膠體金法和被動顆粒凝集法在兒童肺炎支原體感染檢測中的應(yīng)用比較*

宋秦偉，葛夢蕾，王婭琳，崔菲菲，馬麗娟△

(首都兒科研究所附屬兒童醫(yī)院：1.檢驗科；2.呼吸科，北京 100020)

肺炎支原體(MP)是我國兒童和成人社區(qū)獲得性肺炎(CAP)的重要病原體之一，占兒童CAP的10%～30%，MP流行時CAP人數(shù)可增加3～5倍[1-2]。兒童感染MP后常表現(xiàn)為呼吸道癥狀，可有亞臨床或輕癥感染，再感染常見，可合并其他病原體感染。近年來，由MP感染引起的重癥和難治性肺炎患兒越來越多[3-4]。大環(huán)內(nèi)酯類耐藥MP的出現(xiàn)及其90%～100%的耐藥率[5-6]，給臨床的診治提出了嚴峻挑戰(zhàn)。因此，早期診斷MP感染對及時治療有重要意義，而實驗室病原學診斷是MP感染診斷的關(guān)鍵，其中血清學抗體檢測是常用方法。本研究對臨床常用的膠體金法和被動顆粒凝集法在兒童中快速診斷MP近期或現(xiàn)癥感染的臨床價值進行了比較和評估。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年1-7月于本院呼吸科住院治療且經(jīng)臨床診斷為MP呼吸道感染患兒265例，其中男125例，女140例，平均年齡(6.04±3.51)歲。依據(jù)第8版《諸福堂實用兒科學》診斷標準，臨床表現(xiàn)主要為呼吸系統(tǒng)疾病，以咳嗽、咳痰、氣喘和發(fā)熱癥狀為主，單次血清總抗體滴度≥1∶160或急性期/恢復期雙份血清總抗體滴度4倍及以上升高。

1.2方法 收集265例患兒入院后初次采集靜脈血分離的血清，分裝后于-80 ℃凍存。

1.2.1被動顆粒凝集法 采用日本富士瑞必歐株式會社(FUJIEBIO INC)生產(chǎn)的 MP 抗體檢測試劑盒[商品名:賽樂迪亞-麥可Ⅱ(SERODIA-MYCOⅡ)]檢測血清中的MP總抗體，即IgM、IgG、IgA等所有亞型的MP抗體。操作嚴格按試劑盒說明書進行，同時設(shè)立陰性和陽性對照孔，結(jié)果以滴度表示(標本稀釋倍數(shù)范圍：1∶40～1∶1 280)，臨界值為1∶40。

1.2.2膠體金法 采用珠海麗珠試劑股份有限公司生產(chǎn)的MP-IgM檢測試劑盒檢測血清中的MP-IgM抗體，以出現(xiàn)陽性檢測線為陽性，使用珠海麗珠膠體金試紙分析儀判讀結(jié)果。

1.3統(tǒng)計學處理 采用SPSS18.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以例數(shù)或百分比表示，采用配對χ2檢驗進行比較，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1兩種方法檢測結(jié)果比較 265例患兒血清同時采用膠體金法和被動顆粒凝集法兩種方法檢測。膠體金法檢測MP-IgM抗體陽性率為64.91%(172/265)；被動顆粒凝集法檢測MP總抗體陽性率為82.26%(218/265)，以MP總抗體滴度≥1∶40判為陽性。兩種方法的陽性率比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.2不同總抗體滴度組MP-IgM抗體陽性檢出情況 按照被動顆粒凝集法不同抗體滴度進行分組，隨著血清中MP總抗體滴度增加，膠體金法MP-IgM抗體陽性率增高，見圖1?？偪贵w滴度1∶80和1∶160組中MP-IgM抗體陽性率分別為70.83%和71.70%，差異無統(tǒng)計學意義(P=0.938)。

圖1 不同總抗體滴度組MP-IgM抗體陽性率

2.2.1以總抗體滴度≥1∶160作為臨界值時兩種方法檢測結(jié)果比較 以總抗體滴度≥1∶160作為判斷MP近期或現(xiàn)癥感染的臨界值，膠體金法和被動顆粒凝集法兩種方法檢測結(jié)果的符合率為81.89%，差異無統(tǒng)計學意義(P=0.193)，見表1。

表1 以總抗體滴度≥1∶160作為臨界值時兩種方法檢測結(jié)果比較(n)

2.2.2以總抗體滴度≥1∶80作為臨界值時兩種方法檢測結(jié)果比較 以總抗體滴度≥1∶80作為判斷MP近期或現(xiàn)癥感染的臨界值，兩種方法檢測結(jié)果的符合率為85.66%，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.034)，見表2。

表2 總抗體滴度≥1∶80作為臨界值兩種方法結(jié)果比較(n)

3 討 論

MP的檢測方法主要分病原學檢測和血清學檢測兩大類，其中血清學特異性抗體檢測仍然是目前應(yīng)用于臨床診斷MP感染的最常用方法。一般人體在初次感染MP后，IgM抗體可在感染1周內(nèi)升高，2～3周達到高峰，4周時下降，2～3個月降至最低[7]。IgM抗體是MP感染后最早產(chǎn)生的特異性抗體，作為早期診斷指標，IgM特異性抗體檢測結(jié)果為陽性，可提示近期感染。膠體金法檢測患兒血液中MP特異性IgM抗體具有以下優(yōu)點：(1)特異度和靈敏度較高[8]；(2)操作簡便，報告結(jié)果時間短；(3)既可檢測血清，也可檢測末梢全血；(4)用血量較少，20 μL即可；(5)檢測結(jié)果可用肉眼判讀，為減少人為誤差，也可使用膠體金試紙分析儀進行判讀。

IgG比IgM出現(xiàn)晚，一般在感染后2周左右出現(xiàn)，第5周達到滴度峰值，且維持時間較長[9-10]。本研究中被動顆粒凝集法檢測的是MP的總抗體，即包含IgM、IgA和IgG等血清中可能存在的所有類型的MP特異性抗體。作為最經(jīng)典和傳統(tǒng)的檢測方法，其重復性好，特異度和靈敏度也較高。在《兒童社區(qū)獲得性肺炎管理指南(2013修訂)》[11]、《兒童肺炎支原體肺炎診治專家共識(2015版)》[12]和《兒童肺炎支原體呼吸道感染實驗室診斷專家共識》[13]等一個指南和兩個專家共識中，均提出以血清MP總抗體滴度≥1∶160作為MP近期或急性感染的參考或診斷標準，恢復期和急性期MP抗體滴度呈4倍及以上增高或減低時，可確診為MP感染[11-14]。然而，患兒就診時很難判斷其處于MP感染的哪個階段，門診時不宜采集靜脈血，間隔數(shù)日或數(shù)周采集雙份血清更加困難。另外，該方法全程需要手工操作，耗時較長，一般3 h以上才能判斷結(jié)果，且只能人工肉眼判斷，人工誤差難以避免。

本研究結(jié)果顯示，被動顆粒凝集法檢測MP總抗體的陽性率(≥1∶40為陽性)明顯高于膠體金法檢測MP-IgM抗體的陽性率，但被動顆粒凝集法檢測MP總抗體滴度≥1∶40，僅表明患兒血清中存在MP抗體(IgM、IgG、IgA各種亞型MP抗體中的一種或幾種)，并不能表明其為近期或現(xiàn)癥感染。另外，膠體金法檢測MP-IgM抗體的陽性率會隨著總抗體滴度升高而增高。被動顆粒凝集法檢測的MP總抗體滴度越高，其中IgM特異性抗體水平也可能越高，血清MP總抗體滴度≥1∶160和IgM特異性抗體陽性對診斷結(jié)果一致性很高。

依據(jù)指南和專家共識[11-13]，單次被動顆粒凝集試驗總抗體滴度≥1∶160，提示近期或現(xiàn)癥感染。本研究顯示，以總抗體滴度≥1∶160作為判斷標準，血清MP總抗體滴度≥1∶160和膠體金法血清MP-IgM陽性作為MP近期或現(xiàn)癥感染的臨床輔助診斷手段具有等效性；若以總抗體滴度≥1∶80作為判斷MP近期或現(xiàn)癥感染的臨界值，兩種方法檢測結(jié)果的總符合率為85.66%，但差異有統(tǒng)計學意義(P=0.034)。因而本研究結(jié)果進一步支持了指南和專家共識中，以抗體滴度≥1∶160作為臨界值的判斷標準。

此外，本研究結(jié)果顯示，總抗體滴度1∶80組和1∶160組，兩組中MP-IgM抗體陽性率分別為70.83%和71.70%，差異無統(tǒng)計學意義(P=0.938)。這可能與總抗體滴度1∶80組的樣本量較少有關(guān)；被動凝集法的結(jié)果是人工判讀，允許存在上下一個滴度級別的誤差，這亦可能是其中的原因之一。黎翠翠等[15]的報告顯示，兒童MP-IgM抗體陽性與被動凝集法抗體滴度≥1∶160和≥1∶320的符合率均為95%，只有極少數(shù)抗體滴度為1∶80，這與本研究結(jié)果存在一定的差異，分析其原因可能與其報告中兒童病例數(shù)較少有關(guān)。在兒童患者中，當血清中總抗體滴度達到1∶80時，MP-IgM抗體陽性率也較高(70.83%)，對臨床診斷有較好的提示意義。能否將總抗體滴度≥1∶80作為判斷MP近期或現(xiàn)癥感染的臨界值，尚需要更多的實驗數(shù)據(jù)來支持。

4 結(jié) 論

膠體金法、被動顆粒凝集法均可用于MP近期或現(xiàn)癥感染的臨床輔助診斷，膠體金法適用于門診初篩，被動顆粒凝集法更適用于住院患兒的檢測。如果條件允許，建議同時開展兩種方法的檢測，以利于臨床早期診斷MP感染。