg細(xì)胞調(diào)節(jié)因子，Treg細(xì)胞可產(chǎn)生IL-35，而IL-35具有調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞活性的作用，從而發(fā)揮抑制免疫反應(yīng)作用，同時其還可增強(qiáng)Treg細(xì)胞增殖能力[11]。Th17細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子是ROR-γt，其可生成IL-17A，其可通過多種形式對炎癥的發(fā)生以及發(fā)展形成促進(jìn)作用，并且其還可促進(jìn)血管生成[12]。

本研究結(jié)果中，治療前患者Foxp3以及EBi3總RNA表達(dá)量均低于治療后(P<0.05)，治療前患者ROR-γt及IL-17A總RNA表達(dá)量均高于治療后(P<0.05)。治療前患者IL-17A水平高于治療后，IL-35水平低于治療后(均P<0.05)。30例患者妊娠成功，20例患者妊娠失敗，兩組IL-35、Foxp3及EBi3差異顯著(P<0.05)。對患者實施主動免疫治療可升高Foxp3以及IL-35水平，并且還可降低IL-17A以及ROR-γt水平，說明在發(fā)生流產(chǎn)進(jìn)程中，Th17細(xì)胞因子發(fā)揮促炎效果，導(dǎo)致機(jī)體形成免疫殺傷狀態(tài)。通過實施主動免疫治療，使機(jī)體形成免疫耐受，從而改善流產(chǎn)情況。