ZEB2、SOX2 蛋白與乳腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系

魏婭，閆文鋒

（1.安陽市腫瘤醫(yī)院普外科，河南 安陽 455000；2.河南省人民醫(yī)院普外科，河南 鄭州 450003）

部分地區(qū)的流行病學(xué)研究表明，乳腺癌的發(fā)病率可超過596/10 萬人以上[1]，在部分高危地區(qū)或者高危人群中，乳腺癌的病死率和致殘率可進一步的上升[2]。 乳腺癌的發(fā)生，能夠?qū)е禄颊邿o瘤生存時間的顯著下降， 促進患者近期病情進展速度的加快。 臨床上在探討乳腺癌患者病情發(fā)生機理的過程中，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞因子或者腫瘤相關(guān)蛋白的改變，能夠在乳腺癌的整體性病情進展過程中發(fā)揮作用。 E盒結(jié)合鋅指蛋白2（ZEB2）是轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)因子，其能夠通過提高癌基因上游轉(zhuǎn)錄啟動子的激活程度，進而促進乳腺癌細(xì)胞的持續(xù)性自我增殖[3]；性別決定相關(guān)基因簇2（SOX2）是干細(xì)胞調(diào)控相關(guān)因子，其能夠通過提高癌細(xì)胞的干細(xì)胞特性，增強癌細(xì)胞的核DNA 擴增的速度，進而促進乳腺癌的病情進展[4]。 為了揭示 ZEB2、SOX2 的表達與乳腺癌患者的病情關(guān)系，從而為乳腺癌患者的診療及臨床預(yù)后評估提供參考， 本次研究選取于2015 年3 月至2018 年3 月病理科收集90 例乳腺癌標(biāo)本，探討了ZEB2、SOX2 的表達及其與乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取病理科收集90 例乳腺癌標(biāo)本（2015 年 3 月至 2018 年 3 月）、90 例乳腺良性腫瘤切除組織標(biāo)本。乳腺癌，年齡 28～58 歲，平均 47.6±7.2 歲，乳腺癌組織學(xué)分級：Ⅰ級20 例、Ⅱ級45 例、Ⅲ級 25 期；TNM 分期：Ⅰ期 22 例、Ⅱ期 34 例、Ⅲ期 28 例、Ⅳ期6 例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移39 例；病灶直徑≥3cm49 例。良性組，年齡 26～59 歲，平均 45.2±10.5 歲，乳腺纖維瘤 36 例、乳腺腺病 45 例、其他 9 例。 兩組患者的年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

納入標(biāo)準(zhǔn)： ⑴乳腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考中華醫(yī)學(xué)會制定的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[5]；⑵經(jīng)乳腺彩超、X 線鉬靶初步診斷，經(jīng)乳腺穿刺病檢或術(shù)后病理學(xué)檢查證實；⑶患者的術(shù)后病理學(xué)標(biāo)本及患者的個人資料保存良好;⑷在獲取患者的病理學(xué)標(biāo)本前患者無放化療病史、免疫學(xué)治療史。

排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴病理學(xué)資料缺失；⑵合并其他部位的原發(fā)性腫瘤；⑶免疫功能疾病；⑷合并其他系統(tǒng)的重大疾病的患者。

1.2 檢測方法及評分方法 石蠟切片采用二甲苯進行脫臘至水，5%的雙氧水常溫在孵育10min，采用磷酸鹽緩沖液孵育5min，蒸餾水沖洗3 次，每次5min，5%的山羊血清抗體封閉10min，不沖洗，滴加一抗(購自 abcum 公司批號：20119304 濃度:1:500)，4℃冰箱孵育過夜，蒸餾水沖洗3 次，每次5min，滴加生物素標(biāo)記好的二抗（購自北京康泰生物批號：20104856 濃度：1：1000），37℃孵育 30min，蒸餾水沖洗3 次，每次5min，滴加第二代辣根酶標(biāo)記的工作液體，37℃孵育 10min，蒸餾水沖洗 3 次，每次 5min，顯色之后采用酒精脫水、二甲苯透明、樹膠封片，鏡下觀察。

免疫組化結(jié)果判定：ZEB2 蛋白、SOX2 蛋白陽性染色表達于細(xì)胞核和我細(xì)胞質(zhì)中，兩種蛋白的陽性染色呈黃色、棕黃色、褐色表達，⑴依據(jù)染色的程度分為：未染色（0 分）、僅僅淡黃色染色（1 分）、棕黃色染色（2 分）、染色呈褐色、黑色（3 分）；⑵根據(jù)染色的細(xì)胞占比結(jié)果： 占比≤10%計分1 分、占比范圍11%～50%計分2 分、占比范圍51%～75%計分3 分、占比＞75%計分4 分，染色程度與陽性細(xì)胞計分之乘積＜3 分為陰性、≧3 分為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用美國IBM SPSS 公司的統(tǒng)計軟件包SPSS21.0 版本對本研究的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，采用±s 表示符合正態(tài)分布的計量資料，應(yīng)用t 檢驗分析兩組間差異；應(yīng)用χ2檢驗分析計數(shù)資料的組間差異；P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組標(biāo)本中的ZEB2 蛋白、SOX2 蛋白陽性表達率比較 乳腺癌組織中的ZEB2 蛋白、SOX2 蛋白陽性表達分別為68.89%、58.89%均高于良性組的 31.11%、24.44%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組標(biāo)本中的ZEB2 蛋白、SOX2 蛋白陽性表達率比較[n(%)]

2.2 乳腺癌組織中的ZEB2 蛋白、SOX2 蛋白陽性表達率與患者病理學(xué)特征的關(guān)系 在是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不同TNM 分期的乳腺癌組織中的SOX 2 蛋白、ZEB2 蛋白陽性表達率組間比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；在是不同組織學(xué)分級、不同病灶直徑、不同ER 及PR 表達的乳腺癌組織中的SOX2 蛋白、ZEB2 蛋白陽性表達率組間比較，差異具不有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。 見表2，表3。

3 討論

乳腺癌導(dǎo)管上皮細(xì)胞的異常增殖或者分裂，能夠顯著促進乳腺癌的發(fā)生，在合并有性激素受體敏感性改變或者BRCA 基因突變的群體中，乳腺癌 的發(fā)病率可進一步的上升[6]。 臨床上的觀察分析發(fā)現(xiàn)，乳腺癌患者的5 年生存率不超過35%，不同措施治療后乳腺癌患者的總體生存時間或者中位生存時間仍然無明顯的改善[7，8]。對于乳腺癌患者的病情評估具有一定的臨床參考價值， 雖然CA125 等腫瘤標(biāo)志物能夠在乳腺癌的病情評估過程中發(fā)揮作用。但部分研究者認(rèn)為，依靠CA125 等指標(biāo)評估乳腺癌患者臨床病理特征的靈敏度不超過30%，其評估的局限性較為明顯，評估的一致性率較低[9]。本次研究通過對于乳腺癌患者病灶組織中ZEB2、SOX2 的表達分析，不僅能夠揭示乳腺癌患者的內(nèi)在病情進展原理，同時能夠為臨床上相關(guān)患者提供腫瘤分子學(xué)方面的參考指標(biāo)。

表2 乳腺癌組織中的SOX2 蛋白陽性表達率與患者病理學(xué)特征的關(guān)系

表3 乳腺癌組織中的ZEB2 蛋白陽性表達率與患者病理學(xué)特征的關(guān)系

ZEB2 是鋅指蛋白家族成員，其能夠通過提高乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞內(nèi)的癌基因轉(zhuǎn)錄活性，進而提高癌細(xì)胞的異常分裂的風(fēng)險。 ZEB2 能夠提高轉(zhuǎn)錄上游增強子的激活程度，提高紡錘體的分裂速度，進而促進早期癌細(xì)胞的發(fā)生過程。 相關(guān)臨床方面的研究也發(fā)現(xiàn)，ZEB2 的高表達能夠增加乳腺上皮細(xì)胞的浸潤和突破能力，導(dǎo)致中晚期惡性腫瘤的病情進展[10]；SOX2 是癌細(xì)胞干性調(diào)控因子，其能夠通過結(jié)合癌細(xì)胞膜上的糖蛋白配體， 激活癌細(xì)胞內(nèi)MAPK 或者AKT 信號通路， 最終提高癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄失常風(fēng)險[11，12]。 SOX2 對于癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征的修飾作用，能夠增加癌細(xì)胞的變形能力，最終促進腫瘤病情進展[13]。

本次研究通過免疫組化分析了ZEB2、SOX2的表達，發(fā)現(xiàn)在乳腺癌患者病灶組織中，ZEB2、SOX 2 蛋白的表達陽性率均明顯的上升，高于良性對照乳腺組織， 統(tǒng)計學(xué)差異較為明顯， 提示了ZEB2、SOX2 的高表達均能夠促進乳腺癌病情的進展。 匯總不同的相關(guān)文獻，考慮由于ZEB2、SOX2 的下列方面的病理性作用機理有關(guān)[14]：⑴ZEB2 能夠提高乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞浸潤能力，促進上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換的發(fā)生， 最終促進乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞浸潤基底膜組織；⑵SOX2 的表達上升能夠降低凋亡相關(guān)因子的活性，抑制導(dǎo)管上皮細(xì)胞的凋亡，促進導(dǎo)管上皮細(xì)胞浸潤小葉及導(dǎo)管間質(zhì)組織。姚晉林等[15]研究者也發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌患者病灶組織中，SOX2 蛋白的表達陽性率可平均上升40%，在合并有較高浸潤深度或者局部淋巴結(jié)組織患者的患者中，SOX2 蛋白的表達陽性率可進一步的上升。 在探討ZEB2、SOX2 的表達與乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系過程中，發(fā)現(xiàn)在臨床分期較晚或者發(fā)生鎖骨下等部位淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，ZEB2、SOX2 蛋白的表達陽性率較高，提示了ZEB2、SOX2 的表達與乳腺癌患者的臨床病理特征密切相關(guān)，這主要由于ZEB2 的表達上升，能夠提高導(dǎo)管上皮細(xì)胞的粘附能力，促進了其浸潤鎖骨下或者腋窩淋巴結(jié)組織，從而促進了淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移；而SOX-2 的表達上升，還能夠促進癌細(xì)胞間質(zhì)成分的分解，從而為癌細(xì)胞的擴散和浸潤提高前提，并最終促進了TNM 臨床分期的進展。但本次研究中并未發(fā)現(xiàn)在不同組織學(xué)分級、雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）等患者中 ZEB2、SOX2 的表達差異，提示ZEB2、SOX2 的表達與性激素受體并無明顯的關(guān)聯(lián)。

綜上所述，在乳腺癌患者病灶中，ZEB2、SOX2蛋白的表達陽性率明顯上升，同時ZEB2、SOX2 的表達與乳腺癌患者的臨床病理特征密切相關(guān)。 本次研究未能充分探討ZEB2、SOX2 的表達與乳腺癌患者治療結(jié)局或者臨床轉(zhuǎn)歸的關(guān)系。