赤蒼藤莖化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)及薄層色譜分析

潘喬丹 黃元河 莫緒秀 譚文溚 陸海峰

1.右江民族醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，廣西 百色 533000 2.右江民族醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，廣西 百色 533000

藥食同源植物赤蒼藤ErythropalumscandensBl.為鐵青樹科植物，別名為螞蟥藤、十丈藤、龍須藤等。其性平，微苦，具清熱利濕、祛風(fēng)活血的功效，主治水腫、小便不利、黃疸、半身不遂、風(fēng)濕骨痛和跌打損傷等[1]，在民間用于清熱利濕、去黃疸，其嫩葉、莖可食用。赤蒼藤可用于尿酸、風(fēng)濕骨病、肝膽濕熱、腹痛、腹瀉、尿頻、尿急、尿痛、小便不利等癥[1-2]，并具有較高的食用價(jià)值現(xiàn)已引起廣泛關(guān)注。前期課題組也實(shí)驗(yàn)證實(shí)赤蒼藤能預(yù)防和治療高尿酸血癥[3]，現(xiàn)代藥理研究證實(shí)赤蒼藤莖葉水提物具有抗痛風(fēng)作用[4]。研究發(fā)現(xiàn)赤蒼藤莖根的化學(xué)成分中含有蘇門樹脂酸、桂皮酸松柏醇酯、酚類及三萜類化合物[5]。國內(nèi)外學(xué)生通過GC-MS技術(shù)從赤蒼藤葉揮發(fā)油中分析出二十七烷、1-辛烯- 3-醇等鏈狀脂肪族、芳香族和萜類化合物[6]，從赤蒼藤根莖乙酸乙酯部位分析出脂肪酸、烯酸類共13個(gè)化合物[7]。目前對赤蒼藤莖的研究主要集中在根莖部位，其化學(xué)成分主要為羧酸類、萜類和揮發(fā)性成分等。而赤蒼藤起到降尿酸作用的主要部位是莖，目前對這些活性部位化學(xué)成分的缺少系統(tǒng)研究。為了更好地明確其降尿酸有效成分，本次研究采用植物化學(xué)成分系統(tǒng)預(yù)試法和薄層色譜法對赤蒼藤莖的化學(xué)成分進(jìn)行初步研究，為日后的提取、分離、純化奠定基礎(chǔ)。

1 材料與儀器

1.1 材料 赤蒼藤(ErythropalumscandensBl.)莖粉末購置廣西赤蒼藤生物科技有限責(zé)任公司，經(jīng)過右江民族醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物教研室黃元河副教授鑒定。

1.2 試劑 石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮、二氯甲烷、氯仿、95%乙醇、濃硫酸、氫氧化鈉、鹽酸、三氯化鐵、硫酸銅，酒石酸鉀鈉、醋酸鎂、氯化鈉、醋酸、香草醛、氨水、雙氧水、氫氧化鉀(西隴科學(xué)股份有限公司，分析純)；間二硝基苯甲酸、α-萘酚、茚三酮、氨水、鐵氰化鉀、溴酚藍(lán)、碘化鉍鉀、碘化汞鉀、鹽酸羥胺、硅鎢酸(上海易恩化學(xué)技術(shù)有限公司，分析純)；鎂粉(浙江常青化工有限公司)、明膠(北京沃凱生物科技有限公司，化學(xué)純)；去離子水，自制。

1.2 儀器 RE-3000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；低溫冷卻循環(huán)泵(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)HHS-21-4電熱式恒溫水浴鍋(江蘇金壇宏凱儀器廠)；SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式多用真空泵(河南省予華儀器有限公司)；FA1004型電子天平(上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司)；ZF-2暗箱式紫外分析儀(北京凱迪萊特儀器設(shè)備有限公司)；薄層層析硅膠板HSGF254(煙臺江友硅膠開發(fā)有限公司)；H2OBASIC-B超純水機(jī)(德國賽多利斯集團(tuán))。

賽多利斯

2 方法與結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)方法

2.1.1 赤蒼藤莖化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn) 參照《天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》[9]和 《中藥化學(xué)》[10]中介紹的預(yù)試驗(yàn)方法對赤蒼藤莖的化學(xué)成分進(jìn)行分析。

2.1.1.1 水供試液的制備 稱取赤蒼藤莖粉末50 g于圓底燒瓶中，加水500 mL，放在50～60℃的水浴鍋上加熱約2～3 h后趁熱抽濾，檢測濾液中是否含有糖、有機(jī)酸、氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、酚類、生物堿、苷類或多糖、鞣質(zhì)等成分。

2.1.1.2 石油醚供試液的制備 稱取赤蒼藤莖粉末50 g于圓底燒瓶中，加入石油醚400 mL，塞緊密閉，并且不定時(shí)的搖蕩，靜置12 h，抽濾，得石油醚供試液，其檢查項(xiàng)目與水供試液一樣。

2.1.3 乙醇供試液的制備 稱取赤蒼藤莖粉末100 g，按料液比1∶10(g/mL)加入70% 乙醇，加熱回流提取1 h，抽濾，取濾液檢測是否含有有機(jī)酸、內(nèi)酯及甾體、酚類、鞣質(zhì)、苷類、黃酮類、香豆素類、三帖皂苷類、蒽醌類等化學(xué)成分。

2.2 赤蒼藤莖化學(xué)成分薄層色譜分析

2.2.1 赤蒼藤莖不同極性部分浸膏的制備 稱取赤蒼藤莖粉末200g于圓底燒瓶中，按料液比1∶10(g/mL)加入95% 乙醇，加熱回流提取 1 h，抽濾，重復(fù)3 次后合并所得濾液，減壓濃縮得到乙醇提取物浸膏。浸膏先用蒸餾水混懸后，按照極性大小，逐級用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，濃縮后，分別得到石油醚層、乙酸乙酯層、正丁醇層三種赤蒼藤莖不同極性部分的浸膏。

2.2.2 赤蒼藤莖化學(xué)成分薄層色譜分析 用毛細(xì)管取以上不同極性的萃取部分點(diǎn)樣于HSGF254硅膠薄板上，分別置于不同的展開系統(tǒng)中展開，當(dāng)溶劑前沿距板上端約 1 cm時(shí)取出，揮干展開劑。先在紫外光下(254、365nm)觀察熒光，然后分別用碘蒸氣和5%硫酸乙醇顯色，記錄各斑點(diǎn)顏色及Rf值。

2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3.1 赤蒼藤莖化學(xué)成分預(yù)試驗(yàn)結(jié)果

2.3.1.1 赤蒼藤莖水提取液預(yù)試結(jié)果 赤蒼藤莖水提取物中有氨基酸、多肽蛋白質(zhì)類、有機(jī)酸、多糖和苷類、酚類。見表1。

2.3.1.2 赤蒼藤莖石油醚提取液預(yù)試結(jié)果 石油醚提取物化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，三萜類、揮發(fā)油、油脂類反應(yīng)現(xiàn)象與反應(yīng)指標(biāo)相符合，為陽性表現(xiàn)。結(jié)果表明赤蒼藤莖石油醚提取物中有三萜類、揮發(fā)油、油脂類化合物。見表2。

表1 赤蒼藤莖水提取液預(yù)試結(jié)果

表2 赤蒼藤莖石油醚提取液預(yù)試結(jié)果

2.3.1.3 赤蒼藤莖醇提取液預(yù)試結(jié)果 赤蒼藤莖醇提取物中，黃酮類、酚類、有機(jī)酸、三萜類、生物堿類、香豆素類化合物的反應(yīng)現(xiàn)象與反應(yīng)指標(biāo)相同，而強(qiáng)心苷類則沒有與反應(yīng)指標(biāo)相同的反應(yīng)現(xiàn)象，根據(jù)結(jié)果可知，赤蒼藤莖醇提取物中可能有黃酮類、酚類、生物堿類、三萜類、香豆素類化合物，而不含強(qiáng)心苷類。見表3。

表3 赤蒼藤莖醇提取液預(yù)試結(jié)果

續(xù)表3

2.3.2 赤蒼藤莖不同極性部位薄層色譜分析

2.3.2.1 石油醚部分 赤蒼藤莖石油醚部分用4種展開劑展開，見表4。由表4可知，V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)=8∶3的展開效果最佳，用5%硫酸乙醇顯色呈現(xiàn)9個(gè)斑點(diǎn)，254 nm熒光下可見3個(gè)斑點(diǎn)，365 nm熒光下可見4個(gè)斑點(diǎn)，如圖1所示。

表4 石油醚部分薄層分析結(jié)果

A.石油醚部分(石油醚:乙酸乙酯=8∶3)；B.乙酸乙酯部分(石油醚:丙酮=8∶3)；C.正丁醇部分(氯仿:甲醇:水=6∶2∶0.2)圖1 赤蒼藤不同極性部位薄層色譜圖

2.3.2.2 乙酸乙酯部分 赤蒼藤莖乙酸乙酯部分用4種展開劑展開，見表5。由表5可知，V(石油醚):V(丙酮)=8∶3的展開效果最佳，5%硫酸乙醇顯色呈現(xiàn)8個(gè)斑點(diǎn)，254 nm熒光下可見8個(gè)斑點(diǎn)，365 nm熒光下可見4個(gè)斑點(diǎn)，如圖1所示。

2.3.2.3 正丁醇部分 赤蒼藤莖正丁醇部分用4種展開劑展開，見表6。由表6可知，V(氯仿)：V(甲醇)：V(水)=6∶2∶0.2的展開效果最佳，用5%硫酸乙醇顯色呈現(xiàn)8個(gè)斑點(diǎn)，254 nm熒光下可見7個(gè)斑點(diǎn)，365 nm熒光下可見8個(gè)斑點(diǎn)，如圖1所示。

表5 乙酸乙酯部分薄層分析結(jié)果

表6 正丁醇部分薄層分析結(jié)果

3 討論

薄層色譜技術(shù)和中藥化學(xué)預(yù)實(shí)驗(yàn)均是迅速、簡單、結(jié)果可以直接觀察的檢測技術(shù)[10]。到目前在植物化學(xué)成分定性分析使用范圍比較廣、使用頻率高。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示赤蒼藤莖水提取物中有氨基酸、多肽蛋白質(zhì)類、有機(jī)酸、多糖和苷類、酚類；赤蒼藤莖石油醚提取物中有三萜類、揮發(fā)油、油脂類化合物；赤蒼藤莖醇提取物中有黃酮類、酚類、生物堿、三萜類、香豆素類化合物。目前研究發(fā)現(xiàn)在一些植物種多糖、黃酮類、苷類、酚類、香豆素類化合物具有較好的降尿酸活性[11-15]，通過化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)，筆者初步推測，赤蒼藤莖中降尿酸主要成分來源于水提取物和醇提取物，這和動(dòng)物活性實(shí)驗(yàn)相印證[3-4]。在此基礎(chǔ)上，通過對赤蒼藤莖醇提取物各部分進(jìn)行薄層色譜分析，其石油醚、乙酸乙酯和正丁醇部分至少含9、8、8種化合物。本試驗(yàn)初步確定赤蒼藤莖可能含有的化學(xué)成分，為進(jìn)一步研究該植物生物活性成分的提取、分離和純化提供了初步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，及其各萃取部分的指紋圖譜建立提供依據(jù)。