不同免疫檢測(cè)法在檢測(cè)乙肝血清學(xué)標(biāo)志物(HBsAg)中的價(jià)值對(duì)比

廣東省茂名市電白區(qū)人民醫(yī)院（525400）張北華 潘偉光

乙型肝炎病毒一種嗜肝細(xì)胞病毒，可引起乙型病毒性肝炎（viral hepatitis type B）導(dǎo)致肝臟的病變，最終可發(fā)展成肝癌[1]。當(dāng)乙型肝炎病毒復(fù)制活躍時(shí)，具有極強(qiáng)傳染性，可通過血液和接觸破損的皮膚黏膜等傳染，嚴(yán)重危害人們的健康[2]。目前，臨床實(shí)驗(yàn)室主要檢查乙肝血清學(xué)標(biāo)志物作為診斷依據(jù)之一，主要以HBsAg指標(biāo)協(xié)助早期的診斷。為了及時(shí)、準(zhǔn)確的發(fā)現(xiàn)乙型肝炎病毒的感染，通過早發(fā)現(xiàn)繼而早診斷并得到最佳的治療以改善患者的預(yù)后，選擇最佳的檢測(cè)方法是實(shí)驗(yàn)室檢查值得探討的問題。本文旨在研究不同免疫檢測(cè)法在檢測(cè)乙肝血清學(xué)標(biāo)志物(HBsAg)中的價(jià)值對(duì)比?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選擇2017年7月～2018年6月我院就診于肝病門診患者的血液標(biāo)本共500例，其中男267例，女233例，年齡17～75歲，平均（46.23±6.72）歲。參考《WS299-2008乙型病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)》為診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，經(jīng)病理確診275例。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者及家屬自愿簽訂知情同意書；配合臨床檢查者。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并腫瘤及嚴(yán)重肝腎功能不全疾病者；不依從檢查者。研究方案報(bào)經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審議通過。

1.2 方法 于清晨空腹采集門診患者靜脈血10mL，離心、分離血清，將血清均分為三份，儲(chǔ)存待檢。采用酶聯(lián)免疫法、免疫膠體金法、化學(xué)發(fā)光免疫分析法分別測(cè)定乙肝五項(xiàng)血清標(biāo)志物，均嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)步驟操作。酶聯(lián)免疫法采用北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的ELISA試劑盒；免疫膠體金法采用珠海麗珠試劑股份有限公司的膠體金免疫層析法試紙條；化學(xué)發(fā)光免疫分析法采用邁克全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光測(cè)定儀IS1200全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光測(cè)定儀及配套試劑。

1.3 觀察指標(biāo) 比較三種不同方法檢測(cè)乙肝五項(xiàng)（HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb）血清標(biāo)志物的陽(yáng)性率，參考標(biāo)準(zhǔn)[4]：HBsAg＞0.2ng/mL時(shí)，HBeAb＞0.2PEIU/mL，HBeAg＞0.5PEIU/mL，HBsAb＞0.5ng/mL，HBcAb＞0.9PEIU/mL為陽(yáng)性；比較三種不同方法檢測(cè)乙肝血清學(xué)標(biāo)志物（HBsAg）的靈敏度和特異性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料n(%)表示，行χ2檢驗(yàn)比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2 結(jié)果

2.1 三種方法檢測(cè)結(jié)果比較 乙肝五項(xiàng)血清標(biāo)志物陽(yáng)性率從高到低依次是：化學(xué)發(fā)光免疫分析法、酶聯(lián)免疫法、免疫膠體金法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見附表1。

2.2 三種檢測(cè)方法靈敏度和特異性比較 靈敏度：化學(xué)發(fā)光免疫分析法高于酶聯(lián)免疫法（χ2=21.626，P=0.000），酶聯(lián)免疫法高于免疫膠體金法（χ2=4.849，P=0.028）差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；特異性：化學(xué)發(fā)光免疫分析法高于酶聯(lián)免疫法（χ2=2.438，P=0.118），酶聯(lián)免疫法高于免疫膠體金法（χ2=2.957，P=0.086）差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見附表2。

3 討論

乙型病毒性肝炎是一種以肝臟病變?yōu)樘卣鞯膫魅拘约膊?，乙肝病?HBV)為主要致病病毒，通過血液、性傳播，成為全球性共同面臨的傳染性疾病。有報(bào)道顯示[5]，與世界各國(guó)相比，在我國(guó)乙型病毒性肝炎疾病負(fù)擔(dān)最為嚴(yán)重。新發(fā)和慢性乙型病毒感染者依然很多，仍然面臨著預(yù)防、篩選、治療等問題，因此要高度重視乙肝的防治工作。臨床實(shí)驗(yàn)室的準(zhǔn)確檢測(cè)對(duì)于早期篩查和臨床診斷，指導(dǎo)其治療，有非常重要的臨床價(jià)值。目前實(shí)驗(yàn)室乙肝五項(xiàng)血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果是作為臨床診斷乙肝病毒、判斷傳染病性及病程的主要依據(jù)。人體感染乙肝病毒后，其病毒DNA經(jīng)過轉(zhuǎn)錄、復(fù)制、翻譯等系列變化，最早暴露出乙型肝炎表面抗原（HBsAg），通過檢測(cè)HBsAg反映乙肝病毒的感染情況[6]。目前臨床實(shí)驗(yàn)室常采用酶聯(lián)免疫法、免疫膠體金法、化學(xué)發(fā)光免疫分析法等方法進(jìn)行檢測(cè)。

酶聯(lián)免疫法是運(yùn)用放射免疫技術(shù)來檢測(cè)體液中微量物質(zhì)的固相免疫測(cè)定方法。它的原理是讓受檢標(biāo)本與抗原或抗體和酶連接成具有保持其免疫活性的酶標(biāo)抗原或抗體結(jié)合，使其結(jié)合物與固相載體表面的抗原或抗體反應(yīng)，通過洗滌的方法分離形成的抗原抗體復(fù)合物，再加入底物后，經(jīng)酶的催化作用變?yōu)橛猩a(chǎn)物，通過觀察顏色的深淺多少來定性或者定量的分析。酶聯(lián)免疫法因其檢測(cè)費(fèi)用實(shí)惠，靈敏度和特異度較高等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于乙型肝炎病毒的臨床檢測(cè)。但是也有步驟較多，操作時(shí)間長(zhǎng)，操作過程可能會(huì)發(fā)生不穩(wěn)定因素導(dǎo)致感染，影響其靈敏度和特異性，具有一定的局限性[7]。

附表1 三種檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)果比較[n(%)]

附表2 三種檢測(cè)方法靈敏度、特異性比較

免疫膠體金法是以膠體金標(biāo)記與抗原抗體反應(yīng)相結(jié)合的免疫標(biāo)記技術(shù)。該檢測(cè)方法具有操作簡(jiǎn)便，時(shí)間短，成本低廉且膠體金本身為紅色，不需加上色劑，對(duì)人體安全的優(yōu)點(diǎn)。有臨床研究提示[8]，免疫膠體金法對(duì)于濃度低呈弱陽(yáng)性的標(biāo)本檢測(cè)力不夠，容易出現(xiàn)假陰性的結(jié)果。

化學(xué)發(fā)光免疫分析法是運(yùn)用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)經(jīng)氧化等化學(xué)反應(yīng)后形成激發(fā)態(tài)中間體通過免疫反應(yīng)系統(tǒng)標(biāo)記在被檢測(cè)標(biāo)本上，再用化學(xué)方法測(cè)定從激發(fā)態(tài)到基態(tài)狀態(tài)發(fā)出的光子量的方法。此方法結(jié)合了的化學(xué)發(fā)光測(cè)定技術(shù)的高靈敏度與免疫反應(yīng)的高特異性等優(yōu)勢(shì)，檢測(cè)范圍更廣，是目前應(yīng)用極為廣泛，最為先進(jìn)的標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)，尤其對(duì)于定量的檢測(cè)。

本次研究通過以上三種方法檢測(cè)乙肝血清學(xué)標(biāo)志物（HBsAg），以病例確診為金標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行準(zhǔn)確度對(duì)比。結(jié)果顯示，乙肝五項(xiàng)血清標(biāo)志物陽(yáng)性率最高為化學(xué)發(fā)光免疫分析法，最低為免疫膠體金法；化學(xué)發(fā)光免疫分析法的靈敏度均高于酶聯(lián)免疫法和免疫膠體金法，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；特異性方面，化學(xué)發(fā)光免疫分析法均高于酶聯(lián)免疫法和免疫膠體金法，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。說明對(duì)乙肝病毒血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)中的靈敏性和檢出率化學(xué)發(fā)光免疫分析法高于酶聯(lián)免疫法和免疫膠體金法，可早期、準(zhǔn)確的反應(yīng)乙型肝炎病毒感染程度?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析法出特有的靈敏度和特異度外，因?qū)嵭腥詣?dòng)化，有配套的試劑，且彌補(bǔ)了酶聯(lián)免疫法操作繁雜等問題，減少了環(huán)節(jié)誤差，對(duì)檢測(cè)結(jié)果具有很高的檢出率，對(duì)于進(jìn)行定量的檢測(cè)，可極大的避免假陰性率，提高了靈敏度，對(duì)于避免漏診、誤診有重要的意義[9]。因此檢測(cè)乙肝血清學(xué)標(biāo)志物的臨床價(jià)值均高于酶聯(lián)免疫法和免疫膠體金法。同時(shí)其費(fèi)用也較高。通過本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，三種方法在特異度方面相差不大，對(duì)于免疫膠體金法，其操作簡(jiǎn)便，快速等優(yōu)點(diǎn)可用于急診等需快速出結(jié)果的檢測(cè)中。有研究報(bào)道[10]，酶聯(lián)免疫法價(jià)格低，與化學(xué)發(fā)光免疫分析法相比，其高靈敏度和特異性，用于大批量檢測(cè)標(biāo)本有優(yōu)勢(shì)。

綜上所述，三種方法中以化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)乙肝血清學(xué)標(biāo)志物（HBsAg）效果最佳，價(jià)值高。但在臨床中還需根據(jù)具體情況結(jié)合三種方法的優(yōu)勢(shì)進(jìn)行檢測(cè)。