E-cad、MGMT和P-gp在胰腺導(dǎo)管腺癌中的表達(dá)及臨床意義

孫彥珍，郭廣秀，張功亮，黃金長

（贛州市人民醫(yī)院病理科，江西 贛州341000）

胰腺癌是一種惡性程度很高的消化系統(tǒng)腫瘤，近年來它的發(fā)病率和死亡率在許多國家均呈上升趨勢，其中95%的患者在診斷后的1年內(nèi)死亡，總體5年生存率僅有6%［1］。胰腺癌的臨床癥狀隱蔽，早期確診率低，侵襲性強(qiáng)，預(yù)后差。胰腺癌80%～90%為導(dǎo)管腺癌，因此研究胰腺導(dǎo)管腺癌浸潤、轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制和有效的臨床診斷方法具有重要意義。E-鈣黏蛋白（E-cadherin protein，E-cad）為一種介導(dǎo)細(xì)胞間粘附的鈣依賴性跨膜糖蛋白，可維持細(xì)胞間的連接作用［2］。MGMT是機(jī)體修復(fù)烷基化合物的關(guān)鍵酶，對抗烷化劑造成的DNA損傷，與多種腫瘤發(fā)生相關(guān)。P-gp是目前廣泛關(guān)注的多藥耐藥蛋白，與腫瘤細(xì)胞的選擇性耐藥密切相關(guān)。本研究旨在討論這三種蛋白在胰腺導(dǎo)管腺癌中的表達(dá)與各臨床參數(shù)的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 材料收集贛州市人民醫(yī)院病理科2016年至2020年手術(shù)切除的原發(fā)性胰腺導(dǎo)管腺癌石蠟標(biāo)本30例，術(shù)前均未經(jīng)過放、化療治療，且有完整的臨床病理資料。其中女性14例，男性16例。年齡36～91歲，平均56歲。高-中分化18例，低分化12例。取正常胰腺組織10例為對照組，來自外傷性胰腺或胰腺炎行部分胰腺組織切除標(biāo)本。

1.2 主要試劑兔抗人E-cad單克隆抗體，鼠抗人MGMT單克隆抗體及鼠抗人P-gp單克隆抗體均購自福州邁新公司，均為工作液。

1.3 方法采用免疫組織化學(xué)SP法檢測E-cad，MGMT及P-gp蛋白的表達(dá)。組織標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林固定，常規(guī)制作石蠟包埋切片，切片厚度為3μm，免疫組化步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，同時每例復(fù)染HE切片1張。用已知陽性切片作為陽性對照，用PBS代替一抗作為空白對照，用DAB顯色。

1.4 結(jié)果判斷根據(jù)陽性對照及內(nèi)對照判定實(shí)驗(yàn)的成功與否，兩名高年資病理醫(yī)師用×400高倍鏡觀察，隨機(jī)選取5個不重疊視野，每個視野計數(shù)200個細(xì)胞，陽性細(xì)胞數(shù)＞10個，判讀為陽性，以細(xì)胞核、胞質(zhì)和胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 15.0軟件對不同組別的陽性表達(dá)率進(jìn)行比較，采用χ2檢驗(yàn)和Fisher確切概率計算。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 E-cad的表達(dá)情況E-cad在胞膜著色（圖1），在胰腺導(dǎo)管腺癌組織的陽性率為46.7%，在正常胰腺組織的陽性率為100%。在高-中分化的胰腺導(dǎo)管腺癌中陽性率為55.6%，低分化胰腺導(dǎo)管腺癌中陽性率為33.3%，高-中分化的陽性率高于低分化的陽性率（P＜0.05）。在有脈管癌栓的胰腺導(dǎo)管腺癌組織中陽性率為22.2%，無脈管癌栓的陽性率為38.1%，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。在有神經(jīng)束膜侵犯的胰腺導(dǎo)管腺癌組織中的陽性率為20%，無神經(jīng)束膜侵犯的陽性率為60%，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，見表1）。

圖1 E-cad在胰腺癌中的表達(dá)，膜陽性（HE染色，×400）

表1 E-cad在胰腺癌中的表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系

2.2 MGMT的表達(dá)情況MGMT在胞漿著色（圖2），在胰腺導(dǎo)管腺癌組的陽性率為70%，正常胰腺組織為30%。有神經(jīng)束膜侵犯的胰腺癌的陽性率為20%，無神經(jīng)束膜侵犯的陽性率為60%，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，見表2）。在組織學(xué)分級和是否有脈管癌栓的胰腺導(dǎo)管腺癌中的陽性表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05，見表2）。

圖2 MGMT在胰腺癌中的表達(dá)，胞漿陽性（HE染色，×400

表2 MGMT在胰腺癌中的表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系

圖3 P-gp在胰腺癌中的表達(dá)，膜/質(zhì)陽性（HE染色，×400）

2.3 P-gp的表達(dá)情況P-gp在細(xì)胞膜/質(zhì)著色（圖3）。在有脈管癌栓的胰腺導(dǎo)管腺癌中陽性率為22.2%，無脈管癌栓的陽性率為47.6%，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。有神經(jīng)束膜侵犯的胰腺導(dǎo)管腺癌的陽性率為26.7%，無神經(jīng)束膜侵犯的陽性率為66.7%，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，見表3）。在不同組織學(xué)分級的胰腺導(dǎo)管腺癌表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表3）。

表3 P-gp在胰腺癌中的表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系

3 討論

上皮-鈣粘素（E-cad）是一種鈣依賴性黏附分子，在細(xì)胞與細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)的黏附中發(fā)揮重要作用，它使細(xì)胞位置固定，不易浸潤脈管及周圍組織。作為跨膜蛋白，它可以連接微絲及肌動蛋白等形成連接復(fù)合體，并與相鄰細(xì)胞中復(fù)合體連接，使之形成穩(wěn)定連接［3］。E-cad是維持細(xì)胞極性和緊密連接的重要因子，若E-cad蛋白表達(dá)下降或功能抑制，細(xì)胞間的連接能力就會減弱，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞發(fā)生浸潤性生長和轉(zhuǎn)移［4］。許多研究發(fā)現(xiàn)［5］，E-cad表達(dá)下調(diào)與口腔鱗癌、喉癌、胃癌、胰腺癌和卵巢癌等惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移關(guān)系密切［6］，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。本研究中，胰腺導(dǎo)管腺癌組織E-cad蛋白的陽性表達(dá)率為46.7%，遠(yuǎn)低于其在正常胰腺組織的100%的表達(dá)，說明E-cad表達(dá)下調(diào)與胰腺導(dǎo)管腺癌的發(fā)生、發(fā)展有重要聯(lián)系，而且與文獻(xiàn)中E-cad在胃、食管癌中表達(dá)的研究結(jié)果相似［7］。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討E-cad表達(dá)與臨床病理因素的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)E-cad的表達(dá)僅與胰腺癌的組織學(xué)分級、有無脈管癌栓及神經(jīng)束膜侵犯相關(guān)，而與腫瘤直徑大小無關(guān)，說明胰腺癌的發(fā)生發(fā)展及侵襲性與E-cad蛋白有關(guān)。

O6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（O6-methylguanine-DNA methytransferase，MGMT）是一個重要的DNA直接修復(fù)酶，能將甲基轉(zhuǎn)移到自身的半胱氨酸殘基上，修復(fù)DNA的損傷［8］。啟動子甲基化可以下調(diào)其基因轉(zhuǎn)錄，降低細(xì)胞MGMT的表達(dá)，而去甲基化可以逆轉(zhuǎn)由烷化劑引起的DNA損傷，從而導(dǎo)致對替莫唑胺和亞硝基脲類化療藥物的耐藥性［9］。MGMT蛋白的表達(dá)量與其啟動子甲基化的水平相關(guān)，甲基化后可使MGMT蛋白的表達(dá)減少，從而提高患者對治療的敏感性［10］。目前，MGMT在膠質(zhì)瘤的研究較多，發(fā)現(xiàn)其與腫瘤耐藥性有關(guān)，并影響患者的預(yù)后［11-13］。有研究表明MGMT表達(dá)與多種腫瘤的發(fā)生及耐藥性密切相關(guān)，如食管癌、乳腺癌、胃癌、¨肝癌［14-17］等。MGMT表達(dá)具有組織及細(xì)胞類型特異性，mRNA水平和蛋白水平是一致的。MGMT基因調(diào)節(jié)失活增加了靶細(xì)胞對烷化劑損傷。MGMT修復(fù)烷化劑破壞細(xì)胞的DNA復(fù)制，從而使化療藥物對腫瘤細(xì)胞敏感性降低。有研究發(fā)現(xiàn)低水平的MGMT比高水平的MGMT化療效果好［18］。本研究顯示MGMT在胰腺導(dǎo)管腺癌組織中的陽性表達(dá)率為70%，提示胰腺導(dǎo)管腺癌對烷化劑有較高的原發(fā)耐藥率，對化療藥的使用有一定阻礙作用。

P-gp是ATP結(jié)合盒（ATP-binding cassette）轉(zhuǎn)運(yùn)體家族中重要的外排轉(zhuǎn)運(yùn)體，是由多藥耐藥基因MDRI編碼的一種跨膜糖蛋白，通過與抗癌藥物結(jié)合，利用ATP供能將輸水親脂性化療藥物如長春新堿等轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞外，使細(xì)胞內(nèi)藥物濃度降低，產(chǎn)生耐藥［19-20］。P-gp能直接或間接地參與細(xì)胞的分子代謝，抵抗caspase依賴性凋亡，在細(xì)胞凋亡中可能發(fā)揮重要的調(diào)控作用［21］。對于P-gp高表達(dá)的腫瘤患者，臨床應(yīng)慎重合理選擇化療藥物。P-gp為MDRI基因所編碼，研究表明，P-gp水平隨MDRI基因擴(kuò)增及Mrna增加而增加［22］，本研究顯示P-gp在胰腺癌組的陽性表達(dá)率為50%，其表達(dá)與脈管及神經(jīng)束膜侵犯相關(guān)（P＜0.05）。P-gp的高表達(dá)提示預(yù)后不良，可能對相應(yīng)的化療藥產(chǎn)生耐藥性。通過對P-gp的檢測可以為臨床化療藥物的選用及進(jìn)一步的有效治療提供可靠的理論依據(jù)。

胰腺位于機(jī)體上腹部較深位置，血供較差，出現(xiàn)病變后不易及早發(fā)現(xiàn)，多數(shù)患者在確診時，胰腺腫瘤已發(fā)生轉(zhuǎn)移，無法通過手術(shù)治療。

綜上所述，通過對E-cd、MGMT及P-gp的聯(lián)合檢測分析，可以為胰腺導(dǎo)管腺癌發(fā)展和轉(zhuǎn)移進(jìn)行預(yù)測評估，為臨床耐藥逆轉(zhuǎn)劑的選擇，制定有效的治療方案提供更可靠的科學(xué)依據(jù)。