細胞質(zhì)動力蛋白輕鏈1在腎癌組織中的表達及其臨床意義

汪 寧， 王榮江， 邵四海， 湯建兒， 陳 煜， 高建國

腎癌是泌尿生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病人數(shù)約占全身惡性腫瘤的3%[1]。良性腎腫瘤包括腎血管平滑肌脂肪瘤、腎纖維瘤和腎腺瘤等，而腎癌多為原發(fā)性腎腫瘤。腎癌以根治性手術(shù)為主，而出現(xiàn)遠處轉(zhuǎn)移將會失去治療時機[2]，因此尋找有效的腎癌標志物對指導疾病診斷、判斷預后、指導治療具有重要臨床意義。動力蛋白輕鏈家族包括細胞質(zhì)動力蛋白輕鏈1（Tctex-1/Dynlt-1)、Dynlt3、Dynll-1、Dynll-2、Dynrb-1、Dynrb-2。Tctex-1的編碼基因位于6q25.2，分子量12 ku，含有113AA，由2個α螺旋和4個β鏈組成的二聚體。它主要富集在間質(zhì)成纖維細胞的高爾基體上，同時也表達于間質(zhì)微管和核膜上[3]。本實驗采用免疫組化法檢測腎癌組織中Tctex-1的表達，比較腎癌組織與癌旁正常腎臟組織中的Tctex-1陽性表達率，并分析腎癌組織中Tctex-1陽性表達率與臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取湖州師范學院附屬第一醫(yī)院2010年至2018年收治的136例腎透明細胞癌患者，取其癌組織及癌旁正常腎組織作為研究對象，均通過病理證實。136例腎癌患者中男80例，女56例；年齡31～83歲，平均（61.5±10.2）歲；透明細胞癌97例，嫌色細胞癌15例，乳頭狀腺癌10例，囊性腎癌14例；右側(cè)70例，左側(cè)66例；采用1997年WHO分級系統(tǒng)進行病理分級：Ⅰ、Ⅱ級81例，Ⅲ、Ⅳ級55例；采用2009年AJCC腎癌分期系統(tǒng)進行臨床分期：Ⅰ、Ⅱ期76例，Ⅲ、Ⅳ期60例。所有腎癌患者手術(shù)前均無其他惡性腫瘤病史，手術(shù)前均未接受放、化療或免疫治療。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑 兔超敏免疫組化檢測試劑、山羊血清、DAB顯色試劑購自北京中杉金橋生物科技公司；Tctex-1多克隆抗體購自Abcam公司。

1.2.2 標本采集 標本先經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋后常規(guī)脫水，將石蠟切片制成厚4 μm，HE染色。

1.2.3 免疫組化 將石蠟切片滴加一抗Tctex-1（1:800），孵育清洗后滴加二抗，顯色、蘇木素復染、脫水、封片，在顯微鏡下觀察并拍照。

1.2.4 結(jié)果判定 （1）根據(jù)陽性細胞的染色強度進行評分：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。（2）切片中選取5個視野，根據(jù)陽性細胞數(shù)占實質(zhì)細胞的百分比進行評分：陰性為0分，＜10%為1分，10%～50%為2分，50%～75%為3分，≥75%為4分。以上2項評分結(jié)果相乘結(jié)果即為陽性等級：0分為陰性（–），1～4分為弱陽性（+），5～8分為陽性（++）；9～12分為強陽性（+++）。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以例（%）表示，采用χ2檢驗進行組間比較，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 Tctex-1在腎透明細胞癌及癌旁組織中的表達情況 Tctex-1在腎癌組織中呈陽性表達，而在癌旁組織中呈陰性或弱陽性表達。Tctex-1蛋白定位在腎實質(zhì)細胞胞漿中，而在腎小管、腎小球、集合管中為陰性表達，見圖1。

圖1 Tctex-1在腎透明細胞癌及其癌旁組織中的表達（HE染色，×100）

2.2 不同類型腎癌與癌旁組織中Tctex-1陽性表達率比較 腎癌組織中Tctex-1的陽性表達率為91.9%，明顯高于癌旁組織（12.5%），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），見表1。

2.3 Tctex-1陽性表達率與腎癌患者臨床病理特征的關(guān)系 腎癌組織病理分級Ⅲ、Ⅳ級的Tctex-1陽性表達率均高于Ⅰ、Ⅱ級，臨床分期Ⅲ、Ⅳ期的Tctex-1陽性表達率高于Ⅰ、Ⅱ期，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。

表1 腎癌組織與癌旁組織Tctex-1陽性表達率比較

表2 腎癌組織中Tctex-1陽性表達率與患者臨床特征的關(guān)系

3 討論

胞質(zhì)動力蛋白是由輕鏈、中間鏈、重鏈等組成的多亞基蛋白復合體[4]，能將生物能轉(zhuǎn)化為機械能，通過微管運動進行物質(zhì)運輸。在有絲分裂中胞質(zhì)動力蛋白可促進中心體分離、核膜解體、紡錘體組裝[5-6]；還能與動力激活蛋白相結(jié)合，從而驅(qū)動染色體分離以及膜性細胞器運輸。Tctex-1作為一種重要的細胞因子，參與多個生物學過程，如介導逆行囊泡運輸，參與直接的物質(zhì)運輸，應力纖維和黏著斑的形成，軸突發(fā)育，病毒感染，細胞的破骨過程等，同時也參與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展及遷移過程。通過RNA干擾沉默Tctex-1基因能夠加重缺氧誘導的線粒體損傷[7]。亦有報道稱Tctex-1Ser82磷酸化會降低與中間鏈的親和力，參與微管和線粒體的調(diào)節(jié)[8]。通過酵母雙雜交實驗發(fā)現(xiàn)Tctex-1與Dkk-3相互作用。免疫熒光實驗發(fā)現(xiàn)Tctex-1與Dkk-3共定位于人成纖維細胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)附近。而Dkk-3是Dickkopf蛋白家族一員，在多種腫瘤包括腎癌中表達下調(diào)，過表達Dkk-3可通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激信號誘導凋亡[9-13]。研究發(fā)現(xiàn)Tctex-1在90%的乳腺癌中高表達，并作為p21活化酶1的底物，與Pak1形成復合物促進乳腺癌發(fā)生、生長及乳腺癌細胞存活[14]，提示Tctex-1可能是一種促癌因子。

本研究組通過前期研究發(fā)現(xiàn)下調(diào)Tctex-1基因可以降低人腎癌786-O細胞的增殖、遷移以及侵襲能力，其機制可能與下游Wnt、VDAC1信號通路有關(guān)[15]。本研究結(jié)果顯示，Tctex-1在腎癌組織中呈陽性表達，在癌旁組織中呈陰性或弱陽性表達，提示Tctex-1可能扮演一種癌基因參與腎癌的發(fā)生及發(fā)展，并為腎癌早期診斷以及預防提供依據(jù)。并且研究發(fā)現(xiàn)Tctex-1在腎癌不同病理類型中均有所表達，Tctex-1在腎癌組織病理分級和臨床分期Ⅲ、Ⅳ級（期）中的陽性表達率均分別高于病理分級和臨床分期Ⅰ、Ⅱ級（期）；提示Tctex-1表達量可隨疾病進展而提高，更驗證了它作為促癌基因存在，而高表達的Tctex-1可能會進一步促進腎癌細胞增殖及浸潤，而抑制Tctex-1表達可能會抑制癌細胞進展。

綜上所述，高表達Tctex-1基因與腎癌發(fā)生發(fā)展過程有密切聯(lián)系，是腎癌的促癌基因。Tctex-1蛋白表達量因腎癌的病理分級以及臨床分期提高而增加，具有正相關(guān)性。今后仍需進一步研究Tctex-1在腎癌中的遺傳學機制、信號通路以及對腎癌細胞生物學行為的影響，從而為腎癌的早期診斷以及治療提供新的分子靶標。