遼寧省本溪市疾病預(yù)防控制中心(117000)陳清
風(fēng)疹是一種以急性發(fā)熱出疹為特點(diǎn)的呼吸道傳染病癥,因具有流行性和爆發(fā)性趨勢(shì),嚴(yán)重危害青少年生命安全[1]。同時(shí)孕期女性在妊娠前90日如果感染風(fēng)疹病毒,將導(dǎo)致胎兒出現(xiàn)先天性風(fēng)疹綜合征,造成流產(chǎn)、死胎或者畸形。所以風(fēng)疹的早期治療十分關(guān)鍵。常規(guī)風(fēng)疹診斷為病毒分離培養(yǎng)法,血清IgM抗體測(cè)定,但是存在較多局限性,如培養(yǎng)時(shí)間較久、診斷復(fù)雜、抗體存在交叉性等,無法滿足當(dāng)前快速診斷需求[2]。因此本文將針對(duì)ELISA與RT-PCR檢測(cè)形式的臨床價(jià)值,分析測(cè)定結(jié)果。
附表1 ELISA計(jì)算的結(jié)果(47例)
附表2 RT-PCR計(jì)算的結(jié)果(13例)
附表3 不同采樣時(shí)間同一方式測(cè)定結(jié)果分析
附表4 同一采集時(shí)間不同方式測(cè)定的結(jié)果
1.1 樣本分析 依據(jù)衛(wèi)生部印發(fā)的《全國麻疹監(jiān)測(cè)方案(2014版)》要求,對(duì)收集的風(fēng)疹疑似患者病例,同時(shí)予以血清樣本和咽拭子樣本測(cè)定。
1.2 方法
1.2.1 ELISA測(cè)定 應(yīng)用風(fēng)疹病毒IgM抗體測(cè)定試劑盒測(cè)定血清樣本,應(yīng)用樣本稀釋液,按照1∶100比例稀釋后,以陰性、臨界、陽性對(duì)照及稀釋好的樣本分別選取100μL,加進(jìn)反應(yīng)孔中,在37℃下放置60分鐘;洗板5次;應(yīng)用酶標(biāo)物稀釋液將酶標(biāo)物作1∶70稀釋,每孔加進(jìn)100μL,在37℃下放置60分鐘;洗板5次;加底物A和B液室溫避光靜置15~30分鐘,酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)測(cè)定結(jié)果。
1.2.2 RT-PCR測(cè)定 應(yīng)用RNA/DNA試劑盒提取咽拭子洗液,應(yīng)用風(fēng)疹病毒核酸測(cè)定試劑盒,對(duì)提取液進(jìn)行擴(kuò)增和測(cè)定。
1.2.3 實(shí)驗(yàn)室確診 選取ELISA和RT-PCR任意一種方式的測(cè)定結(jié)果為陽性患者,判定為實(shí)驗(yàn)室確診。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS17.0軟件記錄本次研究數(shù)據(jù),計(jì)數(shù)資料用率(%)形式表達(dá),行卡方檢驗(yàn)。組間P<0.05證實(shí)有差異性。
2.1 不同方法呈現(xiàn)的結(jié)果 本次共納入風(fēng)疹麻疹疑似血清47份和咽拭子樣本13份。47份血清樣本經(jīng)由ELISA測(cè)定陽性16份,ELISA陽性率34.04%(16/47),實(shí)驗(yàn)室確診21份,確診率44.68%(21/47);ELISA和RT-PCR靈敏度為76.19%(16/21)和7.69%(1/13)。13份咽拭子樣本RT-PCR測(cè)定陽性1份,RT-PCR陽性率7.69%(1/13);經(jīng)過卡方檢驗(yàn),ELISA陽性率和RT-PCR陽性率對(duì)比有差異性(X2=4.6626,P=0.0308)。具體由附表1、附表2可知。
2.2 采集時(shí)間不同所測(cè)定的結(jié)果 出疹當(dāng)天采集時(shí)間記錄為24小時(shí),分析采集時(shí)間和測(cè)定結(jié)果的關(guān)聯(lián)性。出疹48小時(shí)以內(nèi)采集的樣本為20份,出疹72小時(shí)為25份。
ELISA,48小時(shí)以內(nèi)收集的血清樣本陽性率和72小時(shí)以上收集的血清樣本陽性率對(duì)比有差異性(P<0.05)。對(duì)RTPCR,48小時(shí)以內(nèi)收集的咽拭子樣本陽性率和72小時(shí)以上收集的咽拭子樣本陽性率對(duì)比存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),具體由附表3可知。
2.3 同一采集時(shí)間不同方式測(cè)定的結(jié)果 出疹48小時(shí)內(nèi)收集ELISA測(cè)定陽性5份,ELISA陽性率25.00%(5/20);RT-PCR測(cè)定陽性3份,RT-PCR陽性率15.00%(3/20);卡方檢驗(yàn)RT-PCR陽性率和ELISA陽性率對(duì)比存在差異性(P<0.05)。
出疹72小時(shí)以上收集ELISA測(cè)定陽性8份,ELISA陽性率為32.00%(8/25);RT-PCR測(cè)定陽性1份,RT-PCR陽性率為4.00%(1/25);卡方檢驗(yàn)ELISA陽性率和RT-PCR陽性率對(duì)比有差異性(X2=4.5000,P=0.0338),見附表4。
當(dāng)前,在我國相關(guān)報(bào)道中,認(rèn)為風(fēng)疹疑似樣本采用ELISA和RT-PCR測(cè)定陽性率,具有較大的差異性,臨床研究認(rèn)為ELISA測(cè)定比率最高為84.00%,最低為1.30%,RT-PCR測(cè)定陽性率最高為100.00%[3],最低為1.30%。本次數(shù)據(jù)分析中ELISA和RT-PCR測(cè)定陽性率在34.04%及7.69%,雖然在相關(guān)報(bào)道范圍內(nèi),但是仍然低于臨床研究。分析因素可能是由于樣本質(zhì)量或者臨床醫(yī)師鑒別診斷水平較低導(dǎo)致少數(shù)樣本中的特異性目標(biāo)測(cè)定物濃度過低,甚至不存在。這也說明今后采集操作流程應(yīng)科學(xué)規(guī)范,從而提升鑒別診斷的價(jià)值。
也有數(shù)據(jù)證實(shí),RT-PCR測(cè)定陽性率高于ELISA測(cè)定,但是本研究結(jié)果卻與其不符。PCR02號(hào)樣品第一次抗體未檢測(cè)出陽性,二次采樣檢測(cè)出風(fēng)疹I(lǐng)gM陽性,與咽拭結(jié)果一致;PCR03號(hào)樣品檢出風(fēng)疹I(lǐng)gM陽性,而咽拭結(jié)果未檢出,究其因素可能是由于血清相比于咽拭子采集技術(shù)和保存條件要求較低,血清中的抗體和咽拭子中的病毒比較[4],不容易受到環(huán)境因素影響,從而造成抗體滴度下降或者病毒RNA降解。因此今后臨床中應(yīng)提升咽拭子采集質(zhì)量,對(duì)保存條件進(jìn)行控制,以此提升RT-PCR測(cè)定效果。
根據(jù)采集時(shí)間的不同來分析,依據(jù)出疹48小時(shí)內(nèi)收集的樣本RT-PCR測(cè)定陽性率>72小時(shí)采集數(shù)據(jù),而ELISA測(cè)定陽性率相反且出疹48小時(shí)以內(nèi)收集的樣本數(shù)<72小時(shí)以上,這也說明早期數(shù)據(jù)過少是導(dǎo)致ELISA陽性率>RT-PCR的另一因素。根據(jù)同一收集時(shí)間不同方式來分析,出疹48小時(shí)以內(nèi)收集的樣本,其RT-PCR陽性率<ELISA,出疹72小時(shí)以上收集的樣本[5],ELISA陽性率>RT-PCR。這可能是因免疫力差異導(dǎo)致抗體出現(xiàn)的早晚有所區(qū)別,從而造成病癥早期應(yīng)用ELISA無法測(cè)定出抗體出現(xiàn)較晚的樣本;且RT-PCR能夠直接測(cè)定出病毒RNA,病癥早期階段病毒復(fù)制較為活躍,所以病癥早期測(cè)定更加敏銳。
綜上所述,為了更進(jìn)一步提升風(fēng)疹測(cè)定能力,今后應(yīng)提升樣本質(zhì)量和臨床醫(yī)師的鑒別診斷能力,尤其是咽拭子質(zhì)量,這對(duì)于臨床研究具有十分重要的價(jià)值。