湖羊長(zhǎng)期冷凍精液和胚胎復(fù)蘇繁育研究

章曉煒 劉莉君 馬敏彪 劉雅麗

摘要：近年來，浙江省湖羊保種以活體保種為主，種羊場(chǎng)選種選育方向較為單一，羔皮特性逐漸減弱，公羊血統(tǒng)擴(kuò)充困難。為進(jìn)一步做好湖羊種質(zhì)資源保護(hù)工作，浙江省專門向農(nóng)業(yè)農(nóng)村部畜牧業(yè)司申請(qǐng)使用湖羊冷凍精液和胚胎，在國(guó)家級(jí)保種場(chǎng)浙江華麗牧業(yè)有限公司和省級(jí)保種場(chǎng)長(zhǎng)興永盛牧業(yè)有限公司開展了湖羊冷凍精液和冷凍胚胎試驗(yàn)，共產(chǎn)羔羊103只，其中活羔95只。成功復(fù)蘇繁育出冷凍羊，有較高的胚胎復(fù)蘇產(chǎn)羔成功率、冷凍精液受孕分娩率及羔羊成活率，從冷凍羊初生鑒定和生產(chǎn)性能等結(jié)果，成功驗(yàn)證了生物保種保存技術(shù)的可行性。

關(guān)鍵詞：湖羊;遺傳物質(zhì);冷凍保存;復(fù)蘇與繁育

湖羊是我國(guó)特有的優(yōu)良地方品種，也是浙江省優(yōu)勢(shì)特色畜牧產(chǎn)業(yè)，因湖羊養(yǎng)殖具有節(jié)糧、綠色、低排放等優(yōu)點(diǎn)，已成為現(xiàn)代畜牧業(yè)轉(zhuǎn)型升級(jí)的領(lǐng)頭羊、推進(jìn)畜牧業(yè)供給側(cè)結(jié)構(gòu)性改革的重要突破口。2013年，浙江省啟動(dòng)實(shí)施了“湖羊產(chǎn)業(yè)振興計(jì)劃”，2015年，浙江省農(nóng)業(yè)廳印發(fā)了《湖羊、兔、蜜蜂等特色優(yōu)勢(shì)畜牧業(yè)提升發(fā)展三年行動(dòng)計(jì)劃（2015—2017年）》，全省各級(jí)農(nóng)業(yè)部門以實(shí)施提質(zhì)增量、秸稈換肉、種業(yè)提升和精品培育四大行動(dòng)為主要抓手，強(qiáng)力推進(jìn)湖羊特色產(chǎn)業(yè)提升發(fā)展，取得了明顯成效。但受市場(chǎng)需求影響，近年來湖羊種羊場(chǎng)選種選育方向較為單一，羔皮特性逐漸減弱，公羊血統(tǒng)擴(kuò)充困難。為進(jìn)一步做好湖羊種質(zhì)資源保護(hù)工作，浙江省專門向農(nóng)業(yè)農(nóng)村部畜牧業(yè)司申請(qǐng)使用湖羊冷凍精液和胚胎，在國(guó)家級(jí)保種場(chǎng)浙江華麗牧業(yè)有限公司和省級(jí)保種場(chǎng)長(zhǎng)興永盛牧業(yè)有限公司開展了湖羊冷凍精液和冷凍胚胎試驗(yàn)，共產(chǎn)羔羊103只，其中活羔95只。

1? 申請(qǐng)使用湖羊遺傳物質(zhì)

2018年2月，浙江省向農(nóng)業(yè)農(nóng)村部畜牧業(yè)司申請(qǐng)使用湖羊遺傳物質(zhì)，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部全國(guó)畜牧總站先后兩次派專家考察試驗(yàn)點(diǎn)試驗(yàn)條件，最終批復(fù)浙江使用1998年3只公羊的75劑凍精、1988年5只公羊的27劑凍精、1998年的4對(duì)公母羊的24枚胚胎。經(jīng)查找歷史檔案，本次在浙江使用的凍精來自8只公羊，其中1988年制作的安瓿凍精27劑，來自5只公羊，無(wú)系譜檔案，按5個(gè)血統(tǒng)計(jì)算;1998年制作的細(xì)管凍精75劑，來自余杭湖羊場(chǎng)（現(xiàn)為浙江華麗牧業(yè)有限公司）的3只公羊， 3只公羊?yàn)?個(gè)家系。冷凍胚胎24枚分別來自4對(duì)不同的公羊和母羊，其中2對(duì)采集吳興區(qū)種羊場(chǎng)，2對(duì)采集于浙江華麗牧業(yè)有限公司。

2 商定湖羊凍精和胚胎繁育及復(fù)蘇試驗(yàn)實(shí)施方案

在前期多次湖羊保種場(chǎng)實(shí)地考察調(diào)研的基礎(chǔ)上，2月份浙江省畜牧獸醫(yī)局組織召開湖羊凍精和胚胎試驗(yàn)論證會(huì)，與會(huì)專家詳細(xì)分析了湖羊凍精和胚胎的系譜檔案，1988年采集制作的凍精由于歷史悠久，無(wú)詳細(xì)檔案（僅專家回憶采集于湖州吳興區(qū)），1998年制作的凍精和胚胎采集于我省湖州吳興區(qū)和杭州余杭區(qū)（現(xiàn)浙江華麗牧業(yè)有限公司）。綜合考慮凍精和胚胎的采集歷史、采集地點(diǎn)、公羊系譜、現(xiàn)有保種場(chǎng)試驗(yàn)條件和母羊狀況等因素，最終確定湖羊凍精和胚胎試驗(yàn)選擇在國(guó)家級(jí)保種場(chǎng)浙江華麗牧業(yè)有限公司和省級(jí)保種場(chǎng)長(zhǎng)興永盛牧業(yè)有限公司。

3 開展湖羊凍精和胚胎試驗(yàn)復(fù)蘇繁育實(shí)驗(yàn)

3.1 挑選受體母羊并單獨(dú)組群

邀請(qǐng)省內(nèi)湖羊?qū)＜疫M(jìn)場(chǎng)挑選受體母羊，選擇遺傳背景盡量一致，系譜記錄完善，家系不同，健康，繁殖性能好（母性好），年齡在2～4胎的母羊。經(jīng)專家挑選，永盛牧業(yè)選擇10個(gè)家系60只母羊;華麗牧業(yè)選擇7個(gè)家系90只母羊。

3.2 胚胎移植和凍精配種操作

在前期同期發(fā)情處理的基礎(chǔ)上，從4月11日開始，由全國(guó)畜牧總站邀請(qǐng)國(guó)內(nèi)專家采用內(nèi)窺鏡子宮角輸精手術(shù)操作方式進(jìn)行胚胎移植和凍精配種。本次實(shí)驗(yàn)24枚胚胎共移植到9只母羊（胚胎解凍鏡檢發(fā)現(xiàn)有2枚胚胎為不可用胚胎，9只母羊種4只母羊移植了3枚胚胎，5只母羊移植了2枚胚胎）;凍精配種共計(jì)79只母羊，其中華麗牧業(yè)配種46只，永盛牧業(yè)配種33只;鮮精對(duì)照組配種共計(jì)40只母羊，其中華麗牧業(yè)配種20只，永盛牧業(yè)配種20只。

3.3 B超妊娠檢查

6月4～5日，在凍精配種和胚胎移植55天左右，邀請(qǐng)省農(nóng)科院專家對(duì)所有凍精配種和胚胎移植的母羊開展妊娠檢查，B超妊娠初步檢查結(jié)果，永盛牧業(yè)凍精配種母羊懷孕10只，待確定8只;華麗牧業(yè)凍精配種母羊懷孕22只，待確定1只;胚胎移植母羊懷孕2只，對(duì)確認(rèn)懷孕的母羊個(gè)體拍照存檔。8月24日，產(chǎn)前肉眼觀察，再次確認(rèn)妊娠結(jié)果，永盛牧業(yè)凍精配種母羊33只，懷孕25只;華麗牧業(yè)凍精配種母羊46只，懷孕23只;華麗牧業(yè)胚胎配種母羊9只，懷孕6只，補(bǔ)拍了懷孕母羊個(gè)體照片存檔。

3.4 凍精配種和胚胎移植羔羊出生

從8月29日至9月14日，凍精配種和胚胎移植的羔羊陸續(xù)出生，胚胎移植的母羊6只分娩，共出生9只，活羔8只;凍精配種的母羊48只分娩，共出生94只，活羔87只。鮮精對(duì)照組懷孕分娩母羊30只（永盛牧業(yè)16只，華麗牧業(yè)14只），出生羔羊共計(jì)68只，存活64只。

3.5 凍精和胚胎羔羊初生鑒定

羔羊出生后，邀請(qǐng)專家對(duì)小羔羊進(jìn)行初生鑒定，按照湖羊國(guó)標(biāo)要求，對(duì)羔羊初生重、花紋類型、花紋面積、花紋寬度、毛長(zhǎng)、花紋緊密度、羔皮等級(jí)進(jìn)行鑒定。

4 結(jié)果與分析

4.1 初生重

8只胚胎活羔的羔羊平均初生重3.59公斤;87只凍精活羔羊平均初生重3.28公斤，其中1988年凍精活羔平均初生重2.98公斤，1998年凍精活羔初生重3.48公斤;對(duì)照組鮮精的64只活羔羊平均初生重2.98公斤。

4.2? 性別比例

對(duì)95只活羔羊公母進(jìn)行鑒定，其中公53只，母42只，公母比1.26∶1（胚胎羔羊公母比0.6∶1，1988年凍精羔羊公母比0.96∶1;1998年凍精羔羊公母比2.56∶1）;對(duì)照組鮮精公羊37只，母羊27只，公母比1.37∶1。

4.3? 優(yōu)質(zhì)羔皮羊比率

對(duì)湖羊凍精和胚胎95只活羔羔皮邀請(qǐng)專家進(jìn)行鑒定，其中甲級(jí)羔皮羔羊32只、甲級(jí)羔皮占比34%（胚胎羔羊中甲級(jí)羔皮羊3只，甲級(jí)羔皮占比38%;1988年凍精甲級(jí)羔皮羔羊22只，甲級(jí)羔皮占比40%;1998年凍精甲級(jí)羔皮羔羊7只，甲級(jí)羔皮占比22%）。對(duì)照組64只活羔羊，其中甲級(jí)羔皮羔羊7只、甲級(jí)羔皮占比11%。

4.4? 分娩率

本次凍精配種和胚胎移植試驗(yàn)羊母羊共計(jì)88只（其中胚胎移植9只，凍精配種79只），受孕分娩54只（胚胎6只，凍精48只），分娩率61%（其中胚胎移植母羊6只受孕分娩，受孕分娩率67%）;1988年凍精配種50只，受孕分娩32只，受孕分娩率為64%;1998年凍精配種29只，受孕分娩16只，受孕分娩率55%;對(duì)照組配種40只，受孕分娩30只，受孕分娩率75%。

4.5? 凍精配種產(chǎn)羔率

湖羊凍精生出羔羊共計(jì)94只，受孕分娩母羊平均產(chǎn)羔1.96只，產(chǎn)羔率196%（其中1988年凍精羔羊出生61只，平均產(chǎn)羔1.91只，產(chǎn)羔率191%;1998年凍精羔羊出生33只，平均產(chǎn)羔2.13只，產(chǎn)羔率213%），對(duì)照組產(chǎn)羔68只，平均產(chǎn)羔2.27只，產(chǎn)羔率227%。

4.6 胚胎移植復(fù)蘇產(chǎn)羔成功率

胚胎移植24枚（其中2枚不可用），復(fù)蘇成功產(chǎn)羔9只，胚胎復(fù)蘇產(chǎn)羔成功率38%。

4.7? 活羔率

湖羊凍精和胚胎羔羊共計(jì)產(chǎn)活羔95只，活羔率92%，其中胚胎活羔羊8只，活羔率89%;1988年凍精活羔羊55只，活羔率90%;1998年凍精活羔33只，活羔率97%;對(duì)照組活羔64只，活羔率94%。