金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物中堿溶性蛋白的提取及性質(zhì)測(cè)定

于淑池,卓珊珊,徐云升,薛長(zhǎng)風(fēng),裴志勝

(1.海南熱帶海洋學(xué)院食品科學(xué)與工程學(xué)院,海南三亞 572022;2.海洋食品精深加工關(guān)鍵技術(shù)省部共建協(xié)同創(chuàng)新中心,海南三亞 572022;3.海南省院士工作站(海洋食品),海南三亞 572022)

金鯧魚(yú)(Trachinotusovatus)學(xué)名卵形鯧鲹,屬硬骨魚(yú)綱、鱸形目、鯵科、鯧鲹屬[1],是我國(guó)南方沿海重要的海產(chǎn)經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)之一[2]。2016年產(chǎn)量約15萬(wàn)噸[3],全國(guó)金鯧魚(yú)年產(chǎn)值將近達(dá)100億元[1];其體形較大,肉質(zhì)細(xì)嫩,無(wú)肌間刺,是加工魚(yú)塊的優(yōu)良材料[4],2005年以來(lái),金鯧魚(yú)的加工制品產(chǎn)量占金鯧魚(yú)總產(chǎn)量的50%～80%[5]。水產(chǎn)品在加工的過(guò)程中將會(huì)產(chǎn)生魚(yú)頭、魚(yú)骨、魚(yú)鰭、魚(yú)皮、魚(yú)鱗、魚(yú)尾、內(nèi)臟等加工副產(chǎn)物,一般占魚(yú)體總重的20%～40%,部分魚(yú)的廢棄物甚至達(dá)到總重的70%[6];如果不加以合理利用,將造成資源的極大浪費(fèi)[7],對(duì)生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生一定污染;加工副產(chǎn)物中蛋白質(zhì)主要分為堿溶性蛋白和堿不溶蛋白[8],其中堿溶性蛋白約占5%～10%[9],以肌原纖維蛋白為主,具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和良好的功能性[8],并具有優(yōu)異的吸水性、乳化性,不易產(chǎn)生沉淀,溶解性好,易吸收的特點(diǎn)[10],目前金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物的加工利用的相關(guān)研究?jī)H見(jiàn)于淑池等[11]從金鯧魚(yú)骨中提取明膠的工藝,曹璇等[12]利用超聲輔助稀堿水解法提取金鯧魚(yú)骨油,未見(jiàn)從金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物中提取堿溶性蛋白的報(bào)道。

在食品工業(yè)中魚(yú)類(lèi)加工副產(chǎn)物最有效的處理方法是酶解法,蛋白酶酶解提取蛋白一直是國(guó)內(nèi)外的研究熱點(diǎn)[13]。酶解得到的蛋白產(chǎn)品雖然有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,但是它的功能性質(zhì)和風(fēng)味略差,特別是有較重的腥味且容易吸潮[14];堿提法具有工藝簡(jiǎn)單、提取率高[15]、生產(chǎn)成本較低等優(yōu)點(diǎn),成為提取堿溶性蛋白的主要方法[16],但高濃度堿溶液提取的蛋白,風(fēng)味會(huì)受影響,蛋白色澤變深,營(yíng)養(yǎng)價(jià)值受損失,純度會(huì)下降[17],基于節(jié)約成本和工業(yè)化生產(chǎn)可行性考慮,本研究采用弱堿法對(duì)堿溶性蛋白質(zhì)進(jìn)行提取,最大限度避免pH過(guò)高的不良反應(yīng),為金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物的加工利用提供參考。

本研究采用堿提法對(duì)金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物中堿溶性蛋白的最佳提取工藝進(jìn)行研究,并對(duì)堿溶性蛋白的性質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，以期提高金鯧魚(yú)加工的附加值,使金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物變廢為寶,同時(shí)保護(hù)環(huán)境,還可為優(yōu)質(zhì)蛋白的來(lái)源提供新途徑。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

新鮮金鯧魚(yú)(800±20 g) 購(gòu)買(mǎi)于三亞市勝利路旺豪超市;甲醇、95%乙醇、冰醋酸、氫氧化鈉 分析純,西隴科學(xué)股份有限公司;乙酸鎂 分析純,天津市大茂化學(xué)試劑廠;硫酸銅、硫酸鉀 分析純,成都金山化學(xué)試劑有限公司;溴酚藍(lán) Aladdin有限公司;十二烷基硫酸鈉、過(guò)硫酸銨、四甲基乙二胺(TEMED)、考馬斯亮藍(lán)R-250、考馬斯亮藍(lán)G-250、Tris-HCl(pH=8.8)緩沖溶液、Tris-HCl(pH=6.8)緩沖溶液(分析純)、彩虹245廣譜蛋白Maker(電泳級(jí)) 北京索萊寶有限公司;丙烯酰胺 電泳級(jí),Aladdin有限公司;鹽酸 優(yōu)級(jí)純,開(kāi)封中天化工有限公司;17種氨基酸混合溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 優(yōu)級(jí)純,中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院。

HWS-26超級(jí)恒溫水浴槽 金壇市盛藍(lán)儀器制造有限公司;PTHW電熱套 鞏義市予華儀器責(zé)任有限公司;SHB-B95循環(huán)水式多用真空泵 鄭州長(zhǎng)城貿(mào)有限公司;ME204E/02電子天平 梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;LT-DBX120F精密可編程熱風(fēng)循環(huán)烘箱 立德泰勀(上海)科學(xué)儀器有限公司;XHF-DY高速分散器 寧波新芝生物股份有限公司;PB-10pH計(jì) 賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司;RS-FS1401多功能粉碎機(jī) 合肥榮事達(dá)小家電有限公司;HLX-12B馬弗爐 洛陽(yáng)恒立窯爐有限公司;Pilot-12E真空冷凍干燥機(jī) 北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司;T6新世紀(jì)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;TC-8FTAITEC型日本試管濃縮儀 北京安捷來(lái)勒科技有限公司;A300氨基酸自動(dòng)分析儀 德國(guó)曼默博爾青島技術(shù)服務(wù)中心;Multifuge X1R高速冷凍離心機(jī) 塞默飛世科技中國(guó)有限公司;PowerPac Basic型電泳電壓儀 美國(guó)Bio-Rad公司;GelDoc-It&ChemiDoc-It型電泳成像系統(tǒng) 德國(guó)Jean分析儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物中堿溶性蛋白提取的工藝流程 金鯧魚(yú)→預(yù)處理(去魚(yú)肉、內(nèi)臟)→加工副產(chǎn)物(魚(yú)頭、魚(yú)骨、魚(yú)鰭)→清洗→60 ℃烘干→粉碎過(guò)60目篩→堿液浸提→冷凍離心(4 ℃、5000×g、20 min)→取上清液→鹽酸調(diào)節(jié)pH沉淀(pH4.6)→第二次冷凍離心→蒸餾水洗至中性→真空冷凍干燥(-40 ℃、10 Pa壓力冷凍干燥8 h)→堿溶性蛋白成品。

1.2.2 金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物基本成分測(cè)定 對(duì)金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物干粉的粗脂肪、粗蛋白、水分、總灰分等基本成分進(jìn)行測(cè)定。粗脂肪測(cè)定按照國(guó)標(biāo)GB 5009.6-2016[18]的索氏提取法;粗蛋白測(cè)定按照國(guó)標(biāo)GB 5009.5-2016[19]的凱氏定氮法;水分測(cè)定按照國(guó)標(biāo)GB 5009.3-2016[20]的直接干燥法;總灰分測(cè)定按照國(guó)標(biāo)GB 5009.4-2016[21]的第一法。

1.2.3 堿溶性蛋白等電點(diǎn)的測(cè)定 通過(guò)堿提酸沉法確定堿溶性蛋白的等電點(diǎn)。具體操作為:金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物干粉以料液比1∶10 g/mL,采用0.3 mol/L NaOH溶液浸提,溫度50 ℃保持60 min;經(jīng)過(guò)冷凍離心(4 ℃、5000×g、20 min)得上清液,用0.05 mol/L HCl溶液,調(diào)整pH到2.6～5.6范圍,使上清液中大多數(shù)蛋白質(zhì)聚集沉淀,再將其于4 ℃條件下靜置30 min后再離心,用蒸餾水水洗至中性,即得到堿溶性蛋白質(zhì),計(jì)算堿溶性蛋白沉淀率(公式1),沉淀率達(dá)到最大時(shí)的pH即為等電點(diǎn)。

堿溶性蛋白沉淀率(%)=沉淀得到的蛋白質(zhì)質(zhì)量/原料中蛋白質(zhì)質(zhì)量×100

式(1)

1.2.4 金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物中堿溶性蛋白提取的單因素及正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 采用NaOH溶液作為提取液,固定酸沉pH4.6,初步固定NaOH濃度為0.3 mol/L、料液比為1∶10 g/mL、提取溫度為50 ℃、提取時(shí)間為60 min等條件,分別展開(kāi)NaOH濃度(0.20、0.25、0.30、0.35、0.40 mol/L)、料液比(1∶8、1∶9、1∶10、1∶11、1∶12 g/mL)、提取時(shí)間(40、50、60、70、80 min)、提取溫度(40、45、50、55、60 ℃)4個(gè)單因素,在單因素的基礎(chǔ)上,設(shè)計(jì)L9(34)正交試驗(yàn),正交表設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。以堿溶性蛋白提取率為單因素及正交試驗(yàn)的評(píng)價(jià)指標(biāo)。根據(jù)公式(2)計(jì)算出堿溶性蛋白質(zhì)的提取率。

式(2)

堿溶性蛋白提取率(%)=堿溶性蛋白質(zhì)量/原料中蛋白質(zhì)質(zhì)量×100

1.3 堿溶性蛋白的性質(zhì)測(cè)定

1.3.1 功能性質(zhì)的測(cè)定 溶解性的測(cè)定參照劉詩(shī)長(zhǎng)[22]的方法;吸水性、吸油性的測(cè)定參照李雪琴等[23]的方法;乳化性的測(cè)定參照張佳蘭[24]的方法;起泡性及起泡穩(wěn)定性的測(cè)定參照王振斌等[25]的方法。

1.3.2 堿溶性蛋白的氨基酸組成分析 參照何云[26]、陳二生等[27]的方法,準(zhǔn)確稱(chēng)取0.500 g堿溶性蛋白凍干粉放置于水解管中,加10 mL的 6 mol/L HCl,充入氮?dú)?封住水解管瓶口,于110 ℃干燥22 h后,取出冷卻至室溫,將水解液轉(zhuǎn)移并用蒸餾水定容至50 mL容量瓶后,取1 mL溶液減壓濃縮后,加1 mL緩沖液混勻后,用0.22 μL濾膜過(guò)濾得濾液后,用氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)量17種氨基酸(色氨酸除外)組成。

1.3.3 堿溶性蛋白的SDS-PAGE實(shí)驗(yàn) 采用mini PROTEAN電泳槽進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳[28-29]。取適當(dāng)濃度的堿溶性蛋白樣品溶液與2×電泳上樣緩沖液按1∶1體積比例混合,于沸水中水浴10 min,8000 r/min離心10 min,上樣量為10 μL,在100 V的電壓下進(jìn)行電泳90 min,電泳結(jié)束后,用考馬斯亮藍(lán)R-250染液進(jìn)行染色90 min后,用脫色液脫去膠片藍(lán)色背景色后,將脫色液換成蒸餾水,電泳結(jié)果采用電泳成像系統(tǒng)拍照。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用Excel軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和作圖,單因素及正交試驗(yàn)的每個(gè)處理重復(fù)3次,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,采用SPSS 17.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析,顯著水平為P<0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物基本成分分析

金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物的基本組成成分測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物的基本組成成分(%)

表2顯示,金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物(干重)粗蛋白含量占28.42%±0.48%,高于羅非魚(yú)下腳料的蛋白質(zhì)含量[30];戴梓茹等[31]測(cè)定金鯧魚(yú)肌肉的粗蛋白含量為19.65%±0.45%,本研究測(cè)定結(jié)果與其有一定區(qū)別,可能是取材部位不同而導(dǎo)致,本研究所測(cè)副產(chǎn)物的粗蛋白含量較高,顯示出金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物具有較高的回收利用價(jià)值。

2.2 堿溶性蛋白等電點(diǎn)的測(cè)定

采用堿提酸沉法提取金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物干粉中的堿溶性蛋白,酸沉pH調(diào)節(jié)在2.6～5.6范圍內(nèi),測(cè)定堿溶性蛋白質(zhì)的沉淀率,沉淀率達(dá)到最高時(shí)的pH即為等電點(diǎn)(pI),測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 酸沉pH對(duì)金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物堿溶性蛋白沉淀率的影響

當(dāng)pH接近等電點(diǎn)時(shí),蛋白結(jié)構(gòu)重新折疊,表面凈電荷幾乎為零,水合作用弱,蛋白質(zhì)容易發(fā)生聚集沉淀[32]。圖1顯示,當(dāng)pH在2.6～5.6范圍內(nèi),隨著pH增大,沉淀率先降低后上升有下降,pH為4.6時(shí),達(dá)到最大峰值88.3%,因而確定堿溶性蛋白最佳酸沉pH為4.6,即pI為4.6。后續(xù)的單因素及正交試驗(yàn)酸沉pH固定為4.6。

2.3 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3.1 NaOH濃度對(duì)金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物中堿溶性蛋白提取率的影響 固定料液比為1∶10 g/mL、提取溫度為50 ℃、提取時(shí)間為60 min等的提取條件,測(cè)定不同NaOH濃度對(duì)堿溶性蛋白提取率的影響,結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖2 NaOH濃度對(duì)金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物中堿溶性蛋白提取率的影響

由圖2可知,在NaOH濃度為0.20～0.30 mol/L時(shí),隨著濃度的增大,堿溶性蛋白的提取率呈現(xiàn)上升趨勢(shì),在NaOH濃度達(dá)到0.30 mol/L時(shí),堿溶性蛋白提取率達(dá)到最高72.95%,之后提取率降低,因此最佳NaOH的提取濃度為0.30 mol/L。

2.3.2 料液比對(duì)金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物中堿溶性蛋白提取率的影響 固定NaOH濃度為0.30 mol/L、提取溫度為50 ℃、提取時(shí)間為60 min等提取條件,測(cè)定不同的料液比對(duì)堿溶性蛋白提取率的影響,結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖3 料液比對(duì)金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物中堿溶性蛋白提取率的影響

由圖3可知,蛋白質(zhì)提取率在料液比為1∶9 g/mL時(shí),達(dá)到最高73.47%;當(dāng)料液比繼續(xù)增大時(shí),堿溶性蛋白的提取率反而略微降低并趨于平緩,可能是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)分子表面形成水化膜,從而使蛋白質(zhì)的溶解度隨提取液溶液體積增大到一定程度后不再增大[33],從而使得蛋白質(zhì)提取率下降。因而選取最適料液比為1∶9 g/mL。

2.3.3 提取時(shí)間對(duì)金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物中堿溶性蛋白提取率的影響 固定NaOH濃度為0.3 mol/L、料液比為1∶9 g/mL、提取溫度為50 ℃的提取條件,測(cè)定不同的提取時(shí)間對(duì)堿溶性蛋白提取率的影響,結(jié)果見(jiàn)圖4。

圖4 提取時(shí)間對(duì)金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物中堿溶性蛋白提取率的影響

圖4顯示,當(dāng)提取時(shí)間達(dá)到70 min時(shí),堿溶性蛋白的提取率最高74.56%,即溶出的蛋白質(zhì)最多,隨著提取時(shí)間繼續(xù)增大,蛋白質(zhì)的提取率趨于平緩并略有下降,表明隨著溶解時(shí)間的延長(zhǎng),蛋白質(zhì)的水解程度越大[34],從而導(dǎo)致的蛋白質(zhì)的提取率有所下降。因而選取提取堿溶性蛋白的最適提取時(shí)間為70 min。

2.3.4 提取溫度對(duì)金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物中堿溶性蛋白提取率的影響 固定NaOH濃度為0.3 mol/L、料液比為1∶9 g/mL、提取時(shí)間為70 min等提取條件,測(cè)定不同提取溫度對(duì)堿溶性蛋白提取率的影響,結(jié)果見(jiàn)圖5。

圖5 提取溫度對(duì)金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物中堿溶性蛋白提取率的影響

圖5顯示,隨著提取溫度的提升,堿溶性蛋白的提取率也不斷提高,當(dāng)提取溫度達(dá)到55 ℃時(shí),堿溶性蛋白的提取率達(dá)到了最高75.97%;提取溫度繼續(xù)增大,蛋白質(zhì)的提取率反而降低,原因是當(dāng)提取溫度繼續(xù)增大時(shí),過(guò)高的溫度會(huì)破壞和影響堿溶性蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)及性質(zhì),從而使堿溶性蛋白提取率降低[26]。因而選取提取堿溶性蛋白的最適提取溫度為55 ℃。

2.4 正交試驗(yàn)結(jié)果

按照正交試驗(yàn)因素水平表1進(jìn)行正交試驗(yàn),測(cè)定堿溶性蛋白的提取率,并進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,結(jié)果見(jiàn)表3。

表3中極差分析可知,影響金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物中堿溶性蛋白的提取的主次因素為C(提取溫度)>A(NaOH濃度)>D(提取時(shí)間)>B(料液比),最佳因素水平的組合為A2B1C1D2,即NaOH濃度為0.3 mol/L、料液比為1∶8 g/mL、提取溫度為50 ℃、提取時(shí)間為70 min。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)可知,該條件下堿溶性蛋白的提取率達(dá)到最大為83.71%,與陳二生等[28]用酸堿法提取鰱魚(yú)下腳料蛋白質(zhì)的提取率(89.21%)接近,顯示出堿提法回收提取水產(chǎn)品加工副產(chǎn)物蛋白的良好應(yīng)用前景;而劉慧清等[13]采用熱水浸提法和堿提法提取羅非魚(yú)魚(yú)頭蛋白的提取率分別為76.02%和89.97%,比較而言,堿提法的提取效率稍高,而熱水浸提法提取率較低,是因?yàn)闊崴岱ㄒ鸫蠓肿拥鞍踪|(zhì)部分降解[13],從而導(dǎo)致提取率較低,說(shuō)明堿提法相比熱水浸提法具有較高的提取率。

表3 堿溶性蛋白提取的正交試驗(yàn)結(jié)果分析表

2.5 堿溶性蛋白的功能性質(zhì)測(cè)定結(jié)果

2.5.1 堿溶性蛋白的溶解度測(cè)定 調(diào)節(jié)pH在4～11范圍內(nèi),測(cè)定堿溶性蛋白質(zhì)的溶解度,結(jié)果見(jiàn)圖6。

圖6 不同pH對(duì)堿溶性蛋白溶解度的影響

圖6顯示,當(dāng)pH在4.0～7.0范圍內(nèi),隨著pH增大,溶解度隨之增大,pH為9.0時(shí),溶解度達(dá)到最大93.33%。

2.5.2 吸油性、吸水性、乳化性、起泡性、起泡穩(wěn)定性的測(cè)定 結(jié)果堿溶性蛋白的吸油性為(5.5±0.4) mL/g,吸水性為(1.85±0.15) mL/g,略高于鮰魚(yú)分離蛋白的測(cè)定結(jié)果[24];乳化性為43.44%±2.27%,略低于羅非魚(yú)下腳料分離蛋白,具有較好的乳化性[22];起泡性和起泡穩(wěn)定性分別為75.33%±5%和37.5%±3.5%,與鳶烏賊分離蛋白[28]起泡性結(jié)果相似,但起泡穩(wěn)定性較差。

2.5.3 氨基酸組成分析 堿溶性蛋白質(zhì)樣品水解后,氨基酸分析測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 堿溶性蛋白的氨基酸組成(g/100 g蛋白質(zhì))

表4是金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物中堿溶性蛋白的17種氨基酸組成,其中色氨酸未測(cè)。必需氨基酸(除色氨酸外)35.99 g/100 g蛋白質(zhì),約占?jí)A溶性蛋白氨基酸的47.84%。必需氨基酸占非必需氨基酸量為91.72%,其中丙氨酸的含量最高,達(dá)14.023 g/100 g蛋白質(zhì),其次是賴(lài)氨酸(11.633 g/100 g蛋白質(zhì))、甘氨酸(9.759 g/100 g蛋白質(zhì))、亮氨酸(8.474 g/100 g蛋白質(zhì))、苯丙氨酸(4.693 g/100 g蛋白質(zhì))等,七種必需氨基酸含量均比較高。組成金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物中堿溶性蛋白的氨基酸(色氨酸除外)總量為75.23 g/100 g蛋白質(zhì),比金鯧魚(yú)鮮樣(20.62 g/100 g蛋白質(zhì))高[31],低于秋刀魚(yú)(93.68 g/100 g蛋白質(zhì))[35],是較優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)。

甘氨酸、天冬氨酸、丙氨酸和谷氨酸能呈現(xiàn)食物特殊鮮味,統(tǒng)稱(chēng)為鮮味氨基酸[36-37]。谷氨酸、天門(mén)冬氨酸呈鮮味,而甘氨酸和丙氨酸則呈甘味[38]。由表4可以看出,堿溶性蛋白鮮味氨基酸含量為(25.751 g/100 g蛋白質(zhì)),占氨基酸總量的34.23%,含量略低于必需氨基酸含量,這說(shuō)明金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物提取中堿溶性蛋白是一種味道較鮮美的蛋白質(zhì)。

2.5.4 SDS-PAGE凝膠電泳 對(duì)金鯧魚(yú)魚(yú)糜、堿溶性蛋白進(jìn)行SDS-PAGE電泳，結(jié)果見(jiàn)圖7。

圖7 堿溶性蛋白的SDS-PAGE電泳圖

圖7顯示,金鯧魚(yú)魚(yú)糜的蛋白質(zhì)分子量很密集,在44.3～245 kDa之間存在很多分子量,其次在17～48 kDa之間也存在六條條帶,說(shuō)明金鯧魚(yú)魚(yú)糜蛋白質(zhì)分子量跨度大[26]。同魚(yú)糜比較,堿溶性蛋白主要有四條條帶,主要分布在44.3～100 kDa之間,其中90 kDa是副肌球蛋白[38],44.3 kDa是肌動(dòng)蛋白[9],其中肌動(dòng)蛋白屬于肌原纖維蛋白的組成之一[39]。

3 結(jié)論

堿提法從金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物中提取堿溶性蛋白的最佳工藝條件為堿提濃度0.3 mol/L、料液比1∶8 g/mL、堿提溫度50 ℃、堿提時(shí)間70 min,堿溶性蛋白提取率達(dá)到83.71%;堿溶性蛋白具有較好的吸油性、吸水性、乳化性和起泡性,pI為4.6,pH為9.0時(shí)溶解度最大;其必需氨基酸(除色氨酸外)和鮮味氨基酸含量均較高;含有與魚(yú)糜蛋白相同的主要組成成分副肌球蛋白和肌動(dòng)蛋白,是一種較優(yōu)質(zhì)蛋白。利用廢棄副產(chǎn)物回收堿溶性蛋白,可以保護(hù)環(huán)境及提高金鯧魚(yú)的產(chǎn)業(yè)附加值,也可以為金鯧魚(yú)加工副產(chǎn)物深加工提供理論參考。