不同濃度五倍子提取液對變形鏈球菌影響的體外研究

余 晶 鄧 蔚

南昌市第一醫(yī)院口腔科，江西南昌 330008

齲病是口腔臨床常見和多發(fā)的細(xì)菌性疾病，我國的平均患齲率在38%左右，兒童的患齲率可高達(dá)76.6%[1-2]。口腔的主要致齲菌種為變形鏈球菌，參與齲病的發(fā)生與發(fā)展，并且在早期產(chǎn)生菌斑生物膜的過程中起到不可忽視的作用[3]。因此，對菌斑的產(chǎn)生進(jìn)程進(jìn)行有效抑制，阻礙變形鏈球菌等致齲菌的出現(xiàn)、繁殖可有效防治齲病。當(dāng)前，氯已定、氟化物等在口腔領(lǐng)域內(nèi)是公認(rèn)的有較強(qiáng)抗菌能力的藥物，若長期使用會造成口腔菌群紊亂，口苦、著色等不良反應(yīng)，具有一定的局限性[4]。五倍子越來越被廣泛用于齲病的防治中，但其濃度的選擇不盡相同。本研究回顧性分析100 例齲病患者的臨床資料，探討不同濃度五倍子提取液對變形鏈球菌的影響，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2015年6月～2019年1月于我院治療的100 例齲病患者的臨床資料，根據(jù)患者治療方式的不同將其分為A 組（n=40）、B 組（n=30）和C 組（n=30）。A 組中，男20 例，女20 例；年齡6～25 歲，平均（12.16±2.09）歲；病程1～5年，平均（2.50±0.49）年。B組中，男15 例，女15 例；年齡5～26 歲，平均（12.11±2.14）歲；病程1～6年，平均（2.52±0.44）年；C 組中，男16 例，女14 例；年齡6～25 歲，平均（12.15±2.10）歲；病程1～4年，平均（2.54±0.46）年。三組的一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者均經(jīng)臨床確診為齲??；②患者病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他口腔疾病者；②患傳染性疾病者；③口腔嚴(yán)重感染者；④患有精神及意識障礙，不能配合采集口腔唾液者。

1.2 方法

A 組患者使用院內(nèi)自制的含氟漱口液漱口，使用中性或者酸性氟化鈉配方，0.2% NaF（900 mg/LF-），10 ml/次，含漱1 min 后吐出，半小時內(nèi)不進(jìn)食或漱口，1 次/周。

B 組患者使用液體二倍稀釋法稀釋為16 mg/ml濃度的五倍子提取液漱口，10 ml/次，含漱1 min 后吐出，半小時內(nèi)不進(jìn)食或漱口，1 次/周。五倍子提取液的提取方法：五倍子可購于中藥材市場；將1 kg 五倍子粉碎后置于60～70℃下用3 L 去離子水進(jìn)行10 h 的水浴，并多次振搖、過濾，合并濾液，將活性碳加入其中脫色、過濾，直至濾液濃縮為稠膏狀，獲取五倍子原藥；置入95%乙醇中后進(jìn)行攪拌溶解、過濾，乙醇液減壓濃縮得類白色粉末狀物，然后冷凍干燥，獲取五倍子水提取物純品干粉；依據(jù)具體需求配制不同濃度五倍子水提取物溶液，分裝后鈷（Co）-60 照射備用，并放于棕色玻璃瓶4℃下避光儲存[5]。

C 組患者使用液體二倍稀釋法稀釋為32 mg/ml濃度的五倍子提取液漱口，10 ml/次，含漱1 min 后吐出，半小時內(nèi)不進(jìn)食或漱口，1 次/周。五倍子提取液的提取方法同B 組。

三組患者均連續(xù)治療3 個月，并進(jìn)行為期半年的隨訪。

1.3 觀察指標(biāo)及評價標(biāo)準(zhǔn)

比較三組的細(xì)菌培養(yǎng)基中變形鏈球菌菌落數(shù)、不良反應(yīng)發(fā)生情況及隨訪期間復(fù)發(fā)情況。

①變形鏈球菌菌落數(shù)：分別于治療前后取患者口腔唾液制作細(xì)菌培養(yǎng)基，將口腔唾液樣本在BHI 瓊脂培養(yǎng)基上接種，放于37℃恒溫厭氧箱（85% N2，10%H2，5% CO2）中培養(yǎng)24 h；選取單克隆菌株轉(zhuǎn)種于內(nèi)有5 ml BHI 培養(yǎng)液試管內(nèi)，放于37℃YQX-Ⅲ型號的恒溫厭氧箱中（上海喬躍電子科技有限公司）持續(xù)培養(yǎng)24 h，制備菌懸液，調(diào)整濃度為100 CFU/ml 備用。對變形鏈球菌菌落數(shù)進(jìn)行計數(shù)，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。②不良反應(yīng)總發(fā)生率：統(tǒng)計并比較三組患者治療期間口腔神經(jīng)損傷、氟牙癥、氟中毒等并發(fā)癥總發(fā)生率。③復(fù)發(fā)率：統(tǒng)計并比較三組患者隨訪期間齲病復(fù)發(fā)情況，齲病治愈后又開始發(fā)展為淺齲（外表白堊色或黑褐色，探之有粗糙感或表面缺損、質(zhì)地松軟），或出現(xiàn)自覺癥狀（對冷、酸、熱、甜可出現(xiàn)激發(fā)性痛，刺激去除，癥狀消失）為復(fù)發(fā)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，三組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用配對樣本t 檢驗(yàn)； 計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組治療前后細(xì)菌培養(yǎng)基中變形鏈球菌菌落數(shù)的比較

治療前，三組細(xì)菌培養(yǎng)基中的變形鏈球菌菌落數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。治療后，三組細(xì)菌培養(yǎng)基中的變形鏈球菌菌落數(shù)均少于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；治療后，C 組的細(xì)菌培養(yǎng)基中變形鏈球菌菌落數(shù)少于A、B 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）； 治療后，B 組細(xì)菌培養(yǎng)基中的變形鏈球菌菌落數(shù)少于A 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。

表1 三組治療前后細(xì)菌培養(yǎng)基中變形鏈球菌菌落數(shù)的比較（CFU/ml，±s）

表1 三組治療前后細(xì)菌培養(yǎng)基中變形鏈球菌菌落數(shù)的比較（CFU/ml，±s）

“-”表示未測定，無數(shù)據(jù)

組別 治療前 治療后 t 值 P 值A(chǔ) 組（n=40）B 組（n=30）C 組（n=30）F 值P 值1325.25±200.04 1300.27±220.25 1315.27±210.66 0.122 0.885 6.618 7.058 15.532 0.000 0.000 0.000 tC 組與A 組比較值PC 組與A 組比較值tC 組與B 組比較值PC 組與B 組比較值tB 組與A 組比較值PB 組與A 組比較值------1056.98±160.33 956.66±150.33 622.75±123.55 78.200 0.000 12.217 0.000 8.788 0.000 2.823 0.006

2.2 三組患者不良反應(yīng)總發(fā)生率的比較

三組患者均未出現(xiàn)氟中毒，C 組患者治療期間的不良反應(yīng)總發(fā)生率低于A 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；B 組患者治療期間的不良反應(yīng)總發(fā)生率低于A組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；C 組患者治療期間的不良反應(yīng)總發(fā)生率與B 組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）（表2）。

表2 三組患者不良反應(yīng)總發(fā)生率的比較[n（%）]

2.3 三組患者復(fù)發(fā)率的比較

C 組患者隨訪期間的復(fù)發(fā)率為0.00%（0/30），低于A 組的20.00%（8/40），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=6.774，P=0.009）；B 組患者隨訪期間的復(fù)發(fā)率為3.33%（1/30），低于A 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.250，P=0.039）；C組患者隨訪期間的復(fù)發(fā)率與B 組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=1.017，P=0.313）。

3 討論

齲病是口腔臨床常見和多發(fā)的細(xì)菌性疾病，是導(dǎo)致中國人失牙的第二大病因[6]。引發(fā)口腔疾病的主要致齲菌為變形鏈球菌、黏性放線菌、血鏈球菌等。其中變形鏈球菌在齲病的產(chǎn)生中起到最為主要的作用，在早期產(chǎn)生菌斑生物膜中作用也十分明顯。一般而言，沒有致齲菌，就不會引起齲病。菌斑生物膜這種特定的生態(tài)環(huán)境是致齲菌賴以生存的基礎(chǔ)，因此對菌斑的形成進(jìn)行控制，對變形鏈球菌等致齲菌的生長繁殖進(jìn)行有效的抑制能有效防治齲病[7]。

以往臨床多使用氟化物防齲，氟可以較為明顯的降低患齲率，是當(dāng)前全球范圍內(nèi)公認(rèn)的最有效的防齲手段之一[8]。但如果對水、牛奶及食鹽中的有效濃度不能嚴(yán)格進(jìn)行控制會引發(fā)氟牙癥、氟骨癥等，且長時間使用含氟牙膏會產(chǎn)生耐氟菌株，不利于防齲。因此，尋求一種無毒副作用并具有防齲功能的方式來防治齲病十分重要。中草藥為自然生藥，其抗菌作用一般比抗生素和化學(xué)藥劑弱，但對機(jī)體副作用小，有著較弱的耐藥性，且對需氧菌以及厭氧菌抗菌效果好，故用中草藥治療感染性疾病有較大的優(yōu)勢[9-10]。其中五倍子對細(xì)菌的抑制作用早已得到證實(shí)，在口腔領(lǐng)域中的應(yīng)用已備受關(guān)注。五倍子具有斂肺降火、 澀腸止瀉、收濕斂瘡等功效，抗菌性能好，且毒副作用相對較小[11-12]。同時五倍子提取物不但能抑制致齲菌，也能對牙齒硬組織產(chǎn)生影響。因?yàn)槲灞蹲又兄饕瘜W(xué)成分為鞣質(zhì)，有抑制細(xì)菌、絡(luò)合、抗氧化等多重功效，口腔科學(xué)者們將五倍子用于口腔領(lǐng)域，發(fā)現(xiàn)其對各種口腔常見致病菌有抑制作用，同時能夠抑制脫礦，促進(jìn)再礦化[13-14]。且有體外和動物實(shí)驗(yàn)研究表明在五倍子對齲病防治、牙周病治療、根管消毒等方面有著巨大的潛力[15]。本研究結(jié)果顯示，治療后，三組細(xì)菌培養(yǎng)基中的變形鏈球菌菌落數(shù)均少于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；治療后，B、C 組細(xì)菌培養(yǎng)基中的變形鏈球菌菌落數(shù)少于A 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；治療后，C 組細(xì)菌培養(yǎng)基中的變形鏈球菌菌落數(shù)少于B 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；B、C 組患者治療期間的不良反應(yīng)總發(fā)生率均低于A 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；B、C 組患者隨訪期間的復(fù)發(fā)率均低于A 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。提示32 mg/ml的高濃度五倍子提取液用于齲病患者的臨床治療中，能有效減少變形鏈球菌菌落數(shù)，對變形鏈球菌的抑菌作用更強(qiáng)，且能有效降低不良反應(yīng)總發(fā)生率以及復(fù)發(fā)率，安全性較高，治療效果較好。

綜上所述，在齲病患者中使用32 mg/ml 高濃度五倍子提取液的抑菌效果較好，能有效提高抑制鏈球菌的效果，降低不良反應(yīng)發(fā)生率以及復(fù)發(fā)率，安全性較高。