兩種甜葉菊廢渣提取物對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠的抗氧化作用

楊華青 趙 磊* 徐美利 王 鑫 連運(yùn)河 王成濤

（1 食品營(yíng)養(yǎng)與人類健康北京高精尖創(chuàng)新中心 北京市食品添加劑工程技術(shù)研究中心北京工商大學(xué) 北京100048 2 晨光生物科技集團(tuán)股份有限公司 河北邯鄲057250）

甜葉菊（Stevia rebaudiana Bertoni）屬多年生菊科草本植物，原產(chǎn)于南美洲和巴西的高山草甸，特別是南美巴拉圭東北部[1]。甜葉菊中富含甜菊糖苷，被廣泛用作天然甜味劑。有研究報(bào)道[2]從甜菊提取物中鑒定出89 種化合物，并將其分為多酚類化合物、萜類化合物、氨基酸衍生物、脂肪酸及其衍生物類、低聚糖、糖脂類、嘌呤和維甲酸等。這些化合物具有多種生物活性，如抗氧化[3]，抑菌[4]，抗腫瘤[5]等。甜菊提取物中的多酚和黃酮類化合物具有很強(qiáng)的體外清除自由基的能力[6]。然而，關(guān)于甜葉菊提取物體內(nèi)抗氧化活性的研究鮮有報(bào)道。在生產(chǎn)甜菊糖苷的過程中會(huì)產(chǎn)生大量的絮凝廢渣，其中含有大量的多酚類化合物，而這些副產(chǎn)物尚未得到充分利用。研究甜葉菊廢渣提取物的抗氧化、抗衰老作用，對(duì)充分開發(fā)利用甜葉菊資源具有重要意義。

本研究采用高效液相色譜法（HPLC）對(duì)兩種甜葉菊廢渣提取物中的主要成分進(jìn)行定量分析，并測(cè)定其對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠血清、肝臟和腦組織中一些重要的抗氧化指標(biāo)（如超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）和丙二醛（MDA）），以及腦組織中Nrf2 及其靶基因（SOD1，GPx1，HO-1）的mRNA 表達(dá)水平的影響等，探討甜葉菊廢渣提取物對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠的抗氧化作用，為其進(jìn)一步開發(fā)和應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

兩種甜葉菊廢渣提取物，晨光生物科技集團(tuán)股份有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF 級(jí)昆明種雄性小鼠（33～37 g，SPF 級(jí)，8 周齡），軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK-（軍）2012-0004。

1.3 主要試劑

D-半乳糖（分析純級(jí)），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；茶多酚（茶多酚>88%、EGCG>40%、兒茶素=0.76%），成都華高生物制品有限公司；咖啡酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C、槲皮素、槲皮苷（純度均≧98%），成都瑞芬斯生物科技有限公司；超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶 （GPx）、丙二醛（MDA） 測(cè)定試劑盒，南京建成生物工程研究所；BCA 法蛋白定量試劑盒、高純總RNA 快速提取試劑盒（離心柱型），北京百泰克生物技術(shù)有限公司；FastQuant cDNA 第一鏈合成試劑盒（去基因組），天根生化科技（北京）有限公司；甲醇（色譜級(jí)），北京邁瑞達(dá)科技有限公司；其它試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純級(jí)。

1.4 儀器與設(shè)備

Agilent 1290 超高效液相色譜，美國(guó)安捷倫科技有限公司；DY89Ⅱ勻漿機(jī)，寧波新芝生物科技有限公司；SpectraMax13 連續(xù)波長(zhǎng)多功能酶標(biāo)儀，美國(guó)Molecular Devices 公司；3K15 臺(tái)式離心機(jī)，德國(guó)Sigma 公司；S1000PCR 擴(kuò)增儀、CFX96 熒光定量PCR 儀，美國(guó)伯樂公司；NanoDropTM2000 微量紫外-可見光分光光度計(jì)，美國(guó)賽默飛世爾公司。

1.5 試驗(yàn)方法

1.5.1 兩種甜葉菊廢渣提取物中主要成分的定量分析 本實(shí)驗(yàn)室研究人員前期研究證實(shí)，甜葉菊廢渣提取物的主要成分為咖啡酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C、槲皮素和槲皮苷[7]。采用HPLC 法對(duì)兩種甜葉菊廢渣提取物中的主要成分進(jìn)行定量分析。高效液相色譜條件為：Agilent Eclipse Plus C18色譜柱 （50 mm ×2.1 mm，1.8 μm），流動(dòng)相為0.1%甲酸（A）和甲醇（B），流速0.1 mL/min。洗脫程序：0～10 min，10%～50%（B）；10 ～12 min，50%～10%（B）；12 ～15 min，10%（B）。檢測(cè)波長(zhǎng)320 nm 和360 nm，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量1 μL。采用咖啡酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C、槲皮素和槲皮苷為標(biāo)準(zhǔn)品，按上述色譜條件分別測(cè)定。以標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制HPLC 標(biāo)準(zhǔn)曲線，并測(cè)定兩種甜葉菊廢渣提取物中各主要成分的含量。

1.5.2 甜葉菊廢渣提取物對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠的抗氧化作用

1.5.2.1 小鼠飼養(yǎng)條件 小鼠飼養(yǎng)于北京市食品添加劑工程技術(shù)研究中心，室內(nèi)通風(fēng)條件良好，正常晝夜變化（9：00-21：00），相對(duì)濕度（40 ± 5）%，室溫（21±2）℃。

1.5.2.2 實(shí)驗(yàn)分組及操作 80 只實(shí)驗(yàn)小鼠適應(yīng)7 d，喂食普通飼料，自由飲水、覓食。適應(yīng)期后，隨機(jī)等分為正常組、D-半乳糖組、兩種甜葉菊廢渣提取物低、中、高劑量組（分別灌胃100，200，500 mg/kg bw 甜葉菊廢渣提取物），每組10 只，同時(shí)用苦味酸對(duì)小鼠進(jìn)行編號(hào)。各組在灌胃的同時(shí)，D-半乳糖組和甜葉菊廢渣提取物組，頸背部皮下注射5%的D-半乳糖溶液（500 mg/kg bw），正常組注射等體積的生理鹽水。每日給藥1 次，持續(xù)時(shí)間為11 周。

1.5.2.3 待測(cè)樣本制備 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，小鼠禁食（不禁水）11 h。11 h 后，小鼠摘眼球取血，全血收集于干凈的1.5 mL 離心管中，37 ℃水浴15 min，4 000×g 離心15 min 分離血清，-80 ℃保存待測(cè)。采血后，將小鼠斷頸處死并解剖，取出肝臟和腦組織并將其在預(yù)冷的生理鹽水中漂洗，去除血液，用濾紙吸干表面水分。將肝臟和腦組織一部分放入小離心管里，立即放入液氮（-196 ℃）中速凍，轉(zhuǎn)入超低溫冰箱（-80 ℃）存放，備用。另一部分剪碎，加入9 倍0.9%預(yù)冷的生理鹽水，置玻璃勻漿器中冰水浴迅速研磨制成組織勻漿，4 ℃，12 000×g 離心15 min，取上清液，-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5.2.4 血清及組織抗氧化指標(biāo)的測(cè)定 測(cè)定血清、肝和腦組織勻漿中SOD，GPx 活力及MDA 含量，檢測(cè)方法具體操作按試劑盒說明進(jìn)行。

1.5.2.5 熒光定量PCR 檢測(cè)小鼠腦mRNA 表達(dá)水平 采用高純總RNA 快速提取試劑盒提取各組小鼠腦組織中總RNA，使用NanoDropTM2000微量紫外-可見光分光光度計(jì)檢測(cè)其完整性及其濃度。按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說明，將提取的RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA 并置于-20 ℃保存。通過SYBR Green 法進(jìn)行熒光定量，反應(yīng)體系如下（20 μL）：無RNA 酶 水7.4 μL，SuperReal PreMix Plus（SYBR Green）10 μL，上下游引物各0.8 μL，cDNA 模板1 μL。RT-PCR 反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性3 min，94 ℃變性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，40 個(gè)循環(huán)。以β-actin 為內(nèi)參基因進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR 分析。計(jì)算方法采用比較CT 值法（2-（ΔΔCt））。涉及的引物序列見表1。

表1 實(shí)時(shí)定量PCR 引物序列列表Table 1 List of primer sequences used in the quantitative real-time PCR for gene expression analysis

1.5.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件，試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)偏差（Mean±SD）表示，用單因素方差分析（one-way ANOVA）及多重比較（Duncan）進(jìn)行差異顯著性分析，P ＜0.05 為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 兩種甜葉菊廢渣提取物中主要成分的含量

按照1.5.1 節(jié)試驗(yàn)方法，通過與標(biāo)準(zhǔn)品出峰時(shí)間相比較，從甜葉菊廢渣提取物中分離并檢測(cè)到了6 種酚酸（320 nm）和2 種黃酮（360 nm），如圖1所示。采用外標(biāo)法對(duì)上述8 種主要成分含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表2。樣品1 中總酚酸的含量為（472.01±2.28）mg/g，總黃酮的含量為（75.27±1.37）mg/g，其中含量最高的3 種成分依次為異綠原酸C（158.91±1.00）mg/g、異綠原酸B（116.39±0.57）mg/g 和咖啡酸（105.67±0.37）mg/g。樣品2 中總酚酸的含量為（424.41±5.01）mg/g，總黃酮的含量為（46.4±2.36）mg/g，其中含量最高的3 種成分依次為咖啡酸（146.47±1.68）mg/g、異綠原酸C（88.73 ±1.05）mg/g 和異綠原酸B（67.38±0.82）mg/g。從結(jié)果中看出，兩種甜葉菊廢渣提取物都富含酚酸和黃酮類化合物，其中，樣品1 中酚酸和黃酮類化合物的總量均大于樣品2，且兩種樣品各組成成分含量之間也存在差異，樣品1 綠原酸類化合物含量較多，樣品2 咖啡酸含量較多。這些成分具有多種生物活性，如清除自由基，抗氧化，抗炎癥，抗衰老等。因此對(duì)甜葉菊廢渣提取物進(jìn)行研究，可為其進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用提供依據(jù)。

圖1 320 nm 和360 nm 波長(zhǎng)下混合標(biāo)準(zhǔn)品與甜葉菊廢渣提取物的HPLC 圖譜Fig.1 HPLC chromatogram of mixed standard sample and stevia residue extracts at wavelengths of 320 nm and 360 nm

表2 8 種標(biāo)準(zhǔn)品的線性方程及甜葉菊廢渣提取物中酚酸和黃酮的含量Table 2 Linear equations of eight standards and the contents of phenolic acids and flavonoids in stevia residue extracts

2.2 兩種甜葉菊廢渣提取物對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠血清抗氧化指標(biāo)的影響

由圖2可知，D-半乳糖組小鼠的血清SOD 和GPx 活力明顯低于正常組（P<0.05），MDA 含量明顯高于正常對(duì)照組（P<0.05），表明經(jīng)D-半乳糖誘導(dǎo)，小鼠血清內(nèi)的抗氧化活性下降，脂質(zhì)過氧化物明顯增多。兩種甜葉菊廢渣提取物低劑量組小鼠血清SOD 和GPx 活力，MDA 含量與D-半乳糖組相比均無顯著性差異（P>0.05）；兩種甜葉菊廢渣提取物的中劑量組小鼠血清GPx 活力較D-半乳糖組分別顯著增加了16.39%和11.88%（P<0.05），而小鼠血清SOD 活力和MDA 含量與D-半乳糖組相比均無顯著性差異（P>0.05）；兩種甜葉菊廢渣提取物高劑量組能夠使D-半乳糖處理的小鼠血清SOD 和GPx 活力升高，MDA 含量降低，其中樣品1 高劑量組SOD 和GPx 活力分別顯著增加10.32%和21.67%（P<0.05），MDA 含量降低了24.5%（P<0.05），樣品2 高劑量組SOD 和GPx 活力分別顯著增加11.28%和17.42%，MDA 含量降低了24.8%（P<0.05）。兩種甜葉菊廢渣提取物之間相比，對(duì)D-半乳糖處理小鼠血清抗氧化指標(biāo)（SOD，GPx 和MDA）的影響無顯著性差異（P>0.05）。綜合以上結(jié)果表明，兩種甜葉菊廢渣提取物有助于D-半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠清除血清脂質(zhì)過氧化物，提高血清抗氧化酶活力，增強(qiáng)機(jī)體免疫系統(tǒng)的能力。

圖2 兩種甜葉菊廢渣提取物對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠血清抗氧化指標(biāo)的影響Fig.2 Effects of two kinds of stevia residue extracts on serum antioxidant indexes in D-galactose induced aging mice

2.3 兩種甜葉菊廢渣提取物對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠肝臟組織抗氧化指標(biāo)的影響

各組小鼠肝臟中抗氧化指標(biāo)如圖3所示。與正常組相比，D-半乳糖組小鼠肝臟組織中SOD 和GPx 活力顯著降低（P<0.05），MDA 含量顯著升高（P<0.05），表明經(jīng)D-半乳糖誘導(dǎo)，小鼠肝臟組織中抗氧化活性顯著下降，脂質(zhì)過氧化物顯著增多。與D-半乳糖組相比，樣品1 的低、中、高劑量組小鼠肝臟組織中SOD 和GPx 活力均顯著增加，MDA含量顯著下降，其中高劑量組SOD 和GPx 活力分別增加了96.51%和122.52%（P<0.05），MDA 含量降低38.2%（P<0.05）；樣品2 的低、中、高劑量組小鼠肝臟組織中SOD 和GPx 活力較D-半乳糖組均顯著增加，其中高劑量組SOD 和GPx 活力分別增加了192.06%和189.83%（P<0.05），樣品2 的低、中劑量組小鼠肝臟內(nèi)MDA 與D-半乳糖組之間無顯著性差異，而高劑量組MDA 含量較D-半乳糖組顯著降低了34.1%（P<0.05）。兩種甜葉菊廢渣提取物之間相比，對(duì)D-半乳糖處理小鼠肝臟抗氧化指標(biāo)（SOD，GPx 和MDA）的影響無顯著性差異（P>0.05）。綜合以上結(jié)果表明，兩種甜葉菊廢渣提取物均具有提高D-半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠肝臟中抗氧酶活力和清除肝臟中自由基和脂質(zhì)過氧化物的能力，具有緩解肝臟氧化應(yīng)激損傷的效果。

2.4 兩種甜葉菊廢渣提取物對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠腦組織抗氧化指標(biāo)的影響

甜葉菊廢渣提取物對(duì)小鼠腦組織中SOD，GPx 和MDA 的影響結(jié)果見圖4。與正常組相比，D-半乳糖組小鼠腦組織內(nèi)SOD 和GPx 活力顯著降低（P<0.05），MDA 含量顯著增加（P<0.05），表明經(jīng)D-半乳糖誘導(dǎo)，小鼠腦組織內(nèi)抗氧化酶活性顯著下降，脂質(zhì)過氧化物顯著增多，模型構(gòu)建成功。兩種甜葉菊廢渣提取物低劑量組小鼠腦組織內(nèi)SOD 和GPx 活力，MDA 含量與D-半乳糖組相比均無顯著性差異（P>0.05）；兩種甜葉菊廢渣提取物中劑量組小鼠腦組織內(nèi)SOD 活力較D-半乳糖組分別顯著增加了66.87%和62.16%（P<0.05），GPx 活力無顯著性差異（P>0.05），樣品1 中劑量組小鼠腦組織內(nèi)MDA 含量較D-半乳糖組顯著下降了39.10%（P<0.05），而樣品2 中劑量組小鼠腦組織內(nèi)MDA 含量與D-半乳糖組之間無顯著性差異（P>0.05）；與D-半乳糖組相比，樣品1 高劑量組小鼠腦組織內(nèi)SOD 和GPx 活力分別顯著增加了73.85%和19.56%（P<0.05），MDA 含量與D-半乳糖組之間無顯著性差異（P>0.05），樣品2 高劑量組小鼠腦組織內(nèi)SOD 和GPx 活力較D-半乳糖組分別顯著增加了73.48%和24.71%（P<0.05），MDA 含量顯著下降了38.46%（P<0.05）。兩種甜葉菊廢渣提取物之間相比，對(duì)D-半乳糖處理小鼠腦組織抗氧化指標(biāo)（SOD，GPx 和MDA）的影響無顯著性差異（P>0.05）。綜合以上結(jié)果表明，兩種甜葉菊廢渣提取物均具有提高D-半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠腦組織中抗氧酶活力和清除腦組織中自由基和脂質(zhì)過氧化物的能力，有效防止或緩解腦組織中自由基導(dǎo)致的氧化應(yīng)激損傷，從而起到抗氧化的作用。

2.5 兩種甜葉菊廢渣提取物對(duì)小鼠腦組織GPx1，SOD1，HO-1 和Nrf-2 的mRNA 表 達(dá) 水平的影響

綜合以上結(jié)果可知，兩種甜葉菊廢渣提取物高劑量組對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)的小鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激損傷抑制作用效果優(yōu)于低劑量和中劑量組，因此選擇高劑量組研究甜葉菊廢渣提取物對(duì)D-半乳糖處理小鼠腦組織中抗氧化酶相關(guān)基因的表達(dá)水平。如圖5所示，與正常組相比，D-半乳糖處理可顯著降低小鼠肝臟組織中GPx1，SOD1，HO-1 和Nrf-2 基因相對(duì)表達(dá)水平（P<0.05）。與D-半乳糖組相比，樣品1 高劑量組GPx1，SOD1，HO-1 和Nrf-2 基因相對(duì)表達(dá)水平分別顯著提高了37.55%，68.95%，94.53%和58.74%（P<0.05）；樣品2 高劑量組GPx1，SOD1，HO-1 和Nrf-2 基因相對(duì) 表達(dá)水平分別顯著提高了39.79%，60.21%，98.16%和58.01%（P<0.05）。兩種甜葉菊廢渣提取物之間相比，對(duì)D-半乳糖處理小鼠腦組織抗氧化基因的相對(duì)表達(dá)（GPx1，SOD1，HO-1 和Nrf-2）水平無顯著性差異（P>0.05）。綜合以上結(jié)果表明，兩種甜葉菊廢渣提取物高劑量組均能激活D-半乳糖處理小鼠體腦組織內(nèi)抗氧化基因的表達(dá)，增強(qiáng)其體內(nèi)抗氧化活性。

3 討論

Barroso 等[8]通過HPLC-DAD-ESI/MS 對(duì)兩種貯存條件下的甜葉菊提取物成分進(jìn)行鑒定，發(fā)現(xiàn)其含有18 種酚酸和黃酮類化合物，其中含量最高的為綠原酸和異綠原酸A。本研究鑒定的兩種甜葉菊廢渣提取物中的主要成分為咖啡酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C、槲皮素和槲皮苷，均包含在Barroso 等[8]報(bào)道的18種酚酸和黃酮化合物之中，其中含量最高的為咖啡酸、異綠原酸C 和異綠原酸B，Barroso 等[8]研究的甜葉菊提取物是從甜葉菊葉片中提取得到，而本研究使用的甜葉菊廢渣提取物是從甜菊糖苷生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的絮凝廢渣中提取得到，因此兩者主要成分之間存在差異。Shukla 等[9]和Tadhani等[10]研究表明甜葉菊提取物具有較強(qiáng)的體外抗氧化活性，能抑制一系列自由基，如DPPH、羥自由基、一氧化氮等。另外，有研究顯示槲皮素具有較強(qiáng)的抗氧化作用，其體外抗氧化作用與維生素C和維生素E 作用相當(dāng)，同時(shí)槲皮素還可以提高二甲基亞砜誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)總抗氧化能力[11]，綠原酸和咖啡酸可以增強(qiáng)腦缺血再灌注損傷模型大鼠體內(nèi)的抗氧化能力[12]。本研究鑒定的兩種甜葉菊廢渣提取物均含有這些已報(bào)道的具有抗氧化作用的成分，因此甜葉菊廢渣提取物具有提高機(jī)體抗氧酶活力，清除自由基和脂質(zhì)過氧化物的能力，可有效防止或緩解自由基導(dǎo)致的氧化應(yīng)激損傷。

D-半乳糖誘導(dǎo)衰老模型最早在1985年，由徐敝本[13]在使用嚙齒動(dòng)物衰老模型進(jìn)行延緩衰老藥物的研究中提出。D-半乳糖的作用機(jī)制與氧化應(yīng)激損傷，鈣穩(wěn)態(tài)失調(diào)，線粒體老化，非酶糖基化反應(yīng)，端粒短縮及端粒酶的活性下降，以及免疫功能減退有關(guān)[14]。D-半乳糖誘導(dǎo)衰老模型與其它衰老模型相比，與自然衰老最為相近，成模簡(jiǎn)易，結(jié)果穩(wěn)定，因此得到較廣泛推廣應(yīng)用[15]。本試驗(yàn)中，小鼠經(jīng)頸部皮下注射D-半乳糖11 周之后，肝臟、腦和血清中SOD 和GPx 活性均顯著降低，MDA含量顯著升高，抗氧化酶基因表達(dá)量顯著下降，這與高璐等[16]和Lei 等[17]的結(jié)論一致，表明衰老模型構(gòu)建成功。

酶促反應(yīng)系統(tǒng)被認(rèn)為是體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)的第一道防線，具有清除自由基，催化細(xì)胞內(nèi)過氧化物分解等作用，防止氧化應(yīng)激對(duì)機(jī)體造成的傷害，對(duì)細(xì)胞具有保護(hù)作用，主要由一些酶組成，如SOD，GPx 等[18]，非酶促反應(yīng)體系主要為維生素、氨基酸和金屬蛋白質(zhì)[19]。本研究結(jié)果顯示，與D-半乳糖組小鼠相比，兩種甜葉菊廢渣提取物高劑量組小鼠體內(nèi)SOD，GPx 活性顯著增加，MDA 含量顯著降低，抗氧化酶基因的相對(duì)表達(dá)量相對(duì)增加，這與符莎露等[20]報(bào)道植物多酚對(duì)衰老小鼠抗氧化作用研究結(jié)果一致，表明甜葉菊廢渣提取物具有良好的抗氧化、防衰老作用。Nrf-2 在抗氧化酶基因的轉(zhuǎn)錄中起著重要作用，是細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)中的關(guān)鍵因子，與抗氧化反應(yīng)元件結(jié)合，啟動(dòng)下游靶基因如HO-1，SOD 和GPx 等基因的表達(dá)，從而提高抗氧化酶的活性[21-22]。文獻(xiàn)報(bào)道一些天然化合物，如槲皮素[23]、綠原酸[24]等，可通過激活Nrf-2，增加HO-1 等抗氧活性酶的mRNA 表達(dá)，本試驗(yàn)中的甜葉菊廢渣提取物高劑量組富含多酚黃酮類化合物，能提高抗氧化基因GPx1，SOD1，HO-1 和Nrf-2 的表達(dá)，研究結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致。Jeong 等[25]研究表明，植物多酚類可以通過激活D-半乳糖模型小鼠體內(nèi)PI3K/Akt/Nrf2 信號(hào)通路，緩解體內(nèi)氧化應(yīng)激損傷，因此甜葉菊廢渣提取物對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠的抗氧化機(jī)制可能與激活小鼠體內(nèi)PI3K/Akt/Nrf2 信號(hào)通路，提高小鼠體內(nèi)抗氧化酶活性和抑制脂質(zhì)過氧化物質(zhì)的生成有關(guān)，對(duì)其抗氧化作用機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步研究具有重要意義。

4 結(jié)論

兩種甜葉菊廢渣提取物富含酚酸和黃酮類化合物，能提高衰老模型小鼠血清、肝臟、腦組織SOD 和GPx 活力，降低MDA 含量，增強(qiáng)抗氧化酶基因的相對(duì)表達(dá)，說明兩種甜葉菊廢渣提取物均能有效緩解D-半乳糖對(duì)小鼠造成的氧化應(yīng)激損傷。因此，甜葉菊廢渣提取物具有良好的體內(nèi)抗氧化作用，為今后甜葉菊廢渣提取物相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)利用提供了一定的科學(xué)依據(jù)。