松郁安神方對(duì)對(duì)氯苯丙氨酸致失眠大鼠血漿中前列腺素D₂的影響

曾雪愛 周春權(quán) 張一帆

摘要?目的：觀察松郁安神方對(duì)對(duì)氯苯丙氨酸（Para-chlorophenylalanine，PCPA）致失眠模型大鼠血漿中內(nèi)源性睡眠促進(jìn)物質(zhì)前列腺素D2（Prostaglandin?D2，PGD2）的影響。方法：采用腹腔注射對(duì)氯苯丙氨酸（PCPA）建立失眠大鼠模型，用高、中、低劑量松郁安神方進(jìn)行治療，通過酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定大鼠血漿中前列腺素D2（PGD2）的含量。結(jié)果：中、高劑量松郁安神方可提高PCPA失眠模型大鼠血漿中PGD2含量（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論：松郁安神方改善睡眠的機(jī)制之一可能是通過調(diào)節(jié)內(nèi)源性睡眠促進(jìn)物質(zhì)PGD2發(fā)揮作用。

關(guān)鍵詞?失眠;內(nèi)源性睡眠促進(jìn)物質(zhì);前列腺素D2;松郁安神方

Effect?of?Songyu?Anshen?Formula?on?Levels?of?Plasma?Prostaglandin?D2?（PGD2?）?in?Insomnia?Rats?Induced?by?Para-chlorophenylalanine（PCPA）

ZENG?Xueai，ZHOU?Chunquan，ZHANG?Yifan，WANG?Xiufeng，ZHANG?Yu，HUANG?Junshan

（Fujian?Academy?of?Traditional?Chinese?Medicine，F(xiàn)uzhou?350003，China）

Abstract?Objective：To?observe?the?effect?of?Songyu?Anshen?Formula?on?the?endogenous?sleep-promoting?substance?PGD2?in?the?plasma?of?insomnia?rats?induced?by?PCPA.Methods：The?rat?model?of?insomnia?was?established?by?intraperitoneal?injection?of?PCPA.?The?rats?were?given?Songyu?Anshen?formula?intragastrically，?and?the?content?of?PGD2?in?plasma?was?determined?by?enzyme-linked?immunosorbent?assay?（ELISA）.?Results：The?content?of?PGD2?in?the?plasma?of?PCPA?could?be?increased?by?the?middle?and?high?dose?of?Songyu?Anshen?formula?（P<0.05?or?P<0.01?）?.?Conclusion：One?of?the?mechanisms?of?Songyu?Anshen?in?improving?sleep?quality?may?be?through?the?regulation?of?the?endogenous?sleep-promoting?substance?PGD2.

Keywords?Insomnia;?Endogenous?sleep-promoting?substances;?Prostaglandin?D2;?Songyu?Anshen?formula

中圖分類號(hào)：R256.23文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.2095-7130.2020.01.003

睡眠和覺醒的發(fā)生及轉(zhuǎn)換可能是通過腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)和內(nèi)源性睡眠促進(jìn)物質(zhì)共同作用調(diào)節(jié)的。其中前列腺素D2（PGD2）和腺苷是最強(qiáng)效的內(nèi)源性睡眠促進(jìn)物質(zhì)，參與生理性睡眠覺醒調(diào)節(jié)[1]。松郁安神方根據(jù)疏肝安神法，以甘松、郁金、玫瑰花為君藥，配伍酸棗仁、首烏藤、丹參、生龍骨、珍珠母、合歡皮組方，具有重鎮(zhèn)安神之功效，在臨床上治療失眠療效顯著[2-3]。本試驗(yàn)通過觀察松郁安神方對(duì)內(nèi)源性睡眠促進(jìn)物質(zhì)PGD2的影響，探討松郁安神方改善睡眠的作用機(jī)制。

1?材料

1.1?試驗(yàn)動(dòng)物?清潔級(jí)SD大鼠36只，雄性，體質(zhì)量（230±10）g，購(gòu)自上海斯萊克試驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司（生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（滬）2017-0005;合格證編號(hào)：20170005004461）。動(dòng)物置于安靜、恒溫、恒濕、12?h/12?h明暗光照環(huán)境中飼養(yǎng)，每天給予充足食物和水。試驗(yàn)前采用隨機(jī)數(shù)字法將大鼠分為6組，分別為空白對(duì)照組、PCPA失眠組、中藥高、中、低劑量組、酸棗仁湯陽性對(duì)照組，每組6只。

1.2?主要試劑與儀器?Rat?PGD2?ELISA?Kit（上海酶聯(lián)生物科技有限公司，批號(hào)：Dec2018）;對(duì)氯苯丙氨酸（PCPA）（Sigma公司，批號(hào)：SHBH7873）;中藥飲片（福建鷺燕藥業(yè)股份有限公司）;酶標(biāo)儀（美國(guó)BioTek，800TS）。

2?方法

2.1?PCPA失眠模型建立?參考文獻(xiàn)[4]方法，于臨用前將PCPA溶于弱堿性生理鹽水，配成混懸液，大鼠腹腔注射PCPA（300?mg/kg），1次/d，連續(xù)2?d。若大鼠晝夜節(jié)律消失，白天活動(dòng)增多，睡眠減少甚至消失，飲水量增加，表明造模成功。

2.2?給藥方法?PCPA造模第1天開始灌胃中藥。松郁安神方組成：甘松10?g、郁金15?g、玫瑰花10?g、丹參15?g、酸棗仁15?g、首烏藤30?g、珍珠母30?g、生龍骨30?g、合歡皮15?g，藥物經(jīng)煎煮及過濾濃縮至3.4?g/mL備用。中藥低、中、高劑量組分別按8.5?g/kg、17?g/kg、34?g/kg體質(zhì)量灌胃給藥，陽性對(duì)照組灌胃酸棗仁湯（14.4?g/kg），空白對(duì)照組和失眠模型組均灌胃同等體積蒸餾水，1次/d，共7?d。

2.3?酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定?試驗(yàn)結(jié)束后，在麻醉狀態(tài)下腹主動(dòng)脈取血，置于EDTA抗凝管中，靜置30?min后，2500×g離心10?min，取上層血漿進(jìn)行檢測(cè)。PGD2含量檢測(cè)方法依據(jù)ELISA檢測(cè)試劑盒操作說明進(jìn)行。

2.4?統(tǒng)計(jì)學(xué)方法?采用SPSS?16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以（±s）進(jìn)行描述，組間比較采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3?結(jié)果

3.1?動(dòng)物一般狀態(tài)觀察?空白對(duì)照組大鼠精神狀態(tài)良好，毛發(fā)有光澤，晝夜節(jié)律規(guī)律，每天體質(zhì)量逐漸增加。注射PCPA后，大鼠晝夜節(jié)律消失，白天活動(dòng)增多，易激惹，毛發(fā)豎起且無光澤，飲水明顯增多，體質(zhì)量下降。不同劑量松郁安神方干預(yù)后，中、高劑量組大鼠精神狀態(tài)、反應(yīng)情況、體質(zhì)量等一般狀態(tài)較失眠模型組明顯改善。

3.2?松郁安神方對(duì)PCPA失眠模型大鼠血漿中PGD2含量的影響?如圖1所示，與空白對(duì)照組比較，PCPA失眠組大鼠血漿中PGD2含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），給予不同劑量松郁安神方治療7?d后，PGD2含量均有所增加，與PCPA失眠組比較，高、中劑量松郁安神方組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01），與酸棗仁湯陽性對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中，標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果顯示吸光度與PGD2濃度具有良好的線性關(guān)系（R2=0.998?6）。見圖2。

3?討論

失眠的病因病機(jī)復(fù)雜，五臟功能失調(diào)皆可導(dǎo)致失眠，其中以肝為首。結(jié)合古代醫(yī)書和前人經(jīng)驗(yàn)，我們認(rèn)為失眠病機(jī)應(yīng)以肝郁為主。我們前期臨床觀察也發(fā)現(xiàn)肝郁化火型失眠占多數(shù)，運(yùn)用松郁安神方治療在臨床中取得明顯療效[2-3]。

PGD2是目前公認(rèn)的內(nèi)源性睡眠促進(jìn)物質(zhì)[1]，已有研究發(fā)現(xiàn)，在睡眠相關(guān)腦區(qū)注射PGD2，能增加大鼠非快動(dòng)眼和快動(dòng)眼期睡眠，且睡眠性質(zhì)與生理性睡眠相似[5]。本研究觀察到PCPA致失眠后，大鼠血漿中PGD2含量明顯降低，給予不同劑量松郁安神方治療后，血漿中PGD2含量均有不同程度增加，中、高劑量松郁安神方組與失眠模型組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明松郁安神方可調(diào)節(jié)失眠大鼠血漿中PGD2含量，這一結(jié)果提示，松郁安神方改善失眠的作用機(jī)制可能與提高失眠大鼠血漿中內(nèi)源性睡眠促進(jìn)物質(zhì)PGD2含量有關(guān)。本試驗(yàn)結(jié)果也提示，血漿中內(nèi)源性睡眠促進(jìn)物質(zhì)的變化可以在一定程度上反映大鼠的睡眠狀況，可作為臨床診斷失眠的輔助指標(biāo)。

參考文獻(xiàn)

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