寧夏地區(qū)RhD陰性獻(xiàn)血人群D變異型及Rh表現(xiàn)型研究

步曉筠， 邵 峰

（寧夏回族自治區(qū)血液中心，銀川 750001）

Rh血型系統(tǒng)是人類紅細(xì)胞血型系統(tǒng)中最為重要的基于蛋白的血型系統(tǒng)，在34個(gè)已知血型系統(tǒng)中，它表達(dá)的抗原數(shù)量最多，分子機(jī)制也最復(fù)雜，其中與臨床關(guān)系較為密切的Rh血型抗原主要是D、C、c、E、e這5種。為了給臨床提供及時(shí)、安全、有效的血液，提高對(duì)RhD陰性受血者的供血能力，本研究對(duì)寧夏回族自治區(qū)初篩為RhD陰性的獻(xiàn)血者的血清學(xué)表型分布及表型與D變異型的關(guān)系進(jìn)行分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2015年1月1日至2019年6月30日寧夏回族自治區(qū)血液中心的初次無(wú)償獻(xiàn)血且初篩RhD陰性獻(xiàn)血者共1092例。

1.2 儀器與試劑

意大利GSM公司的Hemotype全自動(dòng)血型分析儀，日本Kubota公司的KA-2200型離心機(jī)。RhD陰性初篩試劑使用英國(guó)Millipore公司的單克隆IgM和IgG抗-D混合劑，RhD陰性確認(rèn)試驗(yàn)采用加拿大Dominion Biologicals limited公司的單克隆IgM和IgG抗-D混合劑、英國(guó)Millipore公司的單克隆IgM和IgG抗-D混合劑以及上海血液生物醫(yī)藥公司的抗-D（IgG），直接抗人球蛋白試劑、抗C、抗c、抗E、抗e試劑均由上海血液生物醫(yī)藥公司提供。

1.3 方法

1.3.1 鹽水微板法初篩Rh 初篩使用單克隆IgM和IgG抗-D混合劑進(jìn)行鹽水微板初篩。

1.3.2 間接抗人球蛋白試驗(yàn)（IAT）進(jìn)行RhD陰性確認(rèn) 初篩陰性者的受檢紅細(xì)胞分別與3種不同來(lái)源的單克隆抗-D（lgM+lgG）或抗-D（IgG）應(yīng)用生理鹽水試管法進(jìn)行IAT，同時(shí)做陰陽(yáng)對(duì)照。觀察結(jié)果均為陰性就確認(rèn)判定為RhD陰性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性標(biāo)本加做直接抗球蛋白試驗(yàn)排除假陽(yáng)性。

1.3.3 Rh血清學(xué)表型鑒定 分別用抗C、抗c、抗E和抗e試劑對(duì)RhD陰性標(biāo)本進(jìn)行鹽水試管法血清學(xué)分型。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。RhD陰性獻(xiàn)血者與D變異型獻(xiàn)血者間Rh抗原分布差異采用χ2檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RhD陰性獻(xiàn)血者表型分布

1092例初篩RhD陰性獻(xiàn)血者中，1032例確認(rèn)為RhD陰性獻(xiàn)血者（94.51%），分型為ccee 635例（61.53%）、Ccee 276例（26.74%）、CCee 40例（3.88%）、ccEe 50例（4.84%）、CcEe 29例（2.81%）、CCEe 2例（0.19%）。未見ccEE和CcEE表現(xiàn)型。見表1。

2.2 60例D變異型表型分布

1092例初篩RhD陰性獻(xiàn)血者經(jīng)間接抗人球蛋白試驗(yàn)，確定為D變異型共計(jì)60例，占總數(shù)的5.49%。ccEe初篩RhD陰性84例，D變異型占40.48%（34/84）；Ccee初篩RhD陰性288例，D變異型占4.17%（12/288）；CCee初篩 RhD 陰性 44例，D 變異型占9.09%（4/44）。見表1。

表1 Rh表現(xiàn)型分布

2.3 Rh抗原分布

C抗原陽(yáng)性初篩371例，D變異型占6.47%（24/371）；c抗原陽(yáng)性初篩RhD陰性1046例，D變異型占5.35%（56/1046）；E抗原陽(yáng)性初篩RhD陰性 125例，D 變異型占 35.20%（44/125）；e抗原陽(yáng)性初篩RhD陰性1090例，D變異型占5.32%（58/1090）。確認(rèn)Rh陰性獻(xiàn)血者與D變異型獻(xiàn)血者E抗原分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=239.88，P＜0.01），C 抗原、c抗原、e抗原分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表 2。

3 討論

RHD和RHCE基因位于 1p34.3-36.1，RHD基因編碼RhD抗原，RHCE基因編碼RhCE抗原，兩基因緊密連鎖，高度同源[1]。RHD目前已發(fā)現(xiàn)255種等位基因[2]。將過(guò)去習(xí)慣分類的“弱D”“部分D”統(tǒng)稱為“D變異型”。大體上，D變異型的分子機(jī)制有兩種：一種是RHD基因上一些堿基改變導(dǎo)致RhD蛋白上氨基酸轉(zhuǎn)變；另一種是基因重組產(chǎn)物，基因轉(zhuǎn)換導(dǎo)致產(chǎn)生RHD-CE-D基因，其中RHD基因的一部分片段被RHCE基因的片段取代[3]。

本研究共檢出D變異型60例，占初篩RhD陰性總數(shù)的 5.49%，濟(jì)南為 2.70%[4]、蘇州為2.88%[5]、北京為 3.82%[6]、西安為 4.06%[7]、岳陽(yáng)為4.80%[8]。60例D變異型分型主要為ccEe 34例（56.67%）、Ccee 12例（20%）、CcEe 8例（13.33%），D變異型表現(xiàn)型分布與西安、北京的研究結(jié)果相似，其中西安ccEe占比44.30%[7]、北京ccEe占比63.80%[6]，均以ccEe占比率最高。本研究中ccEe初篩RhD陰性84例中D變異型占40.48%，蘇州為 40%[5]，西安為 27.56%[7]，北京為 27.54%[6]，提示ccEe表現(xiàn)型初篩陰性血樣，出現(xiàn)D變異型概率較高。

本研究中E抗原陽(yáng)性初篩RhD陰性125例，檢出D變異型占35.20%，確認(rèn)RhD陰性獻(xiàn)血者與D變異型獻(xiàn)血者間Rh抗原分布進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，兩組間E抗原分布差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，以上數(shù)據(jù)均提示含有E抗原的初篩RhD陰性個(gè)體，出現(xiàn)D變異型的占比遠(yuǎn)高于不含E抗原的初篩RhD陰性個(gè)體，與之前北京、濟(jì)南的研究結(jié)果一致[4，6]。因此，E抗原陽(yáng)性或表現(xiàn)型為ccEe為初篩RhD陰性血樣中有較高比例為D變異型，建議對(duì)這類血樣尤以關(guān)注，避免D變異型的漏檢。

表2 Rh抗原分布

如果將D變異型的血液輸給RhD陰性的受血者，受血者可能產(chǎn)生免疫反應(yīng)，從而產(chǎn)生抗D抗體，也可能引起嚴(yán)重的新生兒溶血病[9]。D變異型的檢出，避免了RhD陰性輸血患者接受D抗原刺激產(chǎn)生抗D抗體的風(fēng)險(xiǎn)，提高了免疫后產(chǎn)生抗體的RhD陰性輸血患者的輸血安全性和有效性。寧夏地區(qū)RhD陰性及D變異型獻(xiàn)血者的表現(xiàn)型分布資料，對(duì)進(jìn)一步指導(dǎo)臨床特殊配血，保障輸血安全具有重要意義。