四川德陽地區(qū)解脲脲原體感染現(xiàn)狀分析及兩種核酸檢測方法比較

文強，曹桂群，王秀，徐志紅

（四川省德陽市人民醫(yī)院生殖遺傳科， 四川 德陽 618000）

解脲脲原體(ureaplasma urealyticum，UU)，亦稱溶脲脲原體，是六種脲原體屬中的一種，與人類泌尿生殖道感染有密切關(guān)系[1]。 它是人類泌尿生殖道常見寄生菌之一，也存在于呼吸道，在特定環(huán)境下可以致病。 解脲脲原體在一定條件下能引起泌尿系統(tǒng)感染和不孕癥，常常引起男性前列腺炎或附睪炎、女性陰道炎、宮頸炎，是非淋菌性尿道炎的主要病原體[2]，并妊娠期感染可導(dǎo)致胎膜早破(PROM)、早產(chǎn)、胎兒宮內(nèi)感染、孕婦產(chǎn)褥期感人及低體重胎兒等，還可引起新生兒呼吸道和中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染[3，4]。 近年來，入院檢查 UU 的人數(shù)逐年升高，且受檢人群偏向低年齡段，大多UU 攜帶者都正處于最佳生育年齡階段，加之，隨著感染人數(shù)的增多以及抗生素的濫用，UU 耐藥株的出現(xiàn)已多有報道[5]，因此，本市需要及時了解當(dāng)?shù)豒U 感染的現(xiàn)狀以及開展更好更多樣的檢測方法以對UU 進(jìn)行更好的檢測和臨床療效的監(jiān)測。

本文研究了我院近兩年來受檢人群UU 感染的現(xiàn)狀，旨在了解我市UU 的感染分布特征以便今后開展對UU 更好的防治。 同時，隨著分子生物學(xué)診斷技術(shù)的發(fā)展，UU 的檢測在核酸類型上也分為了DNA 檢測和RNA 檢測。 本文對在我院進(jìn)行DNA 檢測和RNA 檢測的受檢人群的UU 檢出情況進(jìn)行了比較分析，以深入了解兩種技術(shù)在檢測中的差異和特點。

1 材料和方法

1.1 研究對象 本研究對象為 2016 年 11 月至2018 年10 月于德陽市人民醫(yī)院生殖遺傳科的分子生物實驗室進(jìn)行UU 檢測的體檢、婚檢、生殖系統(tǒng)炎癥、不孕癥、孕期異?；颊撸傆?033 例。 研究對象年齡分布在 10～77 歲， 其中 UU-RNA 檢測共 1001 例， 包含 611 例男性和 390 例女性；UUDNA 檢測共1032 例，包含564 例男性和 471 例女性。

1.2 標(biāo)本采集 UU-DNA 檢測的標(biāo)本采集:女性:用無菌生理鹽水棉球洗去宮頸外分泌物，再換取樣拭子伸入宮頸1～2cm， 停留數(shù)秒并旋轉(zhuǎn)2 周后取出。男性：將拭子伸入男性尿道2～4cm，停留數(shù)秒并旋轉(zhuǎn)2 周后取出。 采集的分泌物保存于含1ml 生理鹽水的無菌采集管內(nèi)，冷藏保存，4h 內(nèi)送檢。

UU-RNA 檢測的標(biāo)本采集： 男性與女性均自行取樣， 用無菌帶蓋尿杯接取中段尿液3～5ml，無菌密封，冷藏保存，1h 內(nèi)送檢。

1.3 檢測方法 UU-RNA 檢測： 采用解脲脲原體（UU）核酸檢測試劑盒（RNA 恒溫擴增）（上海仁度生物科技有限公司）檢測；UU-DNA 檢測：采用解脲脲原體（UU）核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）（凱杰生物工程（深圳）有限公司）檢測。 具體檢測步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。 熒光定量PCR 儀為 Roche LightCycler 480 實時熒光定量PCR 儀。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 23.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，兩方法的比較采用簡單四格表χ2檢驗，趨勢判斷采用χ2檢驗線性組合結(jié)果判斷[6]。 P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 UU-RNA 與 UU-DNA 檢測方法對比 UURNA 檢測共 1001 例，陽性 460 例，陽性率 45.95%；UU-DNA 檢測共 1032 例， 陽性 561 例， 陽性率54.36%。UU-DNA 的檢出率明顯高于UU-RNA，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=14.364，P=0.000＜0.05）。 見表1。

表1 UU-RNA 與UU-DNA 檢測結(jié)果

2.2 不同性別間的UU 陽性率對比 在UU-RNA檢測的結(jié)果中，男性611 例，陽性252 例，陽性率41.24%；女性390 例，陽性208 例，陽性率53.33%。女性的陽性率明顯高于男性，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=14.009，P=0.000＜0.05）。 在 UU-DNA 檢測的結(jié)果中，男性564 例，檢出252 例，陽性率44.68%；女性468 例，檢出309 例，陽性率66.03%。 數(shù)據(jù)經(jīng)處理分析，同樣發(fā)現(xiàn)女性陽性率顯著高于男性，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=46.968，P=0.000＜0.05），見表2。

表2 不同性別間的UU 陽性率比較

2.3 年齡段間的陽性率趨勢變化 對UU-RNA 和UU-DNA 受檢人群進(jìn)行年齡段分組后，根據(jù)檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)不論是RNA 檢測還是DNA 檢測，其陽性率在＜20 年齡段組中均最高（UU-RNA 中為58.82%；UU-DNA 中為 84.00%），在＞60 歲年齡段組中陽性率均最低 （UU-RNA 中為 25.00%；UU-DNA 中為15.00%），并且整體呈現(xiàn)隨年齡的增加，陽性率逐漸降低的趨勢，線性趨勢具有統(tǒng)計學(xué)意義（UU-RNA中，χ2=5.004，P=0.025＜0.05；UU-DNA 中，χ2=7.289，P=0.007＜0.05），見表3。

表3 年齡段間的陽性率趨勢變化

2.4 UU-RNA 與UU-DNA 對復(fù)檢人群的檢測對比在UU-RNA 的受檢人群中，篩選出174 例患者，該群體均在不同時間進(jìn)行了兩次以上的UU-RNA 檢測。 其中33 例患者，多次檢測均為陽性，占總數(shù)的18.97%，129 例患者在多次檢測中UU 感染已由陽轉(zhuǎn)陰，占74.14%，另有12 例多次檢驗均為陰性。在UU-DNA 的受檢人群中，同樣篩選出100 例進(jìn)行了多次UU-DNA 檢測的患者，其中有32 例患者反復(fù)檢驗均為陽性，占總數(shù)32.00%，另有57 例患者UU感染由陽轉(zhuǎn)陰，占57.00%。 對比發(fā)現(xiàn)，UU-RNA 的復(fù)檢轉(zhuǎn)陰率顯著高于UU-DNA， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=8.569，P=0.014＜0.05），見表4。

表4 UU-RNA 與UU-DNA 在復(fù)檢人群中的比較

3 討論

解脲脲原體（ureaplasma urealyticum，UU）是目前發(fā)現(xiàn)的最小的能夠在無生命體培養(yǎng)基中繁殖的微生物。 其主要存在于泌尿生殖道和呼吸道中，在1954 年被 Shepard M 等人從非淋菌性尿道炎（nongonococcal urethritis，NGU） 患者的尿道中分離發(fā)現(xiàn)的[7]。它是一種條件致病微生物，可以在機體免疫抑制或器械檢查時侵犯宿主粘膜。 UU 的感染可引起人體泌尿系統(tǒng)的感染和不孕不育癥[4，8]，與男性前列腺炎或附睪炎和女性陰道炎、宮頸炎等疾病都有關(guān)系，是非淋菌性尿道炎發(fā)生的常見病原體之一，還可引起早產(chǎn)、胎膜早破、絨毛膜羊膜炎和自然流產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局[9]。 常見的UU 感染途徑包括性接觸傳播、母嬰垂直傳播和胎兒出生時通過體液傳播。

本文對德陽地區(qū)來院就診的包括疑似患者和體檢篩查患者進(jìn)行UU 核酸檢測，統(tǒng)計分析后發(fā)現(xiàn)，UU-RNA 和UU-DNA 的陽性率分別為45.95%和54.36%，總體在50%左右，相比于江蘇地區(qū)（UU 感染率 61.61%）[10]和湖北地區(qū)（UU 感染率 65%）[11]，我院檢出的感染率略低，但高于臺州地區(qū)（UU 感染率 40.70%）[12]和寧夏地區(qū)（UU 感染率 36.9%）[13]。UU 是人類泌尿生殖道常見寄生菌之一，其感染率較高，但不同地區(qū)間的UU 感染率還是有較大的差異[14]，不同地區(qū)的人群差異、文化差異、醫(yī)療水平、經(jīng)濟水平等對UU 的感染、傳播及治療都有影響。

在對德陽地區(qū)受檢人群的性別分析后，發(fā)現(xiàn)兩種檢測方法都顯示女性的UU 感染率都明顯高于男性，與已有文獻(xiàn)報告的國內(nèi)大部分地區(qū)結(jié)論一致[15，16]。 由于女性泌尿生殖道短且淺，陰道環(huán)境溫濕，易于UU 等常見條件致病菌的定殖。 有文獻(xiàn)也講到，由于性別生理結(jié)構(gòu)的差異，女性是生殖道感染的弱勢群體[17]。另外，本文的統(tǒng)計分析也顯示，隨著年齡的增長，UU 的感染率呈降低趨勢。但陽性率的大幅下降在50 歲以上年齡段才開始，50 歲以內(nèi)人群的感染率均在44%以上，不容忽視。同時，在對受檢人群進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn) 21～30 及 31～40 歲這兩個年齡段受檢人數(shù)之和占據(jù)了總?cè)藬?shù)的60%以上（UURNA 中為 67.33%，UU-DNA 中為 63.66%），且該年齡段的陽性率總體較高。 這與袁柳鳳等[7]的研究結(jié)果一致。 這提示我們，正值育齡的青中年人群可能已為UU 的感染所累。 不孕不育、流產(chǎn)、早產(chǎn)、孕期胎膜早破[2]等問題都將因UU 的感染而危害到我們年輕的一代，更可能通過垂直傳染，引起新生兒呼吸道和中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染[18]，因此，迫切需要我們醫(yī)療單位和科研人員提供對UU 更加準(zhǔn)確、方便的檢測方法和有效、長久的治療手段。

此外， 在分析了德陽地區(qū)復(fù)檢人群檢測結(jié)果后，發(fā)現(xiàn)在經(jīng)過臨床治療后UU 陽性患者的轉(zhuǎn)陰例數(shù)還是約達(dá)到60%以上，但仍有20%～30%的患者經(jīng)過治療后檢測仍為陽性，反映了臨床治療效果的不佳或UU 感染的反復(fù)，難治愈性。 目前已有多篇國內(nèi)文獻(xiàn)報告了 UU 的藥物敏感性情況[17，19]，警示臨床醫(yī)師和患者在治療UU 感染時，切不可再隨意使用抗生素，謹(jǐn)防UU 耐藥株的出現(xiàn)和擴大。 在治療UU 感染前應(yīng)先做UU 的藥物敏感性分析，在藥敏分析結(jié)果的指導(dǎo)下合理使用抗生素[18]。

關(guān)于UU-DNA 和UU-RNA 兩種不同方法檢測結(jié)果的比較，本文發(fā)現(xiàn)RNA 檢測技術(shù)（核酸等溫擴增技術(shù)，SAT） 的檢出陽性率低于常用的DNA檢測方法。 在復(fù)檢人群的檢測也中發(fā)現(xiàn)，UU-RNA檢測的復(fù)檢轉(zhuǎn)陰率是低于UU-DNA 的。 這主要歸因于SAT 技術(shù)只能檢測存在完整RNA 片段的活病原體，排除了經(jīng)臨床有效治療后已死亡的病原體[20]。 因此，UU-RNA 檢測技術(shù)適合作為臨床用藥治療監(jiān)測的方法，可及時反映治療效果，符合精準(zhǔn)醫(yī)療的要求[21]，同時減輕患者身心負(fù)擔(dān)。

綜上所述，解脲脲原體（UU）在德陽地區(qū)的感染率較高，且女性的陽性率顯著高于男性，已有不少正值育齡期的青中年正為UU 的感染所累。在臨床治療上，UU 的反復(fù)感染提示我們抗生素的使用更需謹(jǐn)慎。 SAT 技術(shù)更適合用于臨床療效監(jiān)測。