君子蘭未成熟胚離體培養(yǎng)的研究

鄧小敏

（撫順市農(nóng)業(yè)特產(chǎn)學(xué)校，遼寧 撫順 113123）

君子蘭為石蒜科君子蘭屬多年生草本植物，葉、花、果均具有很高的觀賞價(jià)值[1]。君子蘭種子具有成熟期長(zhǎng)、育種周期長(zhǎng)、分株繁殖倍率低等特點(diǎn)。為縮短種子生育期，增加其繁殖系數(shù)，本實(shí)驗(yàn)通過研究未成熟胚離體的培養(yǎng)，探索出更加適用于君子蘭未成熟胚快速繁殖的培養(yǎng)基和外植體。

1 材料與方法

1.1 供試材料

君子蘭“油匠”品種為4 年生植株，溫室盆栽，正常管理。

1.2 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件

以MS 為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的NAA、2，4-D 和BA，蔗糖30g·L-1，瓊脂6g·L-1，pH 值為5.8。培養(yǎng)溫度為（25±1）℃，每天光照時(shí)長(zhǎng)為12 h，光照強(qiáng)度為2 000 lx。

1.3 試驗(yàn)方法

比較不同激素對(duì)未成熟胚愈傷組織的誘導(dǎo)、分化及直接成芽的影響。將果實(shí)置于流水下沖洗，將在超凈工作臺(tái)上剝離出的種子浸泡于70%酒精中消毒10 s，再取出種胚接種在下列8種培養(yǎng)基上：①M(fèi)S+NAA 1 mg·L-1+BA 1 mg·L-1；②MS+NAA 1 mg·L-1+BA 2 mg·L-1；③MS+NAA 0.5 mg·L-1+BA 2 mg·L-1；④MS+NAA 0.5 mg·L-1+BA 1 mg·L-1；⑤MS+2，4-D 1 mg·L-1+BA 1 mg·L-1； ⑥MS+2，4-D 2 mg·L-1+BA 1 mg·L-1；⑦M(jìn)S+2，4-D 1 mg·L--1+BA 2 mg·L-1；⑧MS+2，4-D 2 mg·L-1+BA 2 mg·L-1。

比較不同胚齡對(duì)未成熟胚誘導(dǎo)再生的影響。將授粉后110 d、130 d、150 d 未成熟胚接種在MS+NA A 0.5 mg·L-1+BA 2 mg·L-1的培養(yǎng)基上。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同激素及濃度配比對(duì)未成熟胚離體培養(yǎng)的影響

將“油匠”未成熟胚接種到表1 中的8 種培養(yǎng)基上，20 d 后觀察到：接種在NAA 和BA 組合的4 種培養(yǎng)基上的胚20 d 后膨大變綠，能直接再生成芽，其中在MS+NAA 0.5 mg·L-1+BA 1 mg·L-1培養(yǎng)基上芽的再生率為86.05%，明顯高于其他三種培養(yǎng)基中芽的再生率，而且其中有32 個(gè)外植體形成的再生芽形成了叢生芽。接種在2，4-D 和BA 組合的4 種培養(yǎng)基上的胚有愈傷組織產(chǎn)生，其中在MS+2，4-D 1 mg·L-1+BA 2 mg·L-1培養(yǎng)基中的愈傷組織誘導(dǎo)率最高，達(dá)到73.47%。通過繼代培養(yǎng)能分化出苗，其中在MS+2，4-D 1 mg·L-1+BA 1 mg·L-1培養(yǎng)基上的分化率最高，為42.86%。NAA 利于未成熟胚再生成芽，2，4-D 利于未成熟胚愈傷組織的誘導(dǎo)。

2.2 不同胚齡對(duì)未成熟胚誘導(dǎo)再生的影響

將授粉后110 d、130 d 和150 d 的未成熟胚（圖1）接種在同一種培養(yǎng)基上，不同胚齡對(duì)未成熟胚離體培養(yǎng)的影響見表2。結(jié)果表明：授粉后110 d 的未成熟胚能誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織，誘導(dǎo)率達(dá)到41.86%，但是再生成芽的數(shù)量相對(duì)較少；授粉后130 d 的未成熟胚能再生成芽，再生率最高，達(dá)到92.31%，其中有32 個(gè)外植體形成了叢生芽；授粉后150 s 的未成熟胚能分蘗成苗，但是由于成熟度相對(duì)較高，再生成苗的叢生苗數(shù)量少。

表1 不同激素及濃度配比對(duì)君子蘭未成熟胚離體培養(yǎng)的影響Tab.1 Effects of different hormones and concentration ratio on in vitro culture of immature embryos of Kaffir lily

表2 君子蘭未成熟胚不同胚齡對(duì)離體培養(yǎng)的影響Tab.2 Effects of immature embryo age on in vitro culture of Kaffir lily

3 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，未成熟胚在附加了2，4-D 的培養(yǎng)基上生成的愈傷組織誘導(dǎo)率高，而在附加了NAA 和BA 的培養(yǎng)基上更容易形成小苗及叢生芽。未成熟胚在未加2，4-D 的培養(yǎng)基上易于誘導(dǎo)出叢生芽，其中在MS+NAA 0.5 mg·L-1+BA 1 mg·L-1培養(yǎng)基中生成的叢生芽再生率達(dá)到86.05%，在附加了2，4-D 和BA 的培養(yǎng)基上生成淡黃色愈傷組織，其中在MS+2，4-D1 mg·L-1+BA 2 mg·L-1培養(yǎng)基中生成的愈傷組織誘導(dǎo)率最高，達(dá)到73.47%。

證實(shí)了未成熟胚的胚齡不同，愈傷組織的誘導(dǎo)情況不同。授粉后110 d的未成熟胚能誘導(dǎo)出愈傷組織，授粉后130 d 以上的未成熟胚直接誘導(dǎo)產(chǎn)生苗并形成叢生芽，授粉后150 d 的未成熟胚不能形成愈傷組織，而長(zhǎng)成小苗。授粉后130 d 的未成熟胚再生率最高，達(dá)到92.31%。