格列齊特片(Ⅱ)溶出曲線的一致性評價研究

孔 彬，劉曉霞，趙 昕

0 引言

格列齊特片(Ⅱ)是磺酰脲類降糖藥，臨床用于治療非胰島素依賴型糖尿病，該藥物的藥理作用是選擇性作用胰島B細(xì)胞，促進(jìn)胰島素分泌，進(jìn)食后產(chǎn)生葡萄糖時，快速提高胰島素的釋放，抑制肝糖生成以及輸出；能降低血小板的聚集和黏附力，有助于防治糖尿病微血管病變。其藥物分子結(jié)構(gòu)中有氮雜環(huán)結(jié)構(gòu)，具有獨(dú)特的藥物特點(diǎn)[1]。本品具有緩釋作用，可以顯著增加餐后胰島素和C-肽分泌水平，療效持久。本實(shí)驗(yàn)參照藥典方法[2-4]，采用光纖藥物溶出度過程分析儀(簡稱：FODT-601)對格列齊特片(Ⅱ)開展溶出度實(shí)驗(yàn)[5-8]：參照藥典通則，用磷酸鹽緩沖液(pH 8.6) 1 000 ml作為溶媒，選取測定波長226 nm，實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)速150 r/min，分別在60、180 min時按緩釋制劑溶出度進(jìn)行判定。180 min后，觀察溶出曲線，并獲得對應(yīng)時間的相對溶出百分率，比較溶出曲線的一致性。

1 儀器與試劑

光纖藥物溶出度過程分析儀(FODT-601，上海富科思生物技術(shù)發(fā)展有限公司)、分析天平(梅特勒-托利多 AB135-S)、脫氣儀(天大天發(fā))，純水儀(艾柯)。

格列齊特對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號100269-201004)；格列齊特(Ⅱ)片(A廠，法國某公司，規(guī)格：80 mg×60片，批號：4C747T；B廠，貴州某公司，規(guī)格80 mg×60片，批號：20140901；C廠，石家莊某公司，規(guī)格：80 mg×60片，批號：G0130513)。磷酸二氫鉀(分析純)；氫氧化鈉(分析純)；冰醋酸(分析純)；醋酸鈉(分析純)；濃鹽酸(分析純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 配制溶媒 磷酸鹽緩沖液(pH 8.6)：氫氧化鈉42.0 g加入脫氣水至5 000 ml，搖勻得溶液1。稱得磷酸二氫鉀136.0 g，加入脫氣水至5 000 ml，搖勻得溶液2。取溶液1與溶液2，加3 150 ml乙醇，加脫氣水至10 000 ml，搖勻，測得pH值(8.6±0.05)，用于溶出度實(shí)驗(yàn)。

2.2 配制對照品溶液 精密稱取對照品16.39 mg置于100 ml容量瓶中，用磷酸鹽緩沖液(pH 8.6)溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為163.0 μg/ml的對照品溶液。

2.3 配制供試品溶液 格列齊特片(Ⅱ)10片，研磨成細(xì)粉，精密稱得格列齊特片(Ⅱ) 16.07 mg置于100 ml容量瓶中，加入磷酸鹽緩沖液(pH 8.6)溶解后，稀釋至100 ml，制成供試品溶液。

2.4 檢測方法的建立 將濃度81.35 μg/ml的片粉溶液，濃度為81.95 μg/ml的格列齊特標(biāo)準(zhǔn)溶液，在220～600 nm光譜范圍內(nèi)掃描。見圖1。

圖1 儀器掃描格列齊特片(Ⅱ)吸收光譜圖注：A.片粉，B.對照品

通過在分析儀上掃描對照品光譜顯示：在波長226 nm處有明顯吸收峰，且吸收度大小符合測定要求，采用550 nm為參比波長，儀器軟件用雙波長法扣除輔料。

2.5 線性與范圍 分別精密量取4.0、6.0、12.0、18.0、25.0 ml濃度為163.9 μg/ml的格列齊特對照品溶液，分別置于50 ml容量瓶中，用pH 8.6磷酸鹽緩沖液稀釋后配制成梯度溶液。分別在分析儀上進(jìn)行測定，將相對濃度C%作為縱坐標(biāo)，以吸收度A作為橫坐標(biāo)，作每個通道的線性回歸方程。在FODT-601的6個通道上測定后得到標(biāo)準(zhǔn)方程。見表1。

表1 溶出介質(zhì)為pH 8.6磷酸鹽緩沖液的標(biāo)準(zhǔn)方程

2.6 精密度與回收率

2.6.1 日內(nèi)及日間精密度 取“2.5.1”項(xiàng)下溶液，24 h內(nèi)在儀器上連續(xù)測定6次，獲得吸收度RSD=1.94%；并連續(xù)測定6 d，吸收度的RSD為2.08%，證明該方法日內(nèi)及日間精密度良好。

2.6.2 準(zhǔn)確度 精密稱取相當(dāng)于20 mg格列齊特的藥粉適量，用溶媒溶解并稀釋至250 ml 量瓶中，搖勻。分別稱得約7.0、9.0、10.0 mg的格列齊特對照品加入上述片粉溶液中，分別配制成各3份高、中、低濃度的供試品溶液，在FODT-601上測定吸收度，后帶入標(biāo)準(zhǔn)方程計算回收率。結(jié)果顯示，高、中、低濃度溶液的平均回收率在90.2%～105.7%范圍內(nèi)(RSD=2.56%～3.78%，n=6)，表明本方法的準(zhǔn)確度較好，符合要求。

2.7 溶出度試驗(yàn) 轉(zhuǎn)籃法在光纖藥物溶出度過程分析儀(FODT-601)測定，使用探頭為1 mm，溶媒為磷酸鹽緩沖液(pH 8.6) 1 000 ml，轉(zhuǎn)速為150 r/min，溫度設(shè)定(37±0.5) ℃，將各通道上的線性方程帶入監(jiān)測軟件，設(shè)定226 nm作為測定波長，550 nm作為參比波長，掃描空白溶液，并把6片藥片投入經(jīng)脫氣處理的溶媒中，同時按下“開始”按鍵，設(shè)定溶出時間180 min，進(jìn)行監(jiān)測溶出曲線。

2.8 三個廠家的溶出曲線比較結(jié)果 見圖2。

圖2 三個廠家實(shí)時溶出曲線

2.9 溶出度曲線相似性評價 FODT-601軟件結(jié)果顯示，仿制藥與原研藥在藥典規(guī)定的溶出介質(zhì)中的f2分別為65.6、50.4。結(jié)果顯示，樣品2廠家的仿制藥與原研藥在藥典規(guī)定的溶出介質(zhì)中的溶出行為相似。

3 討論

3.1 依據(jù)國家公布的“仿制藥質(zhì)量一致性評價意見”的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)以及《普通口服固體制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》，采用相似因子f2法，遵照取點(diǎn)原則，本實(shí)驗(yàn)參比制劑180 min內(nèi)平均溶出率達(dá)85%以上，為嚴(yán)格試驗(yàn)結(jié)果，本實(shí)驗(yàn)增加了60、120 min兩個點(diǎn)進(jìn)行采樣，采用相似因子法比較溶出曲線，參比制劑與受試制劑累積溶出量差的平方和最小，當(dāng)f2在50～100之間時表明二者溶出曲線相似[3-4]。由結(jié)果f2分別為65.6、50.4可知，仿制藥與原研藥在藥典規(guī)定的溶出介質(zhì)中的溶出行為相似[6-7]。并實(shí)時得到180 min內(nèi)的真實(shí)溶出曲線。

3.2 目前，格列齊特片(Ⅱ)的釋放度測定方法 主要采用2015年版中國藥典的方法[2]，需要人手動抽溶出液、補(bǔ)充取出液、膜過濾后稀釋等步驟，操作費(fèi)時繁瑣，針對緩釋制劑溶出度試驗(yàn)周期較長，耗時耗力，容易產(chǎn)生疲勞后帶來操作誤差。光纖藥物溶出度過程分析儀可全程記錄藥物溶出曲線過程，節(jié)省實(shí)驗(yàn)人員的時間精力和物力；簡化緩釋制劑釋放度測定的繁瑣過程，并獲得真實(shí)完整的大量監(jiān)測過程數(shù)據(jù)[7-8]；有利于藥品工藝的研究，為仿制藥一致性評價中的制劑溶出度試驗(yàn)提供現(xiàn)代化的測定方法[4]。