殺傷細(xì)胞聯(lián)合化療治療中晚期肺癌的效果及對免疫功能、B7H4蛋白水平的影響

黃 嵐 劉繼斌

上海昶芯醫(yī)院管理有限公司醫(yī)務(wù)部，上海 210000

肺癌是臨床上常見的惡性腫瘤，病死率位居我國惡性腫瘤首位[1]。手術(shù)治療肺癌是臨床上常見的方法，但由于肺癌早期病情隱匿，無顯著特征，多數(shù)患者確診時(shí)已至中晚期，錯(cuò)過了手術(shù)治療最佳時(shí)期[2]。對于中晚期肺癌患者而言，緩解臨床癥狀、延長生存期、提高生活質(zhì)量是治療的關(guān)鍵所在。化療是治療中晚期肺癌的常見方法，其能夠延長患者的生存時(shí)間，但化療周期漫長，化療過程中易引起多種不良反應(yīng)，患者往往難以耐受[3]，故需尋找有效的治療方案以提高其生活質(zhì)量。殺傷細(xì)胞（CIK）作為新型的治療手段，被廣泛應(yīng)用于惡性腫瘤的治療中，能顯著提高患者的免疫力[4]。但對CIK 聯(lián)合化療能否顯著改善中晚期肺癌患者的免疫功能，學(xué)界鮮有研究?；诖耍狙芯窟x取上海市某醫(yī)院收治的110 例中晚期肺癌為研究對象，旨在探討CIK 細(xì)胞聯(lián)合化療治療的臨床應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)將結(jié)果匯報(bào)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年5月～2019年4月上海市某醫(yī)院腫瘤科收治的110 例中晚期肺癌患者為研究對象，采用雙盲法將入選患者分為聯(lián)合組與化療組，每組各55例。聯(lián)合組中，男37 例，女18 例；年齡35～70 歲，平均（61.12±7.81）歲；腫瘤分期：Ⅲ期30 例，Ⅳ期25 例；病理類型：腺癌29 例，鱗癌16 例，腺鱗癌4 例，小細(xì)胞癌6例?；熃M中，男35 例，女20 例；年齡35～71 歲，平均（61.23±7.97）歲；腫瘤分期：Ⅲ期32 例，Ⅳ期23 例；病理類型：腺癌28 例，鱗癌17 例，腺鱗癌5 例，小細(xì)胞癌5 例。兩組患者的一般資料如年齡、性別、病理分型及腫瘤分期等比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)患者及家屬知情同意，且經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)同意。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理活檢確診為肺癌；②符合美國國立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)（NCCN）指南相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；③Karnofsky 功能狀態(tài)評分（KPS）＞60 分；④臨床資料完整；⑤心電圖結(jié)果顯示正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：①精神疾病者；②合并其他惡性腫瘤者；③凝血功能障礙；④自身性免疫性疾病者；⑤入組本實(shí)驗(yàn)前接受放化療者；⑥妊娠期女性；⑦哺乳期女性；⑧本實(shí)驗(yàn)化療藥物過敏者。

1.3 方法

化療組給予1000 mg/m2的吉西他濱 （南京正大天晴制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H20093404，生產(chǎn)批號：20100303）治療，靜脈注射，1 h 內(nèi)注射完成；第1 天和第8 天，給予75 mg/m2的順鉑（齊魯制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H37021362，生產(chǎn)批號：2015613）治療，靜脈注射，第1～3 天。每3 周重復(fù)上述治療方法1 次，21 d為1 個(gè)療程，連續(xù)治療4 個(gè)療程。

聯(lián)合組在化療的基礎(chǔ)上聯(lián)合CIK 治療，在無菌層流實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行CIK 的制備，抽取患者空腹外周血5 ml，從血液中提取單核細(xì)胞，依據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果調(diào)整刺激細(xì)胞活化擴(kuò)增混合培養(yǎng)液的體積，將接種細(xì)胞的濃度保持在1×106/ml。進(jìn)行培養(yǎng)細(xì)胞，48 h 后，等體積補(bǔ)加含白介素-2（IL-2）的無血清培養(yǎng)基，以后根據(jù)細(xì)胞取樣計(jì)數(shù)結(jié)果，補(bǔ)充適量含IL-2 的無血清培養(yǎng)基。7 d后，細(xì)胞表型變化情況采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測，并對細(xì)胞密度進(jìn)行調(diào)整，在細(xì)胞培養(yǎng)14 d 后收獲細(xì)胞。在化療的基礎(chǔ)上給予患者CIK 治療，分次給患者回輸CIK，每次回輸?shù)募?xì)胞數(shù)量在3×109/ml 以上，回輸后，根據(jù)患者的免疫狀態(tài)給予其適量的皮下注射IL-2 及胸腺肽，每周給患者回輸CIK 細(xì)胞1 次，4 次為1 個(gè)療程，連續(xù)治療3 個(gè)療程。

1.4 觀察指標(biāo)及評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

比較兩組的療效，觀察兩組患者治療前后的免疫功能、B7H4 蛋白水平，具體如下。

1.4.1 療效判定標(biāo)準(zhǔn) 治療后，腫瘤完全消失為完全緩解；治療后，腫瘤消退50%以上，未產(chǎn)生新病灶為部分緩解；治療后，腫瘤消退在50%及以下為穩(wěn)定；治療后，腫瘤增大24%以上或產(chǎn)生新病灶為進(jìn)展[6]。總有效率=（完全緩解+部分緩解）例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.4.2 免疫功能 抽取患者治療前后的外周血5 ml，采用流式細(xì)胞儀（美國BD 公司）對兩組患者的CD4+、CD4+/CD8+指標(biāo)水平進(jìn)行檢測，比較患者的免疫功能。同時(shí)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對腫瘤標(biāo)志物癌胚抗原（CEA）進(jìn)行檢測。

1.4.3 B7H4 蛋白 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（海哈靈生物科技有限公司）對兩組患者治療前后外周血中B7H4蛋白水平進(jìn)行檢測。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采取SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。其中，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t 檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用頻數(shù)或百分率表示，采用χ2檢驗(yàn)，等級資料采用秩和檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者療效的比較

聯(lián)合組的總有效率高于化療組，療效優(yōu)于化療組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。

表1 兩組患者療效的比較[n（%）]

2.2 兩組患者治療前后免疫功能及CEA 水平的比較

兩組患者治療前的CD3+、CD4+/CD8+水平及CEA水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后，聯(lián)合組患者的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平高于本組治療前及化療組，CEA 水平低于本組治療前及化療組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；化療組治療后的CD3+、CD4+/CD8+水平高于治療前，CEA 水平低于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；化療組治療前后的CD4+水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（表2）。

表2 兩組患者治療前后免疫功能及腫瘤標(biāo)志物CEA 水平的比較（±s）

表2 兩組患者治療前后免疫功能及腫瘤標(biāo)志物CEA 水平的比較（±s）

聯(lián)合組（n=55）治療前治療后t 值P 值化療組（n=55）治療前治療后t 值P 值t 兩組治療前比較值P 兩組治療前比較值t 兩組治療后比較值P 兩組治療后比較值53.74±6.93 62.95±3.29 8.904＜0.001 53.97±6.73 58.27±5.32 3.717＜0.001 0.177 0.860 5.549＜0.001 27.93±4.92 34.75±3.30 8.538＜0.001 27.63±4.80 27.07±5.23 0.585 0.56 0.324 0.747 9.210＜0.001 0.97±0.63 1.59±0.34 6.423＜0.001 0.84±0.45 1.44±0.20 9.036＜0.001 1.245 0.216 2.820 0.006 7.30±0.76 3.42±0.82 25.737＜0.001 7.31±0.85 6.16±1.66 4.573＜0.001 0.065 0.948 10.975＜0.001組別 CD3+（%） CD4+（%） CD4+/CD8+ CEA（ng/ml）

2.3 兩組患者治療前后B7H4 蛋白水平的比較

兩組患者治療前的B7H4 水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；兩組患者治療后的B7H4 水平低于治療前，且聯(lián)合組治療后的B7H4 水平低于化療組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表3）。

表3 兩組患者治療前后B7H4 蛋白水平的比較（±s）

表3 兩組患者治療前后B7H4 蛋白水平的比較（±s）

聯(lián)合組化療組t 值P 值55 55 60.23±10.65 60.15±10.42 0.040 0.968 53.95±7.67 57.04±8.05 2.061 0.042 3.549 1.752 0.001 0.013組別 例數(shù) 治療前 治療后 t 值 P 值

3 討論

肺癌屬于惡性腫瘤，約占總體癌癥的11.6%[7]，本病死亡率也較高，約占總體癌癥死亡總數(shù)的18.4%。研究統(tǒng)計(jì)顯示，在新增肺癌210 萬例中，有180 萬人死亡。肺癌中，約85%的患者為非小細(xì)胞肺癌，肺腺癌及鱗狀癌均是最常見的亞型[8]。肺癌病因較為復(fù)雜，考慮與環(huán)境、激素、基因變異、吸煙等密切相關(guān)，但其主要發(fā)病因素與患者的吸煙史有關(guān)。研究顯示，約有80%以上的肺癌患者存在長期吸煙行為[9]。手術(shù)是治療肺癌的有效方法，隨著社會的發(fā)展，雖然治療肺癌技術(shù)日益成熟，但由于本病早期無顯著特征，一經(jīng)確診，患者已到中晚期，手術(shù)治療無法將腫瘤完全切除[10-12]，故化療成為了術(shù)后常見的治療方法?；熤饕约魉麨I、卡鉑、順鉑類等藥物作用于腫瘤部位，可延長患者生存期，但化療過程較為痛苦，易產(chǎn)生多種不良反應(yīng)，故需尋找有效的治療方法。

CIK 具有T 淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗腫瘤活性與限制性殺死腫瘤的特點(diǎn)[13]，其與化療聯(lián)合應(yīng)用能減輕毒副作用，提高患者的生活品質(zhì)，在肝癌、肺癌、宮頸癌等各類癌癥中均得到了廣泛的應(yīng)用，且療效顯著[14]。本研究顯示，與化療組相比，聯(lián)合組的總有效率顯著提高，提示在化療的基礎(chǔ)上聯(lián)合CIK 治療中晚期肺癌效果顯著。

有研究顯示，腫瘤患者外周血的T 淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量存在明顯異常，其中CD3+、CD4+數(shù)量明顯減少[15]。腫瘤患者的細(xì)胞免疫功能受到抑制，無法識別和殺死腫瘤細(xì)胞，故造成腫瘤的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移，提示有效評價(jià)T 淋巴細(xì)胞亞群有助于了解患者自身的免疫狀態(tài)，可以幫助醫(yī)師進(jìn)行合理的后續(xù)治療。本研究顯示，兩組治療前的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后，聯(lián)合組的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均高于化療組（P＜0.05），提示CIK 聯(lián)合化療可顯著提高中晚期肺癌患者的免疫功能。究其原因在于CIK 輸注后，T 淋巴細(xì)胞比例顯著增高或接近正常，患者免疫功能顯著增強(qiáng)。

B7H4 蛋白在各種腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達(dá)[16-17]，其與T 細(xì)胞表面受體相結(jié)合，使得T 細(xì)胞活化功能產(chǎn)生抑制，導(dǎo)致機(jī)體免疫功能下降[18]。研究顯示，B7H4 表達(dá)與腫瘤預(yù)后成負(fù)相關(guān)[19-20]，故檢測B7H4 蛋白水平可有效評估腫瘤患者的預(yù)后情況。本研究顯示，治療后，化療組的B7H4 蛋白水平呈現(xiàn)下調(diào)趨勢，與化療組比較差異顯著（P＜0.05），提示CIK 聯(lián)合化療能顯著下調(diào)B7H4 蛋白水平，改善患者預(yù)后。

綜上所述，CIK 聯(lián)合化療應(yīng)用于中晚期肺癌中具有理想的療效，能顯著提高患者的免疫功能，促進(jìn)患者預(yù)后。