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    派特靈治療宮頸持續(xù)HR-HPV感染療效分析

    2020-11-09 06:56:28李亞光張煒悅王偉杰魏靖文劉恩令
    關(guān)鍵詞:特靈干擾素細(xì)胞因子

    李亞光 張煒悅 王偉杰 魏靖文 劉恩令

    華北理工大學(xué)附屬唐山工人醫(yī)院婦產(chǎn)科 河北唐山 063000

    有性生活女性中人乳頭瘤病毒(HPV)感染率高達(dá)70%以上,多數(shù)可在6~24個(gè)月內(nèi)自行清除,但仍有10%~30%發(fā)生持續(xù)感染[1],進(jìn)而發(fā)展為宮頸上皮內(nèi)病變甚至宮頸癌。90%的宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變和99%的宮頸癌與高危型HPV (HR-HPV)感染有關(guān),其中70%與HPV16及18型有關(guān)[2]。免疫細(xì)胞及其產(chǎn)生的免疫因子為非特異性免疫的重要組成部分,是對(duì)抗HPV的第一道防御屏障。諸多免疫細(xì)胞因子不僅參與HPV病毒的清除,還與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),如白細(xì)胞介素-2(IL-2)、白細(xì)胞介素-4(IL-4)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、γ-干擾素(IFN-γ)等[3-5]。有研究發(fā)現(xiàn)HPV的一些特性使其發(fā)生免疫逃逸現(xiàn)象,逃脫免疫系統(tǒng)的監(jiān)視。IL-2、IFN-γ、TNF-α為激活或介導(dǎo)免疫反應(yīng)的細(xì)胞因子,在殺傷病原微生物及腫瘤細(xì)胞方面起主要作用,而IL-4為抑制免疫反應(yīng)的相關(guān)因子,可以防止免疫反應(yīng)過強(qiáng)而造成的自身損害。中成藥因其在抗病毒方面獨(dú)特的成效,越來越多的應(yīng)用到抗HPV治療中。本研究將評(píng)價(jià)中藥派特靈治療宮頸持續(xù)HR-HPV感染的療效,并針對(duì)宮頸局部免疫細(xì)胞因子變化情況進(jìn)行研究分析。

    1 資料與方法

    1.1一般資料 以2018年11月~2019年9月唐山工人醫(yī)院婦科門診采用cobas4800HPV分型檢測(cè)方法確定HR-HPV陽性者80例為研究對(duì)象, HR-HPV持續(xù)感染(≥6個(gè)月)。納入標(biāo)準(zhǔn) :①間隔6個(gè)月連續(xù)兩次檢測(cè)HR-HPV陽性者;②TCT≤ASCUS,陰道鏡下組織病理學(xué)檢查正?;蚵匝装Y者;③有性生活史;④無重要臟器基礎(chǔ)疾病及腫瘤病患者;⑤兩周內(nèi)未進(jìn)行婦科檢查及陰道用藥、陰道沖洗者;⑥近期無口服抗病毒藥物及未接種HPV疫苗;⑦傳染病學(xué)檢查陰性。 排除標(biāo)準(zhǔn):①免疫功能低下者;②近半年內(nèi)接受局部或全身免疫增強(qiáng)劑治療者;③急性生殖道炎癥;④妊娠期及哺乳期者;⑤長期使用免疫抑制劑者;⑥患有嚴(yán)重心、肺、肝、腎功能病損者;⑦近2個(gè)月內(nèi)接受局部或全身抗病毒治療者;⑧不使用安全套防護(hù)者;⑼不接受全程治療及隨訪者。將80例患者隨機(jī)分為派特靈組和干擾素栓劑組,各40例。派特靈組年齡25~45歲,平均(35.2±2.8)歲;干擾素組年齡26~49歲,平均(36.4±3.2)歲,兩組年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

    1.2治療方法 派特靈組予派特靈治療,棉球浸潤派特靈稀釋液預(yù)處理宮頸及陰道壁,帶有尾絲的棉球浸滿派特靈原液后頂端部分置入宮頸管內(nèi)約2cm,剩余部分均勻敷在宮頸表面,3小時(shí)后自行取出,1次/d,連用3天后停用4天,共用藥5周,經(jīng)期停用。干擾素組予重組人干擾素α2b,患者睡前清洗外陰,將1粒金舒喜栓(重組人干擾素α2b陰道栓劑,北京Kawin公司)置入陰道內(nèi),隔日1次,經(jīng)期停用,共用3個(gè)月經(jīng)周期。所有患者用藥期間禁止性生活。

    1.3標(biāo)本收集及實(shí)驗(yàn)方法 患者取膀胱截石位,用宮頸刷收集脫落細(xì)胞用于高危HPV分型檢測(cè)(16/18和其他12種)和液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)。5mL生理鹽水反復(fù)沖洗宮頸及陰道上1/3,停留10秒后于后穹窿處吸出(灌洗液中不含血液成分),2000r/min室溫離心5分鐘后取上清保存于-80℃用于免疫細(xì)胞因子檢測(cè)。ELISA酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)樣本中IL-2、IL-4、IFN-γ和TFN-α,以空白孔調(diào)零,在450nm波長下測(cè)量各孔OD值,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度及OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算各待測(cè)樣本孔中免疫因子的濃度。

    2 結(jié)果

    2.1兩組患者HR-HPV轉(zhuǎn)陰情況比較 派特靈組和干擾素栓劑組HR-HPV轉(zhuǎn)陰率分別為87.50%、35.00%,兩組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=25.208,P=0.00)。見表1。

    表1 兩組治療后轉(zhuǎn)陰率比較[例(%)]

    2.2宮頸局部免疫因子表達(dá)情況 兩組患者治療前陰道灌洗液中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4濃度比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);治療后,兩組患者上述細(xì)胞因子濃度比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);兩組患者治療前后相比,上述細(xì)胞因子濃度比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

    表2 兩組患者治療前后陰道灌洗液中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4表達(dá)水平比較

    組別例數(shù)IL-2治療前治療后t值P值IL-4治療前治療后t值P值派特靈組407.29±1.2314.95±1.9019.7540.00056.17±9.8132.66±8.6716.3370.000干擾素組406.97±1.6110.80±1.8712.2080.00054.28±14.4743.77±9.058.0330.000t值0.98210.453--1.0023.199--P值0.5060.000--0.4120.002--

    各組患者治療后轉(zhuǎn)陰與否之間比較,上述細(xì)胞因子濃度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);兩組轉(zhuǎn)陰患者之間比較TNF-α、IL-2、IL-4濃度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),IFN-γ濃度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);兩組未轉(zhuǎn)陰患者之間比較,上述四種免疫細(xì)胞因子濃度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

    表3 轉(zhuǎn)陰與未轉(zhuǎn)陰患者陰道灌洗液中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4表達(dá)水平比較

    組別IL-2例數(shù)轉(zhuǎn)陰例數(shù)未轉(zhuǎn)陰t值P值IL-4例數(shù)轉(zhuǎn)陰例數(shù)未轉(zhuǎn)陰t值P值派特靈組3515.77±1.9558.62±1.777.6640.0003530.07±9.12553.32±9.6710.3960.000干擾素組1412.96±1.74267.38±1.881.7350.0331433.45±10.662654.85±12.394.1790.018t值3.125-1.34--2.896-0.274--P值0.004-0.19--0.007-0.786--

    3 討論

    HPV是一種直徑約55nm的雙鏈DNA病毒,其傳播方式主要與性生活有關(guān),通過肛周及外陰微小皮膚黏膜破損侵入基底層上皮細(xì)胞后[6],啟動(dòng)人體宮頸局部免疫反應(yīng):包括細(xì)胞免疫和體液免疫,其中細(xì)胞免疫起主要作用。大多數(shù)的HPV感染僅為一過性,病毒顆??呻S脫落的細(xì)胞碎屑排出體外,稱為一過性感染,病毒清除時(shí)間為8~14個(gè)月,僅5%~10%可發(fā)生持續(xù)性感染,這與機(jī)體免疫功能受損、免疫抑制以及病毒本身特性相關(guān),病毒DNA整合到宿主細(xì)胞的基因中,形成持續(xù)感染[7]。HPV病毒長期感染和存在依賴于基底細(xì)胞的不斷分化,HPV病毒感染機(jī)體后難以被抗原提呈細(xì)胞識(shí)別,在復(fù)制時(shí)保持低拷貝復(fù)制量,衣殼蛋白表達(dá)量少、干擾宿主細(xì)胞因子表達(dá)等多種特點(diǎn)使HPV病毒可以逃脫免疫監(jiān)視,發(fā)生免疫逃逸現(xiàn)象。如前所述,由于HPV病毒局限于皮膚及黏膜,很少進(jìn)入血液,所以局部細(xì)胞免疫為清除病毒的主力。初始CD4+T細(xì)胞(Th0)可在不同細(xì)胞因子誘導(dǎo)下分別向Th1及Th2細(xì)胞分化。Th1細(xì)胞主要起免疫活性作用,可誘導(dǎo)一系列免疫反應(yīng),IL-2及IFN-γ為Th1細(xì)胞相關(guān)因子,主要介導(dǎo)細(xì)胞免疫。IL-2可促進(jìn)T細(xì)胞增殖并維持T細(xì)胞體外長期生長,增強(qiáng)抗病毒能力;IFN-γ具有抗病毒活性,可阻斷病毒mRNA表達(dá)[8]。Th2細(xì)胞因子作用主要為抑制免疫反應(yīng)[9], IL-4為Th2細(xì)胞因子,可抑制Th0細(xì)胞向Th1細(xì)胞方向轉(zhuǎn)化[10]。TNF-α主要由NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞表達(dá),也可少量由Th1細(xì)胞表達(dá),可降低E6、E7蛋白產(chǎn)生,減少病毒復(fù)制[11]。HR-HPV持續(xù)感染過程中,Th1/Th2細(xì)胞功能平衡發(fā)生異常并向Th2細(xì)胞方向偏移,使得機(jī)體清除病毒的能力減弱[12]。本研究IL-2、IFN-γ作為Th1細(xì)胞相關(guān)因子, IL-4細(xì)胞作為Th2細(xì)胞相關(guān)因子,TNF-α作為巨噬細(xì)胞相關(guān)因子,可以發(fā)現(xiàn)治療前與治療后相比,IL-2及IFN-γ均有顯著的升高,而IL-4則有顯著下降,說明治療后與治療前相比,Th1/Th2平衡向Th1方向恢復(fù),TNF-α有所上升,說明機(jī)體抗病毒能力增強(qiáng)。派特靈組與干擾素栓劑組相比,四種免疫細(xì)胞因子在治療后總體上差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,在治療后轉(zhuǎn)陰者中,除IFN-γ外其余三種因子的變化差異兩組間仍有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異??紤]本實(shí)驗(yàn)納入研究例數(shù)偏少,標(biāo)本收集及實(shí)驗(yàn)中難免有誤差導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在一定偏差。

    派特靈是由中國科學(xué)院于1993年研制的一種專門針對(duì)HPV感染的純中藥制劑,包含白花蛇舌草、大青葉、苦參、金銀花、鴉膽子、蛇床子等二十余種中藥。大青葉可干擾HPV DNA復(fù)制,從而抑制病毒繁殖;苦參、金銀花具有清熱解毒功效,可發(fā)揮較強(qiáng)抗病毒作用;鴉膽子內(nèi)含多種生物堿、有機(jī)酸、苦味素成分,對(duì)癌細(xì)胞具有親和性,可選擇性破壞癌細(xì)胞膜和線粒體,干擾細(xì)胞代謝,從而破壞癌細(xì)胞;蛇床子具有剝脫角質(zhì)細(xì)胞的作用,使上皮細(xì)胞中的病毒顆粒在完成繁殖釋放之前隨宿主細(xì)胞一起剝脫,從而達(dá)到清除病毒的效應(yīng)。與其他學(xué)者關(guān)于派特靈用于治療持續(xù)HR-HPV感染的研究相比,本研究轉(zhuǎn)陰率大致相似[13]。

    本研究通過對(duì)派特靈與干擾素栓劑用藥前后HR-HPV感染轉(zhuǎn)陰率及宮頸局部免疫細(xì)胞因子變化情況的分析發(fā)現(xiàn),派特靈治療宮頸持續(xù)HR-HPV感染相較于干擾素栓劑在轉(zhuǎn)陰率及免疫學(xué)變化方面均具有一定的優(yōu)勢(shì)。

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