特異性免疫治療對(duì)支氣管哮喘患兒血清調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞水平、IL-10、sIgE水平的影響及療效評(píng)價(jià)

張義 楊勤 靳蓉 王菲 尹文艷 李悅 韓芳

(1.貴陽(yáng)市婦幼保健院兒童呼吸科，貴州 貴陽(yáng) 550003；2.貴州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室，貴州 貴陽(yáng) 550002)

支氣管哮喘是兒童常見(jiàn)的呼吸系統(tǒng)疾病，病理生理學(xué)研究顯示支氣管哮喘是一種以氣道高反應(yīng)性與慢性氣道炎癥為主要特征的異質(zhì)性疾病。臨床表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作性喘息，咳嗽、胸悶或呼吸困難[1-2]。哮喘病因復(fù)雜，免疫耐受的破壞是哮喘發(fā)病的重要環(huán)節(jié)，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞能有效地調(diào)節(jié)或抑制其他免疫活性細(xì)胞的功能，并在多種免疫性疾病中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在哮喘的發(fā)病中發(fā)揮著重要作用,其水平可用來(lái)評(píng)估哮喘病情[3]。研究[4]表明，在小鼠哮喘模型中，Treg細(xì)胞水平的降低導(dǎo)致氣道高反應(yīng)的增加。特異性免疫治療(SIT)可刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的應(yīng)變?cè)褪?，?dāng)患者再次接觸此變應(yīng)原，可顯著減輕甚至完全控制過(guò)敏癥狀[5-6]。本研究通過(guò)研究SIT對(duì)于支氣管哮喘患兒血清中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(CD4+CD25+T細(xì)胞、CD4+CD25highCD127lowTreg細(xì)胞)、IL-10、SIgE水平變化的影響，初步探討Treg及其細(xì)胞因子在兒童支氣管哮喘中的作用機(jī)制，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取貴陽(yáng)市婦幼保健院、貴陽(yáng)市兒童醫(yī)院呼吸哮喘?？?017年2月至2018年4月收治的支氣管哮喘患兒60例，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，各30例。對(duì)照組男17例，女13例；年齡(9.33±0.84)歲，病程(2.30±0.47)年，近1年急性發(fā)作次數(shù)(1.67±0.55)次。實(shí)驗(yàn)組男19例，女11例；年齡(9.53±1.20)歲，病程(2.43±0.50)年，近1年急性發(fā)作次數(shù)(1.53±0.51)次。兩組患者一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合兒童支氣管哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]；(2)年齡<13歲，病程>1年，且近1年急性加重次數(shù)≥1次；(3)符合免疫治療適應(yīng)證；(4)霧化吸入沙丁胺醇后可逆程度≥12%，或FEV1>80%預(yù)估值；(5)粉塵螨和/或屋塵螨皮膚試驗(yàn)陽(yáng)性，貓、狗、蟑螂類、霉菌類、草類及樹(shù)、花粉類皮膚試驗(yàn)陰性；(6)入選前4周內(nèi)未參加其他臨床研究；(7)本人能耐受，家屬均知情且簽署同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)精神障礙；(2)合并先天性心臟??；(3)伴有氣胸、活動(dòng)性肺結(jié)核、胸腔積液、傳染性鼻炎、鼻竇炎等；(4)有過(guò)敏性休克或者不明原因濕疹；(5)曾經(jīng)接受過(guò)免疫治療；(6)近1個(gè)月內(nèi)因哮喘急性發(fā)作接受過(guò)急診治療。

1.2方法 對(duì)照組給予基礎(chǔ)用藥治療，給予吸入糖皮質(zhì)激素。治療期間必要時(shí)給予β2-受體激動(dòng)劑。實(shí)驗(yàn)組在基礎(chǔ)用藥治療的同時(shí)給予SIT，給予阿羅格(購(gòu)自Novo-Helisen-Depot 默克雪蘭諾公司)螨變應(yīng)原注射液，在無(wú)菌條件下給藥，于上臂遠(yuǎn)端1/3處皮下注射，初始劑量為1級(jí)濃度0.1 mL，后逐漸增加劑量，每次增加0.1～0.2 mL，至第15周增加至最大劑量(3級(jí)濃度1.0 mL)，后維持該劑量延長(zhǎng)用藥時(shí)間間隔，直至每4～6周給藥1次，共1年。

1.3觀察指標(biāo) (1)對(duì)比兩組CD4+CD25+T細(xì)胞、CD4+CD25highCD127lowTreg細(xì)胞：于治療前和治療1年后檢測(cè)，取上肘靜脈血5mL，收集標(biāo)本送檢。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，計(jì)算二者在CD4+中的占比；(2)對(duì)比兩組IL-10、sIgE水平變化：于治療前和治療1年后檢測(cè)，取上肘靜脈血5mL，收集標(biāo)本后送檢；采用酶標(biāo)儀檢測(cè)，根據(jù)人總免疫球蛋白E定量檢測(cè)試劑盒操作指南測(cè)定sIgE水平；(3)兩組臨床療效判定：根據(jù)2016年GINA制定的支氣管哮喘控制水平分級(jí)判斷標(biāo)準(zhǔn)，臨床控制率=良好控制例數(shù)/總例數(shù)×100%。

2 結(jié) 果

2.1調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞水平變化 治療前兩組患兒血清CD4+CD25highT細(xì)胞、CD4+CD25highCD127lowTreg水平比、差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療1年后兩組血清CD4+CD25highT細(xì)胞、CD4+CD25highCD127lowTreg水平均較治療前明顯改善(P<0.05)，且實(shí)驗(yàn)組優(yōu)于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表1、圖1～4。

表1 兩組調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞水平比較

圖1 實(shí)驗(yàn)組治療前流式圖 圖2 對(duì)照組治療前流式圖

圖3 實(shí)驗(yàn)組治療1年后流式圖 圖4 對(duì)照組治療1年后流式圖

2.2免疫因子水平變化 治療前兩組患兒血清IL-10、sIgE水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療1年后，兩組血清IL-10水平均升高(P<0.05)，且實(shí)驗(yàn)組高于對(duì)照組(P<0.05)；治療1年后，兩組血清sIgE水平均下降，且實(shí)驗(yàn)組低于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 兩組免疫因子水平比較

2.3臨床癥狀改善情況 治療前兩組患兒咳喘發(fā)作次數(shù)與持續(xù)時(shí)間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療1年后，兩組患兒臨床癥狀均明顯改善，實(shí)驗(yàn)組患兒平均咳喘次數(shù)、持續(xù)時(shí)間均明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 兩組臨床癥狀改善情況

3 討 論

支氣管哮喘是一種以慢性氣道炎癥與氣道高反應(yīng)性為主要特征的異質(zhì)性疾病，涉及多種細(xì)胞及和細(xì)胞組分。調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞屬于細(xì)胞群，具有免疫抑制功能，可抑制自身抗原的免疫反應(yīng)，還可調(diào)控其它免疫細(xì)胞的活動(dòng)，在多種免疫性疾病中均呈紊亂狀態(tài)。有研究[8]報(bào)道，支氣管哮喘發(fā)病過(guò)程中，T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為T(mén)h2細(xì)胞，啟動(dòng)、調(diào)節(jié)氣道炎癥反應(yīng)，合成并釋放細(xì)胞因子，促使炎癥細(xì)胞在氣道內(nèi)聚集并活化，從而發(fā)揮效應(yīng)功能。Th1/Th2失衡也是該病發(fā)生的重要機(jī)制，可導(dǎo)致Th2細(xì)胞活性增強(qiáng)，刺激IgE生成的因子增多，最終可引發(fā)慢性炎癥反應(yīng)。還有研究[9]發(fā)現(xiàn)，哮喘的嚴(yán)重程度與IgE水平密切相關(guān)；IgE介導(dǎo)的嗜酸細(xì)胞和肥大細(xì)胞導(dǎo)致I型變態(tài)反應(yīng)，釋放出白三烯、組織胺，引起炎癥損傷及支氣管痙攣，導(dǎo)致喘息、咳嗽等臨床癥狀，抗體IgE水平增加，也是過(guò)敏性哮喘重要診斷指標(biāo)。但是另有報(bào)道指出[10]，Th1細(xì)胞并不能有效抑制Th2激活導(dǎo)致的炎癥反應(yīng)，反而會(huì)加重炎癥反應(yīng)，且Th1細(xì)胞分泌的IFN-γ也不會(huì)與Th2產(chǎn)生的因子相互協(xié)同促進(jìn)炎癥，反而加重臨床癥狀。有研究[11]顯示，調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞水平紊亂參與了支氣管哮喘的發(fā)生和發(fā)展，且也可誘發(fā)炎癥反應(yīng)，影響肺通氣與換氣功能。在小鼠哮喘模型中，Treg細(xì)胞水平的降低導(dǎo)致氣道高反應(yīng)的增加[12]。

SIT是指從低劑量開(kāi)始給予患者接觸變應(yīng)原藥物，逐漸增加劑量后維持用藥，持續(xù)足夠療程，可刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的應(yīng)變?cè)褪?，?dāng)患者再次接觸此變應(yīng)原，可顯著減輕甚至完全控制過(guò)敏癥狀[5]。有研究證明聯(lián)合進(jìn)行SIT可緩解支氣管哮喘的發(fā)作次數(shù)，提高支氣管哮喘控制率，減少?gòu)?fù)發(fā)率[13]。本研究結(jié)果顯示，治療1年后兩組CD4+CD25highT細(xì)胞、CD4+CD25highCD127lowTreg升高，且實(shí)驗(yàn)組優(yōu)于對(duì)照組(P<0.05)。提示SIT可改善支氣管哮喘患兒調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞水平，控制炎癥反應(yīng)，且其作用明顯優(yōu)于常規(guī)基礎(chǔ)治療。本研究結(jié)果還顯示，治療1年后兩組血清 IL-10水平升高，血清sIgE水平均降低，且實(shí)驗(yàn)組優(yōu)于對(duì)照組(P<0.05)。表明SIT有助于刺激并激活哮喘患者的免疫系統(tǒng)，從而對(duì)該致敏原產(chǎn)生耐受性，通過(guò)改善支氣管哮喘患兒調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞水平，調(diào)節(jié)血清IgG4水平和sIgE水平，控制炎癥反應(yīng)等途徑發(fā)揮治療作用，可緩解哮喘癥狀，避免哮喘急性發(fā)作，還有可能避免新發(fā)變態(tài)反應(yīng)[14]。本研究結(jié)果顯示，兩組經(jīng)過(guò)治療后，臨床癥狀均明顯改善，治療1年后實(shí)驗(yàn)組患兒平均咳嗽次數(shù)、持續(xù)時(shí)間明顯低于對(duì)照組(P<0.05)，提示經(jīng)聯(lián)合SIT后患兒癥狀改善效果更為顯著，表明SIT有助于縮短兒童哮喘癥狀持續(xù)時(shí)間，減少哮喘發(fā)作次數(shù)，有助于緩解病情。

綜上，SIT聯(lián)合哮喘基礎(chǔ)治療與單純哮喘基礎(chǔ)治療比較，前者能更加明顯改善兒童哮喘的臨床癥狀、減輕氣道慢性炎癥，降低哮喘復(fù)發(fā)率。

(本文圖1～4見(jiàn)封三)