內(nèi)分泌治療激素受體陽(yáng)性乳腺癌的效果及其與ESR1基因位點(diǎn)的關(guān)系

顧兵 吳旦平 張晶晶

[摘要] 目的 研究?jī)?nèi)分泌治療激素受體陽(yáng)性乳腺癌的效果及其與雌激素受體1基因（ESR1）單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)（rs2077647和rs3798759）的關(guān)系。 方法 選擇2014年1月—2018年12月于江蘇省常熟市第五人民醫(yī)院收治的86例激素受體陽(yáng)性乳腺癌患者為研究對(duì)象，均接受內(nèi)分泌治療，并接受ESR1單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)（rs2077647和rs3798759）檢測(cè)。分析內(nèi)分泌治療后短期療效，并觀察其與ESR1單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的關(guān)系。 結(jié)果 86例患者內(nèi)分泌治療后完全緩解、部分緩解、疾病穩(wěn)定共45例，均歸入ETR組;疾病進(jìn)展41例，歸入ETNR組。ETR組rs2077647位點(diǎn)基因型為CC型者占比顯著高于ETNR組（P < 0.05），rs3798759位點(diǎn)基因型為TT型者占比顯著低于ETNR組（P < 0.05），且基因型為TG型者占比顯著高于ETNR組（P < 0.05）。ETR組rs2077647位點(diǎn)等位基因?yàn)镃者占比顯著高于ETNR組（P < 0.05），rs3798759位點(diǎn)等位基因?yàn)镚者占比顯著高于ETNR組（P < 0.05）。ESR1基因多態(tài)性是患者內(nèi)分泌治療效果的獨(dú)立影響因素（P < 0.05）。 結(jié)論 內(nèi)分泌治療激素受體陽(yáng)性乳腺癌后療效與ESR1單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)（rs2077647和rs3798759）密切相關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 內(nèi)分泌治療;激素受體;乳腺癌;雌激素受體1基因

[中圖分類號(hào)] R737.9 ? ? ? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A ? ? ? ? ?[文章編號(hào)] 1673-7210（2020）09（b）-0026-04

[Abstract] Objective To study the effect of endocrine therapy on hormone receptor positive breast cancer and its relationship with ESR1 gene locus （rs2077647 and rs3798759）. Methods Eighty-six patients with hormone receptor positive breast cancer admitted to the Fifth People′s Hospital of Changshu City in Jiangsu Province from January 2014 to December 2018 were selected as study objects. All patients were treated with endocrine therapy and ESR1 single nucleotide polymorphisms （rs2077647 and rs3798759） were detected. The short-term efficacy of endocrine therapy was analyzed and its relationship with ESR1 single nucleotide polymorphisms was observed. Results Forty five patients of 86 patients with complete remission， partial remission and stable disease after endocrine therapy were included in ETR group， 41 patients with disease progression were classified into ETNR group. The proportion of genotype CC at rs2077647 in ETR group was significantly higher than that in ETNR group （P < 0.05）， the proportion of TT genotype of rs3798759 was significantly lower than that of ETNR group （P < 0.05）， and the proportion of TG genotype was significantly higher than that of ETNR group （P < 0.05）. The proportion of allele C at rs2077647 in ETR group was significantly higher than that in ETNR group （P < 0.05）， and the proportion of allele G at rs3798759 was significantly higher than that in ETNR group （P < 0.05）. ESR1 gene polymorphism was an independent factor affecting the effect of endocrine therapy （P < 0.05）. Conclusion The effect of endocrine therapy on hormone receptor-positive breast cancer is closely related to ESR1 single nucleotide polymorphisms （rs2077647 and rs3798759）.

[Key words] Endocrine therapy; Hormone receptor; Breast cancer; Estrogen receptor 1 gene

據(jù)報(bào)道，近年來(lái)乳腺癌發(fā)病率呈逐年增長(zhǎng)趨勢(shì)，約75%的患者孕激素受體或雌激素受體呈陽(yáng)性，而經(jīng)后續(xù)強(qiáng)化輔助內(nèi)分泌治療可降低患者復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，延長(zhǎng)無(wú)病生存期與總生存期[1-3]。尤其針對(duì)雌激素受體陽(yáng)性早期乳腺癌患者，行內(nèi)分泌治療后可降低50%左右的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)[4]。絕大部分雌激素受體陽(yáng)性乳腺癌患者雖可從內(nèi)分泌治療中獲益，但治療過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)內(nèi)分泌治療耐藥，影響臨床療效[5]。而雌激素受體1基因（ESR1）異常是誘發(fā)內(nèi)分泌治療耐藥常見(jiàn)原因之一[6]。但目前臨床多側(cè)重于研究ESR1基因突變與乳腺癌內(nèi)分泌治療耐藥的相關(guān)性，鮮有報(bào)道分析內(nèi)分泌治療激素受體陽(yáng)性乳腺癌的效果及其與ESR1單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的關(guān)系[7]。因此，本文展開(kāi)相關(guān)研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2014年1月—2018年12月于江蘇省常熟市第五人民醫(yī)院收治的86例激素受體陽(yáng)性乳腺癌患者為研究對(duì)象，年齡18～52歲，平均（42.33±8.16）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：入院后確診[8]，未發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移;激素受體陽(yáng)性，孕激素受體或雌激素受體呈陽(yáng)性;腋窩淋巴結(jié)陰性（前哨或腋清）;年齡≥18歲，均為絕經(jīng)前初治患者;臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重心、腎等重要臟器功能不全;男性乳腺癌，或轉(zhuǎn)移性、家族性乳腺癌;其他惡性腫瘤;精神障礙、心理障礙病史;對(duì)本研究藥物過(guò)敏者。

1.2 方法

1.2.1 內(nèi)分泌治療

口服他莫昔芬（蘇州第壹制藥，生產(chǎn)批號(hào)：100930，規(guī)格：10 mg/片），10 mg/次，2次/d，持續(xù)治療12周。

1.2.2 ESR1單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)檢測(cè)方法

1.2.2.1 主要儀器與試劑 ?主要儀器包括UNOⅡ48型聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）擴(kuò)增儀（德國(guó)Biometra公司）、7000型熒光定量PCR儀（美國(guó)ABI公司）、Je1 Doc 2001型凝膠成像系統(tǒng)（美國(guó)Biorad公司）。微量DNA提取試劑盒由杭州新景生物試劑開(kāi)發(fā)有限公司提供（貨號(hào)：3102050），Tag DNA聚合酶由上海嶸崴達(dá)實(shí)業(yè)有限公司提供（貨號(hào)：羅氏4738225001），PCR試劑盒由北京百奧萊博科技有限公司提供（貨號(hào)：YT381-CLI）。

1.2.2.2 檢測(cè)方法 ?取全血100 μL，提取DNA后行PCR擴(kuò)增體系及循環(huán)體系設(shè)計(jì)。反應(yīng)條件：95℃ 5 min;93℃55 s，58℃ 40 s，72℃ 45 s，持續(xù)35個(gè)循環(huán);72℃ 10 min。PCR反應(yīng)體系：總體積25 μL，含Tris-HCl（pH 8.3）10 mmol/L、MgCl2 1.5 mmol/L、KCl 1.5 mmol/L、dNTP 200 mmol/L、上下游引物各15 pmol/L、Taq DNA聚合酶1.0 U和基因組DNA 20～40 ng。行PCR-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性基因分型，酶切反應(yīng)體系20 μL，PCR產(chǎn)物8～17 μL，BSA 0.2 μL，10×Buffer 2.0 μL，限制性內(nèi)切酶0.7 μL，滅菌雙蒸水按照PCR產(chǎn)物量補(bǔ)足體系;37℃恒溫箱孵育5 h，瓊脂糖凝膠分離，110 V電壓電泳40～50 min，行反應(yīng)產(chǎn)物檢測(cè)，后將凝膠電泳圖像輸入凝膠電泳成像系統(tǒng)，鑒定基因型結(jié)果。ESR1單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)包括rs2077647（基因型TT、CT、CC）和rs3798759（基因型TT、TG、GG），均存在2個(gè)等位基因，前者為等位基因T、C，后者為等位基因T、G。

1.3 觀察指標(biāo)

分析內(nèi)分泌治療效果并分為內(nèi)分泌治療有效（ETR）組和內(nèi)分泌治療無(wú)效（ETNR）組，觀察其療效與ESR1基因位點(diǎn)的關(guān)系。療效判定參考WTO實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[9]，包括完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、疾病穩(wěn)定（SD）、疾病進(jìn)展（PD），其中CR、PR、SD均歸入ETR組，其余納入ETNR組。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以百分率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)或校正χ2檢驗(yàn);等級(jí)資料組間比較采用Mann-Whitney U秩和檢驗(yàn);計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn);多因素logistic回歸分析法分析激素受體陽(yáng)性乳腺癌患者短期內(nèi)分泌治療效果的獨(dú)立影響因素。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床療效分析

86例患者內(nèi)分泌治療后CR 2例，占2.33%;PR 26例，占30.23%;SD 17例，占19.77%，均歸入ETR組。PD 41例，占47.67%，歸入ETNR組。

2.2 兩組患者基線資料比較

兩組腫瘤大小、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見(jiàn)表1。

2.3 兩組患者ESR1單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果比較

ETR組rs2077647位點(diǎn)基因型為CC型者占比顯著高于ETNR組（P < 0.05），rs3798759位點(diǎn)基因型為TT型者占比顯著低于ETNR組（P < 0.05），且基因型為TG型者占比顯著高于ETNR組（P < 0.05）。ETR組rs2077647位點(diǎn)等位基因?yàn)镃者占比顯著高于ETNR組（P < 0.05），rs3798759位點(diǎn)等位基因?yàn)镚者占比顯著高于ETNR組（P < 0.05）。見(jiàn)表2～3。

2.4 影響激素受體陽(yáng)性乳腺癌患者內(nèi)分泌治療效果的多因素logistic回歸分析

以內(nèi)分泌治療后短期療效為因變量，將上述有差異的單因素作為自變量，對(duì)各變量進(jìn)行賦值（腫瘤大小<3.5 cm = 0，≥3.5 cm = 1;TNM分期Ⅰ期=1，Ⅱ期=2，Ⅲ期=3;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移=1，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移=0;ESR1各等位基因不含該等位基因者=0，含該等位基因者=1），納入多因素logistic回歸統(tǒng)計(jì)分析。腫瘤大小、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ESR1基因多態(tài)性均為影響患者內(nèi)分泌治療效果的獨(dú)立影響因素（P < 0.05）。見(jiàn)表4。

3 討論

目前，他莫昔芬被認(rèn)為是治療絕經(jīng)前激素受體陽(yáng)性乳腺癌的標(biāo)準(zhǔn)一線內(nèi)分泌治療方案，主要經(jīng)自分泌或旁分泌機(jī)制干擾腫瘤細(xì)胞分泌生長(zhǎng)因子及血管生成因子，于乳腺組織中形成雌激素拮抗效應(yīng)，并與雌激素受體競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合雌激素，經(jīng)中斷與生長(zhǎng)停滯及細(xì)胞凋亡相關(guān)的雌激素，最終實(shí)現(xiàn)抗腫瘤目的[10-12]。陳嵐等[13]發(fā)現(xiàn)，他莫昔芬治療雌激素受體陽(yáng)性乳腺癌有效率為32.56%，控制率達(dá)51.16%，與本結(jié)論（52.33%）相似，證實(shí)他莫昔芬治療該病療效確切。近年來(lái)，已有大量單核苷酸多態(tài)性被證實(shí)可作為藥物反應(yīng)標(biāo)記用于臨床藥物治療指導(dǎo)，但鮮有報(bào)道分析內(nèi)分泌治療激素受體陽(yáng)性乳腺癌的效果及其與ESR1單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的關(guān)系[14-15]。

本研究發(fā)現(xiàn)，ETR組rs2077647位點(diǎn)基因型為CC型者占比明顯高于ETNR組，rs3798759位點(diǎn)基因型為TT型者占比明顯低于ETNR組，且基因型為TG型者占比顯著高于ETNR組;而ETR組rs2077647位點(diǎn)等位基因?yàn)镃者占比明顯高于ETNR組，rs3798759位點(diǎn)等位基因?yàn)镚者占比明顯高于ETNR組，證實(shí)內(nèi)分泌治療激素受體陽(yáng)性乳腺癌后療效與ESR1單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌他莫昔芬治療反應(yīng)與雌激素受體基因點(diǎn)突變、變異、多態(tài)性有關(guān)[16-18]。Ghali等[19]也認(rèn)為，rs2077647位點(diǎn)與rs3798759的等位基因及基因型與激素受體陽(yáng)性乳腺癌內(nèi)分泌治療效果相關(guān)。rs2077647位點(diǎn)處于外顯子l上，本身為同義突變，而rs3798759位點(diǎn)處于3′UTR，兩個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)作為遺傳標(biāo)記，按連鎖不平衡分析原理，臨近區(qū)域內(nèi)可能出現(xiàn)影響內(nèi)分泌治療效果的陽(yáng)性區(qū)域，存在內(nèi)分泌治療效果相關(guān)基因，具體機(jī)制尚待今后深入調(diào)查。但有報(bào)道發(fā)現(xiàn)，rs2077647位點(diǎn)與下游rs2234693位點(diǎn)構(gòu)成的單倍型與乳腺癌內(nèi)分泌治療效果無(wú)相關(guān)性，故認(rèn)為可向其上游選擇遺傳標(biāo)記展開(kāi)深入分析，但本文未分析此點(diǎn)，有待今后進(jìn)一步探討[20]。此外，本研究中發(fā)現(xiàn)，ESR1基因多態(tài)性亦為影響患者內(nèi)分泌治療效果的獨(dú)立影響因素，進(jìn)一步證實(shí)內(nèi)分泌治療激素受體陽(yáng)性乳腺癌后療效與ESR1單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)有關(guān)。

綜上，ESR1單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)（rs2077647和rs3798759）與激素受體陽(yáng)性乳腺癌激素受體陽(yáng)性乳腺癌療效有關(guān)，但本文選取病例數(shù)偏少，結(jié)果可能存在偏倚，故今后需深入研究。

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（收稿日期：2020-02-25）