淺談腐敗梭菌病診斷及防治措施

賈鋒軍

（山東省臨朐縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局柳山畜牧獸醫(yī)站 262616）

腐敗梭菌（Clostridium septicum）舊稱為腐敗桿菌（Bacillus septicus）、腐敗弧菌（Vibrio septicus），是引起動(dòng)物和人惡性水腫（Malignant edematis maligni）的主要病原菌，故也曾稱為惡性水腫桿菌（Bacillus edema）[2]。是巴斯德在1877年培養(yǎng)的第一個(gè)厭氧致病微生物[1]。腐敗梭菌是第一個(gè)分離到的致病性厭氧菌，是人和動(dòng)物氣性壞疽的主要病原之一[3]。在家畜中由本菌感染引起的牛的惡性水腫和羊的快疫占有重要地位[3]。

1 腐敗梭菌在我國(guó)的流行情況

1953 年我國(guó)正式確診羊快疫的存在[3]，自此之后腐敗梭菌給我國(guó)畜牧業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。2005 年10 月山東省某規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)死亡育成波爾山羊50 余只[4]，2008 年海晏縣三角城鎮(zhèn)三角城村9 戶牧民飼養(yǎng)的2430 只綿羊中死亡羊330 只[5]，2009～2010 年石河子某規(guī)?；膛?chǎng)先后死亡11 頭高產(chǎn)奶牛[6]，2011 年4 月甘肅省永靖縣三塬鎮(zhèn)出現(xiàn)巴氏桿菌和腐敗梭菌混合感染病例[7]，同年11 月青海省大通縣某牛場(chǎng)放牧牦牛群死亡牦牛9 頭[8]，2012 年2 月山東省即墨市腐敗梭菌感染發(fā)病山羊12 只綿羊20 只[9]，青島市城陽(yáng)區(qū)死亡小羊4 只大羊1只[10]，2013 年重慶大足區(qū)石馬鎮(zhèn)某羊場(chǎng)出現(xiàn)巴氏桿菌與腐敗梭菌混合感染死亡大足黑山羊22 只[11]，2013 年11 月涇源縣涇河源鎮(zhèn)北營(yíng)村赫某飼養(yǎng)的20 只羊死亡羔羊4 只[12]，2014 年3 月新疆伊吾縣鹽池鄉(xiāng)王某飼養(yǎng)的250 只綿羊死亡羊6 只[13]，同年4 月廣西壯族自治區(qū)資源縣資源鎮(zhèn)謝某飼養(yǎng)的山羊死亡30余只[14]，8 月山東省東營(yíng)市某養(yǎng)殖戶發(fā)生羊腐敗梭菌病[15]，2014 年9 月甘肅省武威市涼州區(qū)腐敗梭菌與鏈球菌混合感染死亡藏系羊5 只[16]，同年10 月廣西壯族自治區(qū)興賓區(qū)良江鎮(zhèn)山羊養(yǎng)殖戶石某山羊死亡17 只[17]，2015 年1 月廣西宜州市龍頭鄉(xiāng)德惠村上水屯某養(yǎng)殖戶山羊死亡6 只[18]，同期青海省海北州祁連縣默勒鎮(zhèn)扎隆鄉(xiāng)死亡羊40 只[19]，2015 年4 月甘肅省臨洮縣某養(yǎng)殖場(chǎng)綿羊死亡13 只[20]，同期河北省遷安市彭店子鄉(xiāng)某養(yǎng)殖戶小尾寒羊死亡6 只[21]，2016 年3 月內(nèi)蒙古赤峰市克什克騰旗達(dá)來(lái)諾日鎮(zhèn)某養(yǎng)殖戶綿羊死亡11 只[22]，同期湖南省新晃縣原方家屯鄉(xiāng)方家屯蔡某山羊死亡8 只[23]，2016 年10 月武漢市黃陂區(qū)某養(yǎng)殖場(chǎng)育成羊死亡11 只[24]，2017 年內(nèi)蒙古科右前旗俄體鎮(zhèn)三合村陳牧仁家綿羊死亡1 只[25]。近10 年的報(bào)道表明，腐敗梭菌在我國(guó)各地都有暴發(fā)，給我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)了巨大危害。

2 腐敗梭菌概況

2.1 腐敗梭菌主要生物學(xué)特性

腐敗梭菌為革蘭氏陽(yáng)性厭氧菌，可產(chǎn)生芽孢[26]，有鞭毛，無(wú)莢膜，芽孢卵圓，位于中央或偏端，芽孢橫徑較菌體寬[27]。本菌專性厭氧，葡萄糖鮮血瓊脂平板37℃厭氧培養(yǎng)48h 形成灰白色或半透明、邊緣不整微微隆起的菌落形態(tài)，可以發(fā)酵葡萄糖、果糖、乳糖、半乳糖、麥芽糖、水楊素、甘露糖，不發(fā)酵蔗糖，可液化明膠[28]。Robertson，Handerson，Moussa，Shirasaka 等報(bào)道本菌存在不同血清型，楊學(xué)禮也證實(shí)我國(guó)分離株也存在不同血清型。本菌有O 抗原和H 抗原，Handerson 和楊學(xué)禮等報(bào)道不同型的“O”抗原菌株之間缺乏有效交叉免疫，可以看出，對(duì)于本菌的分型，尤其是按“O”抗原進(jìn)行分型，具有重要意義[3]。本菌用一般消毒藥物短時(shí)間可以殺死繁殖體，芽孢在腐敗尸體中可以存活3 個(gè)月，土壤中存活20～25年，煮沸2～10min 或0.2%氯化汞，1.05%～1.2%甲醛處理10min，能將本菌芽孢殺死[27]。

2.2 腐敗梭菌致病性

腐敗梭菌可以產(chǎn)生α、β、γ、δ 4 種外毒素，其中α 為主要致死性毒力因子[29,30]，具有壞死、溶血和致死作用[31]。α 毒素分子量大小為46～48kDa，在其C 末端經(jīng)水解后形成活化形式，大小為41～44kDa[32,33]，β 毒素為脫氧核糖核酸酶，可殺白細(xì)胞，γ 和δ 毒素分別具有透明質(zhì)酸酶和溶血素活性。這些毒素可增強(qiáng)血管通透性，引發(fā)肌肉壞死[34]。

致病范圍包括人、馬、牛、綿羊、豬、犬、貓、雞等。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物以豚鼠和小鼠最易感。經(jīng)創(chuàng)傷感染可致人的氣性壞疽，馬、牛、羊、豬等家畜的惡性水腫及雞氣性水腫。消化道內(nèi)源性感染致牛、綿羊及山羊快疫[2]。

2.3 腐敗梭菌感染臨床癥狀及剖檢癥狀

腐敗梭菌引起的疾病傳播速度快、發(fā)病急，死亡率高。以突然發(fā)病死亡、食欲減退、體溫升高為特征，并伴有傷口或者腹部膨大、磨牙、疝痛、口鼻等部位流出泡沫樣血色液體，最為典型的病理變化為局部膨大水腫甚至糜爛壞死、腹腔積液、有氣泡及出血點(diǎn)[34]。

綿羊山羊常常表現(xiàn)出突然發(fā)病，不治而亡，病程稍長(zhǎng)者表現(xiàn)出離群獨(dú)臥，不愿走動(dòng)，運(yùn)動(dòng)失調(diào)等癥狀。病羊出現(xiàn)腹部膨大，胃腸臌氣，有疼痛感，有時(shí)還會(huì)出現(xiàn)磨牙，口鼻流出血泡沫狀液體，排糞困難等癥狀。體溫升高，最高可達(dá)39～40℃，數(shù)小時(shí)之內(nèi)死亡[35,36]。

剖檢病死綿羊可見(jiàn)多數(shù)羊肝臟腫大破裂，腹腔和心包積液，有凝血塊，皺胃、十二指腸及幽門出血并伴有壞死灶，膽囊腫脹，心肌變性，左內(nèi)膜會(huì)有點(diǎn)狀出血[34]。剖檢山羊可見(jiàn)病死羊腹部腫脹，可視黏膜發(fā)紺，眼球外突，肛門外翻。胸腔和心包積液，心內(nèi)膜有出血點(diǎn)，肝腫大質(zhì)脆并伴有出血點(diǎn)，腎臟也有點(diǎn)狀出血，氣管出血并伴有泡沫。肺淤血呈現(xiàn)暗紅色。皺胃充血腫脹并伴有出血，小腸臌氣，黏膜充血出血、脫落、壞死，呈現(xiàn)“紅腸樣”[37]。

3 腐敗梭菌的實(shí)驗(yàn)室診斷

病畜死后由腸道侵入其他部位，注意區(qū)別診斷。對(duì)惡性水腫，水腫液或組織直接涂片鏡檢無(wú)多大診斷意義；對(duì)羊快疫，肝臟被膜觸片染色鏡檢，若發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)絲狀細(xì)菌，則具有診斷價(jià)值，確診需要做細(xì)菌的分離鑒定[2]。

3.1 腐敗梭菌的分離培養(yǎng)、鏡檢與生化鑒定

無(wú)菌操作取心、血、肝、脾、腸系膜淋巴結(jié)等臟器接種于厭氣肉肝湯，37℃培養(yǎng)24h，厭氣肉肝湯中可產(chǎn)生氣體[38]；將病料接種于葡萄糖鮮血瓊脂平板，37℃厭氧培養(yǎng)48h，形成灰白色或半透明、邊緣不整微微隆起的菌落形態(tài)[28]，革蘭氏染色鏡檢可見(jiàn)革蘭氏陽(yáng)性，兩端鈍圓，單在或者2～3 個(gè)相連的粗大桿菌同時(shí)還可發(fā)現(xiàn)無(wú)關(guān)節(jié)長(zhǎng)絲狀菌體[39,40]。生化鑒定可以發(fā)酵葡萄糖、果糖、乳糖、半乳糖、麥芽糖、水楊素、甘露糖，不發(fā)酵蔗糖，可液化明膠[28]。

3.2 腐敗梭菌觸片檢查

無(wú)菌取病畜肝臟，用病畜肝臟制作被膜觸片，除見(jiàn)到兩端鈍圓、單個(gè)或短鏈狀的粗大菌體外，還可以觀察到無(wú)關(guān)節(jié)的長(zhǎng)絲狀菌體鏈，其他臟器也可以觀察到病原[41]。

3.3 腐敗梭菌的PCR 鑒定

腐敗梭菌的α 毒素（溶血素）基因，有270bp 片段在24種細(xì)菌溶血素中無(wú)同源性（包括親緣關(guān)系很近的氣腫疽梭菌和其他梭菌），可以用PCR 快速做出準(zhǔn)確診斷，這是腐敗梭菌于氣腫疽梭菌鑒別診斷的唯一鑒別方法[2]，所以獲得病料模板進(jìn)行PCR 擴(kuò)增α 毒素的特異性序列可以快速診斷和鑒定腐敗梭菌[42]。李生慶等人建立了一種基于α 毒素的PCR 診斷[43]；彭小兵等人成功建立二重PCR 方法鑒別氣腫疽梭菌和腐敗梭菌[44]。

3.4 腐敗梭菌動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

將分離病原菌對(duì)豚鼠進(jìn)行肌肉感染可見(jiàn)注射部位肌肉呈現(xiàn)鮮紅色，有大量血色水腫液并產(chǎn)生許多氣泡。參見(jiàn)附圖。

4 腐敗梭菌的防治

4.1 腐敗梭菌病的預(yù)防

（1）落實(shí)好疫苗接種工作[45]。免疫接種是預(yù)防該病的最為有效方法之一，目前國(guó)內(nèi)主要是用羊快疫、黑疫二聯(lián)滅活苗、羊快疫、猝疽、羊腸毒血癥三聯(lián)滅活疫苗、羊梭菌病多聯(lián)干粉滅活苗等[46]，或者羊快疫、羊猝狙、羊腸毒血癥、羔羊痢疾、黑疫五聯(lián)苗[45]。

（2）加強(qiáng)飼養(yǎng)管理[47,48]。禁喂冰冷食物，減少胃腸刺激引發(fā)此病[48]。適時(shí)添加精料，提高機(jī)體免疫力。加強(qiáng)環(huán)境衛(wèi)生清掃，按時(shí)消毒殺菌[49]。

（3）發(fā)現(xiàn)病死羊時(shí)及時(shí)無(wú)害化處理病死羊，嚴(yán)禁剝皮利用，對(duì)健康動(dòng)物進(jìn)行隔離[50,51]。監(jiān)測(cè)羊群體溫并及時(shí)隔離體溫異常羊只[52]。

（4）注意易感羊群的緊急防控。同群中的易感羊只要做好緊急接種疫苗[53]。

4.2 腐敗梭菌病的治療

（1）抗菌。對(duì)病程稍長(zhǎng)的病羊可以進(jìn)行抗生素治療[48]?？蛇x用磺胺類、青霉素、頭孢類抗生素（頭孢唑啉、頭孢呋辛鈉、頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢拉定和頭孢哌酮）等藥物進(jìn)行治療[49]。

（2）補(bǔ)充體液。強(qiáng)心、補(bǔ)液、補(bǔ)堿，緩解代謝性酸中毒。可選用糖鹽水和5%碳酸氫鈉混合靜脈注射，20%石灰乳內(nèi)服[54]。

（3）血清治療?？蛇x用羊速清、頭孢和干擾素3 者混用[48]。

（4）中藥預(yù)防。金銀花20g，連翹20g，淡豆豉15g，桔梗15g，荊芥15g，竹葉20g，薄荷10g，牛蒡子15g，蘆根30g，甘草5g，水煎取汁，內(nèi)服[51]。

5 小結(jié)和展望

腐敗梭菌病屬于常發(fā)性疾病，危害較大，常造成家畜死亡，嚴(yán)重危害養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)利益。本文統(tǒng)計(jì)了國(guó)內(nèi)近10 多年的發(fā)病報(bào)道，就腐敗梭菌的生物學(xué)特性、致病性、臨床癥狀及剖檢癥狀，實(shí)驗(yàn)室診斷方法及防治等方面進(jìn)行淺析，對(duì)腐敗梭菌病有了一個(gè)較為系統(tǒng)的認(rèn)識(shí)。目前國(guó)內(nèi)大多使用聯(lián)苗，所用培養(yǎng)基復(fù)雜，中國(guó)獸藥監(jiān)察所所制培養(yǎng)基可以簡(jiǎn)化工藝成本，取得較好效果，而在國(guó)外已經(jīng)有α 類毒素疫苗出現(xiàn)[54]。針對(duì)腐敗梭菌的研究，國(guó)內(nèi)還未得到應(yīng)有的重視，青海畜牧獸醫(yī)研究所對(duì)腐敗梭菌的PCR 鑒定、培養(yǎng)、產(chǎn)毒等方面進(jìn)行了研究，中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所對(duì)腐敗梭菌在PCR 鑒定、血清學(xué)分型、疫苗及α 毒素分子克隆等方面進(jìn)行了較為深入的研究，河北師范大學(xué)對(duì)腐敗梭菌α 毒素基因克隆及表達(dá)也有研究[55-60]。但針對(duì)腐敗梭菌病檢測(cè)的快速檢測(cè)方法尚未開(kāi)發(fā)，ELISA 試劑盒及膠體金試劑條等快速檢測(cè)診斷方法也急需建立。