桑白皮湯對(duì)豚鼠離體氣管平滑肌的舒張作用

武 夏， 朱亞飛， 馬 銳， 閆 琳， 趙啟鵬，

（1.寧夏醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，銀川 750004； 2.寧夏醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，銀川 750004；3.寧夏醫(yī)科大學(xué)，銀川 750004）

桑白皮湯出自《景岳全書》，由桑白皮、半夏、蘇子、苦杏仁、川貝母、山梔、黃芩、黃連各八分，加姜片3片組成，治肺氣有余，火炎痰盛作喘。它是治療痰火內(nèi)盛、作喘等病的重要方劑，常用于治療慢性阻塞性肺病、支氣管哮喘、支氣管炎等病癥。國(guó)家中醫(yī)藥管理局會(huì)同國(guó)家藥品監(jiān)督管理局于2018年制定《古代經(jīng)典名方目錄（第一批）》，為開(kāi)展來(lái)源于古代經(jīng)典名方的中藥復(fù)方提供了政策上的支持，該方被納入其中。目前，對(duì)于該方的文獻(xiàn)報(bào)道集中在使用原方或加減方的臨床觀察上[1]，鮮有使用原方開(kāi)展實(shí)驗(yàn)研究的報(bào)道。本文將研究桑白皮湯對(duì)豚鼠離體氣管平滑肌張力的影響，為該方的推廣及臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

健康豚鼠，300～500 g，雌雄兼用，由寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。飼養(yǎng)期間自由飲食。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

BL-420N生物機(jī)能系統(tǒng)、HW-400E恒溫平滑肌槽，均購(gòu)自成都泰盟軟件有限公司；HAO-3211醫(yī)用分子篩制氧機(jī)，購(gòu)自歐姆龍（大連）有限公司；ALC-MQ3微型可調(diào)氣源，購(gòu)自上海奧爾科特生物科技有限公司；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵，購(gòu)自鄭州長(zhǎng)城科工有限公司；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，購(gòu)自上海亞榮生化儀器廠。

1.3 藥材與試劑

桑白皮、半夏、蘇子、苦杏仁、川貝母、山梔、黃芩、黃連飲片均購(gòu)自寧夏明德中藥飲片有限公司。K-H（Krebs-Henseleit）營(yíng)養(yǎng)液：1000 mL 蒸餾水中含有 NaCl 7.67 g、KCl 0.34 g、MgCl20.25g、CaCl20.20 g、NaHCO32.13 g、KH2PO40.16 g、葡萄糖2.19 g。乙酰膽堿（ACh，貨號(hào)：A2661）和組胺（His，貨號(hào)：59964）購(gòu)自 Sigma-Aldrich。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 桑白皮湯提取物的制備 桑白皮、川貝母、黃芩、半夏、山梔、杏仁、黃連、蘇子和生姜各稱取50g，共計(jì)450g，加10倍量蒸餾水浸泡30 min，煎煮30 min，倒出濾液，濾渣中加8倍量的蒸餾水再煎煮30 min，合并2次濾液，用200目濾布過(guò)濾，濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮，用容量瓶定容至100 mL，放于4℃冷藏備用。

1.4.2 豚鼠離體氣管螺旋條的制備 取豚鼠一只，用鐵錘猛擊頭部致昏，迅速?gòu)念i部腹面正中切開(kāi)皮膚，分離氣管，從甲狀軟骨下部至氣管下部分叉處剪取主氣管。放入盛有預(yù)冷的并預(yù)先通入混合氣體（95%O2和5%CO2）飽和K-H營(yíng)養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中，去除氣管周圍的結(jié)締組織，將氣管剪成2 cm×2 mm的螺旋條，然后將標(biāo)本連接到張力換能器上，放入盛有15 mL K-H營(yíng)養(yǎng)液（37±0.5）℃的標(biāo)本槽內(nèi)，立即通入95%O2和5%CO2混合氣體。調(diào)整前負(fù)荷到1.80 g左右，穩(wěn)定1 h，期間每15 min換1次新鮮 K-H營(yíng)養(yǎng)液[2-4]。

1.4.3 桑白皮湯對(duì)豚鼠離體氣管正常狀態(tài)下、ACh、His、KCl致痙的舒張作用 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始，用BL-420N生物機(jī)能系統(tǒng)記錄一段正常曲線，記錄此時(shí)的張力后依次加入桑白皮湯提取物，使終濃度為0.05、0.10 和 0.20 g·mL-1，觀察 30 min 內(nèi)曲線變化。加入ACh（0.33×10-4g·mL-1）、His（0.33×10-5g·mL-1）、KCl（0.10×10-3g·mL-1）0.5 mL，觀察 30 min 內(nèi)曲線變化，作為30 min內(nèi)ACh、His和KCl對(duì)離體氣管的正常影響，并記錄最高點(diǎn)和最低點(diǎn)數(shù)值（計(jì)算解痙率）。加入 ACh（0.33×10-4g·mL-1）、His（0.33×10-5g·mL-1）、KCl（0.10×10-3g·mL-1）0.5 mL，待達(dá)到最高點(diǎn)后，依次加入低、中、高劑量的桑白皮湯提取物，觀察30 min內(nèi)曲線變化幅度并記錄氣管收縮曲線。計(jì)算桑白皮湯的解痙率，解痙率（%）=（給藥前曲線高度-給藥后曲線高度）/給藥前曲線高度×100%。每次加藥觀察結(jié)束后用K-H液沖洗3次，讓張力曲線恢復(fù)至平穩(wěn)狀態(tài)再開(kāi)始下一次實(shí)驗(yàn)[5]，加藥時(shí)間相隔15 min，每個(gè)實(shí)驗(yàn)分別選擇3條正常氣管條，重復(fù)3次。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，組內(nèi)比較采用Dunnet-t檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 桑白皮湯對(duì)豚鼠正常離體氣管條張力的影響

與蒸餾水對(duì)照組比較，給予高、中、低劑量的桑白皮湯藥后，解痙率逐漸增大（P＜0.01），說(shuō)明桑白皮湯對(duì)正常狀態(tài)下的豚鼠氣管平滑肌有舒張作用，且舒張作用呈一定的濃度依賴性。見(jiàn)圖1和表1。

表1 桑白皮湯對(duì)豚鼠正常離體氣管解痙率的影響（±s，n＝9）

表1 桑白皮湯對(duì)豚鼠正常離體氣管解痙率的影響（±s，n＝9）

與蒸餾水組相比**P＜0.01。

組別濃度/（g·mL-1）給藥前張力/g給藥后張力/g解痙率/%蒸餾水組 — 1.80±0.11 1.79±0.13 0.50±0.06桑白皮湯組 0.05 1.74±0.14 1.48±0.09 8.85±1.36**0.10 1.84±0.10 1.56±0.04 10.11±1.16**0.20 1.92±0.08 1.69±0.02 11.82±1.22**

2.2 桑白皮湯對(duì)ACh致豚鼠氣管平滑肌收縮的解痙作用

在給予ACh后的高點(diǎn)，分別給予低、中、高劑量的桑白皮湯后，與單獨(dú)給予ACh比較，解痙率逐漸變大（P＜0.01），說(shuō)明桑白皮湯能抑制ACh引起的豚鼠離體氣管條收縮。見(jiàn)圖2和表2。

2.3 桑白皮湯對(duì)His致豚鼠氣管平滑肌收縮的影響

在給予His后的高點(diǎn)，分別給予低、中、高劑量的桑白皮湯后，與單獨(dú)給予His比較，解痙率逐漸變大（P＜0.01），說(shuō)明桑白皮湯能抑制His引起的豚鼠離體氣管條收縮。見(jiàn)圖3和表3。

表2 桑白皮湯對(duì)ACh致豚鼠離體氣管收縮后的影響（±s，n＝9）

表2 桑白皮湯對(duì)ACh致豚鼠離體氣管收縮后的影響（±s，n＝9）

與ACh組相比**P＜0.01。

組別藥物濃度/（g·mL-1）給藥前張力/g給藥后張力/g解痙率/%ACh 組 0.33×10-4 2.42±0.31 2.29±0.14 5.38±1.24桑白皮湯組 0.05 2.34±0.24 1.97±0.17 16.05±2.20**0.10 2.24±0.18 1.80±0.08 19.60±2.07**0.20 2.54±0.39 1.95±0.43 23.20±2.36**

2.4 桑白皮湯對(duì)KCl致豚鼠氣管平滑肌收縮的影響

在給予KCl后的高點(diǎn)，分別給予低、中和高劑量的桑白皮湯后，與單獨(dú)給予KCl比較，解痙率逐漸增大（P＜0.01），說(shuō)明桑白皮湯能抑制KCl引起的豚鼠離體氣管條收縮。見(jiàn)圖4和表4。

表3 桑白皮湯對(duì)His致豚鼠離體氣管收縮后的影響（±s，n＝9）

表3 桑白皮湯對(duì)His致豚鼠離體氣管收縮后的影響（±s，n＝9）

與His組相比**P＜0.01。

藥物終濃度（/g·mL-1） 給藥前張力/g給藥后張力/g解痙率/%組別His組 0.33×10-5 2.34±0.18 2.19±0.16 6.40±1.76桑白皮湯組 0.05 2.25±0.29 1.85±0.30 18.40±2.91**0.10 2.31±0.15 1.86±0.16 22.04±2.80**0.20 2.27±0.02 1.51±0.007 33.29±3.04**

表4 桑白皮湯對(duì)KCl致豚鼠離體氣管收縮后的影響（±s，n＝9）

表4 桑白皮湯對(duì)KCl致豚鼠離體氣管收縮后的影響（±s，n＝9）

與 KCl組相比 **P＜0.01。

組別藥物終濃度/（g·mL-1）給藥前張力/g給藥后張力/g解痙率/%KCL 組 0.10×10-3 2.28±0.17 2.15±0.22 5.67±1.31桑白皮湯組 0.05 2.35±0.15 2.08±0.24 11.47±1.65**0.10 2.17±0.05 1.78±0.05 17.67±2.06**0.20 2.29±0.37 1.81±0.21 20.73±2.44**

3 討論

本實(shí)驗(yàn)選用經(jīng)典方劑桑白皮湯為研究對(duì)象，研究其對(duì)豚鼠離體氣管平滑肌的作用。方中桑白皮常用于鎮(zhèn)咳、祛痰等。現(xiàn)代藥理研究[6]表明，桑白皮具有抗炎、抗病毒、降壓、抗癌等生理活性。黃芩，味苦、性寒，有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎等功效[7]。其有效成分為黃酮類，其中以黃芩苷的藥理作用最強(qiáng)。黃芩和桑白皮在臨床上常作為藥對(duì)配伍合用，發(fā)揮清肺、瀉肺、平喘、止咳等功效，用于肺熱雍盛、氣逆咳喘、咳痰黃稠等癥[7]。川貝母具有清熱潤(rùn)肺、化痰止咳等功效，在臨床中被廣泛應(yīng)用于治療慢性咽炎、急性支氣管炎等呼吸系統(tǒng)疾病[8]?？嘈尤示哂兄箍绕酱?rùn)腸通便的功效?？嘈尤手泻锌嘈尤受铡⒅居?、苦杏仁酶、苦杏仁苷酶、櫻葉酶、氨基酸、多種維生素及礦物質(zhì)元素等[9]。其所含的苦杏仁苷分解后產(chǎn)生少量氫氰酸，能輕度抑制中樞，使呼吸運(yùn)動(dòng)趨于平緩，從而起到鎮(zhèn)咳平喘的作用。半夏具有止咳平喘、抗炎、抗衰老、鎮(zhèn)靜、抗腫瘤、止嘔等作用。對(duì)半夏的現(xiàn)代研究[10]表明，半夏含生物堿、揮發(fā)油等化學(xué)成分，具有止咳平喘作用。蘇子能夠有效緩解哮喘患者喘息、胸悶、咳嗽的臨床癥狀，具有良好的鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用[11]。

本實(shí)驗(yàn)表明，桑白皮湯對(duì) His、ACh、KCl所致氣管平滑肌的收縮均有抑制作用，且對(duì)His所誘導(dǎo)氣管收縮的抑制作用更明顯。ACh是通過(guò)啟動(dòng)受體操縱型Ca2+通道（ROC）和促進(jìn)Ca2+從其貯存位點(diǎn)的釋放來(lái)發(fā)揮作用。高鉀通過(guò)引起細(xì)胞膜去極化，激活電壓依賴型Ca2+通道（PDC）導(dǎo)致外鈣內(nèi)流來(lái)發(fā)揮作用。說(shuō)明桑白皮湯舒張氣管平滑肌的作用機(jī)制可能與抑制H1受體，抑制ROC和PDC的作用都有關(guān)。該作用和機(jī)制有待通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。此外，可對(duì)桑白皮湯進(jìn)行拆方研究，針對(duì)組方中各單味藥及其相互配伍后對(duì)氣管平滑肌的作用作進(jìn)一步的研究，為桑白皮湯的臨床應(yīng)用及推廣提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為古代經(jīng)典名方開(kāi)發(fā)和應(yīng)用做貢獻(xiàn)。