細(xì)胞塊切片免疫組化染色對(duì)惡性胸腔積液分型診斷符合率的影響

河南省榮軍醫(yī)院（453000）許波

胸腔積液中多存在惡性腫瘤細(xì)胞，40%左右大量胸腔積液由惡性腫瘤引起，常見有肺癌、淋巴瘤、乳腺癌等，惡性胸腔積液主要表現(xiàn)為貧血、干咳、胸痛、體重下降[1]。細(xì)胞病理學(xué)在胸腔積液診斷中具有重要作用，良、惡性胸腔積液診斷多采用細(xì)胞涂片檢查，診斷惡性胸腔積液敏感度達(dá)50%～78%[2]。漿膜腔間皮性腫瘤與轉(zhuǎn)移性癌間細(xì)胞形態(tài)相似，細(xì)胞涂片診斷難度大。而區(qū)分間皮性腫瘤與轉(zhuǎn)移性癌具有重要意義，關(guān)系治療方案的確定。本研究以我院胸腔積液患者為研究對(duì)象，行細(xì)胞涂片、細(xì)胞塊切片、免疫組化染色檢測(cè)，觀察對(duì)惡性胸腔積液分型診斷符合率的影響，報(bào)告如下。

1 資料及方法

1.1 一般資料 選取2017年3月～2019年5月我院86例胸腔積液患者，男45例，女41例；年齡21～77歲，平均（49.12±12.57）歲。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn) ①納入標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)臨床表現(xiàn)、影像學(xué)檢查診斷傾向惡性；標(biāo)本為胸腔積液；患者簽署知情同意書。②排除標(biāo)準(zhǔn)：其他部位惡性腫瘤。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本制備 抽取胸腔積液10ml，分裝在3～5個(gè)管，離心（3000r/min）10min取部分沉渣，制備蘇木精-伊紅（HE）涂片。將剩余沉渣用試鏡紙包裹，用10%福爾馬林固定液固定，經(jīng)常規(guī)處理，制備成細(xì)胞蠟塊，連續(xù)細(xì)胞切片，厚3～4μm。對(duì)細(xì)胞涂片、細(xì)胞塊切片進(jìn)行HE染色、免疫組化染色。

1.3.2 HE染色結(jié)果 由2位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)生觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)。根據(jù)細(xì)胞形態(tài)、黏附性、核不典型性分為惡性、良性、無法肯定，良性：存在反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)溫和、彌散良好、存在典型性；惡性：惡性間皮瘤細(xì)胞、轉(zhuǎn)移性腺癌，細(xì)胞成團(tuán)，細(xì)胞形態(tài)嚴(yán)重不溫和，核存在重度不典型性；無法肯定：細(xì)胞彌散，核存在中度或重度不典型性，或細(xì)胞成團(tuán)，核存在中度或輕度不典型性。

1.3.3 免疫組化染色結(jié)果 采用免疫組織化學(xué)（SP）法，二氨基聯(lián)苯胺顯色試劑購自上海雅吉生物科技有限公司，Maxvision試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。抗體為CD15、CK7、BerEP4、MOC-31、CEA、TTF-1、WT-1、Calretinin、CK5/6、Desmin。染色過程嚴(yán)格按照說明書操作。用磷酸緩沖鹽溶液（PBS）代替一抗設(shè)置空白對(duì)照，染色切片中選擇陽性組織染色設(shè)立陽性對(duì)照。支持間皮細(xì)胞的免疫組化指標(biāo)：WT-1、Calretinin、CK5/6、Desmin；支持肺腺癌免疫組化指標(biāo)：CD15、CK7、BerEP4、MOC-31、CEA、TTF-1。判定標(biāo)準(zhǔn)：陽性：BerEP4、CK7、MOC-31、CEA、Desmin、CK5/6染色呈棕黃色細(xì)胞質(zhì)，WT-1、TTF-1染色細(xì)胞核呈棕黃色，Calretinin染色細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核均顯色，CD15細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜染色。

1.4 觀察指標(biāo) ①對(duì)比細(xì)胞涂片、細(xì)胞塊切片的HE染色、免疫組化染色結(jié)果。②惡性胸腔積液分型診斷符合率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS22.0分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料用n（%）表示，χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)胞涂片、細(xì)胞塊切片的HE染色、免疫組化染色結(jié)果 細(xì)胞涂片、細(xì)胞塊切片的HE染色結(jié)果對(duì)比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），細(xì)胞塊切片免疫組化染色診斷胸腔積液惡性率52.33%高于細(xì)胞涂片免疫組化染色的37.21%（P＜0.05），見附表1、2。

2.2 惡性胸腔積液分型診斷符合率 確診的45例惡性胸腔積液患者中，細(xì)胞塊切片免疫組化確診惡性44例，誤診1例，診斷符合率為97.78%（44/45），其中肺腺癌36例、肺鱗癌4例、惡性間皮瘤3例，均經(jīng)肺、胸膜穿刺活檢組織學(xué)證實(shí)，淋巴瘤1例經(jīng)活檢確診為彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤，誤診1例，經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診為足跟部惡性黑色素瘤伴胸腔轉(zhuǎn)移。肺腺癌細(xì)胞對(duì)CD15、CK7、BerEP4、MOC-31、CEA、TTF-1抗體陽性表達(dá)率高，惡性間皮瘤細(xì)胞對(duì)WT-1、Calretinin、CK5/6、Desmin抗體陽性表達(dá)率高；細(xì)胞塊切片免疫組化染色檢測(cè)惡性胸腔積液分型診斷符合率高于細(xì)胞涂片檢測(cè)，見附表3。

3 討論

正常人胸膜腔內(nèi)存在5～15ml液體，起潤滑作用。當(dāng)胸部損傷、胸膜通透性增加、壁層胸膜淋巴回流障礙時(shí)，可引起胸腔積液。滲出性胸腔積液多與胸膜惡性腫瘤、淋巴細(xì)胞異常等有關(guān)[3]。因此，需鑒別胸腔積液的良惡性。

附表1 HE染色結(jié)果[n(%)，n=86]

附表2 免疫組化染色結(jié)果[n(%)，n=86]

附表3 惡性胸腔積液分型診斷符合率

胸腔積液細(xì)胞學(xué)檢查標(biāo)本采集方便，制片快速，是病理診斷的常用方法。細(xì)胞涂片HE染色觀察對(duì)積液細(xì)胞性質(zhì)判斷具有重要價(jià)值，但胸腔積液中細(xì)胞成分復(fù)雜，各種細(xì)胞形態(tài)類似，僅憑細(xì)胞涂片可能無法做出準(zhǔn)確診斷，特別是惡性間皮瘤與轉(zhuǎn)移性肺腺癌細(xì)胞形態(tài)非常相似[4][5]。部分病理醫(yī)生僅通過觀察細(xì)胞涂片HE染色，鑒別難度大，易出現(xiàn)誤診。而惡性間皮瘤與肺腺癌鑒別對(duì)指導(dǎo)臨床治療具有重要作用。此外，除肺腺癌外，肺鱗癌、淋巴瘤、其他腺癌、惡性黑色素瘤等也可引起胸腔積液，鑒別難度加大，需特殊染色才可能確定轉(zhuǎn)移性腫瘤來源[6]。

黃其文等[7]研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞塊切片是診斷惡性胸腔積液的有效方法，聯(lián)合免疫組化染色可為鑒別診斷肺腺癌提供依據(jù)。本研究對(duì)86例胸腔積液患者進(jìn)行細(xì)胞涂片與細(xì)胞塊切片檢查，均行HE染色、SP染色，結(jié)果顯示，細(xì)胞涂片、細(xì)胞塊切片的HE染色結(jié)果對(duì)比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），細(xì)胞塊切片免疫組化染色診斷胸腔積液惡性率52.33%高于細(xì)胞涂片免疫組化染色的37.21%（P＜0.05），說明細(xì)胞塊切片免疫組化染色診斷惡性胸腔積液準(zhǔn)確率高。本研究中細(xì)胞塊分布均勻，細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)良好，而細(xì)胞涂片分布不均勻，可能出現(xiàn)重疊，導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)模糊，結(jié)構(gòu)不清晰。細(xì)胞涂片免疫組化染色有助于胸腔積液良惡性鑒別，但涂片細(xì)胞數(shù)量不等、厚薄不均，易出現(xiàn)高背景著色，造成誤診，且陽性表達(dá)細(xì)胞缺乏對(duì)應(yīng)性，影響判讀。細(xì)胞涂片免疫組化染色結(jié)果中15例無法確定良惡性。而細(xì)胞塊切片免疫組化染色細(xì)胞分布均勻，可準(zhǔn)確判讀，且包埋細(xì)胞塊能永久性保留標(biāo)本，以待日后回顧研究。

本研究還顯示，細(xì)胞塊切片免疫組化染色檢測(cè)惡性胸腔積液分型診斷符合率高于細(xì)胞涂片檢測(cè)，肺腺癌細(xì)胞對(duì)CD15、CK7、BerEP4、MOC-31、CEA、TTF-1抗體陽性表達(dá)率高，惡性間皮瘤細(xì)胞對(duì)WT-1、Calretinin、CK5/6、Desmin抗體陽性表達(dá)率高，可見，細(xì)胞塊免疫組化染色有助于判定漿膜腔積液細(xì)胞類型及性質(zhì)，是理想的細(xì)胞病理檢測(cè)方法，可能與本研究綜合多種抗體染色結(jié)果分析，消除各抗體表達(dá)差異，避免交叉反應(yīng)，從而提高敏感性有關(guān)。且細(xì)胞塊制作簡(jiǎn)單，易保存，免疫組化SP檢測(cè)簡(jiǎn)單方便，可在基層醫(yī)院廣泛開展應(yīng)用。

綜上所述，細(xì)胞塊免疫組化染色診斷惡性胸腔積液準(zhǔn)確率高，有助于判定漿膜腔積液細(xì)胞類型及性質(zhì)，是理想的細(xì)胞病理檢測(cè)方法。