血清及胎盤中脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2水平與妊娠期高血壓疾病的關(guān)系

王 晶，東 星，張學(xué)軍，尚麗新

妊娠期高血壓疾病是妊娠與高血壓并存的一組疾病，嚴(yán)重威脅母嬰健康[1]。目前，其病因及發(fā)病機制尚不明確，亦缺少特效的治療手段[2,3]。因此，研究其發(fā)病機制，尋找有效的預(yù)測指標(biāo)及治療方法至關(guān)重要[4]。近年來發(fā)現(xiàn)，脂代謝發(fā)生紊亂，在氧化應(yīng)激反應(yīng)或脂質(zhì)過氧化物的作用下內(nèi)皮細胞分泌炎性因子受損，是子癇前期的基本病理變化之一[5,6]。脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2(Lp-PLA2)作為一種炎性標(biāo)志物，可激活炎性反應(yīng)，損傷血管內(nèi)皮細胞，在脂質(zhì)代謝紊亂中有重要的作用[7,8]，可能與妊娠期高血壓疾病的發(fā)生密切相關(guān)。本研究檢測了妊娠期高血壓疾病患者血清及胎盤中Lp-PLA2水平，探討其在該病發(fā)生中的作用及與妊娠結(jié)局的關(guān)系，期望為該病的預(yù)測及治療提供新的靶點。

1 對象與方法

1.1 對象 選取2016-01至2018-01我院產(chǎn)科收治的妊娠期高血壓疾病患者60例(妊娠期高血壓疾病組)，其中妊娠高血壓19例，輕度子癇前期25例、重度子癇前期16例。隨機選取同期分娩的血壓正常孕婦20例為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)診斷標(biāo)準(zhǔn)參見第9版《婦產(chǎn)科學(xué)》[9]；(2)單胎初產(chǎn)婦；(3)簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)慢性高血壓、糖尿病及嚴(yán)重的心、腎、肝臟疾?。?2)酗酒、吸煙或精神性疾病病史；(3)免疫系統(tǒng)疾病。兩組孕婦年齡、孕周、孕次、孕前體重、分娩時體重、新生兒性別之間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。兩組新生兒出生體重及身長比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，表1)。

表1 兩組孕期高血壓產(chǎn)婦及其新生兒一般情況比較

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本的采集與處理 (1)所有孕婦于清晨空腹抽取4 ml靜脈血(妊娠期高血壓疾病組于治療前抽血)，在4 ℃下以3000 r/min離心15 min后，提取上清液，-80 ℃保存?zhèn)溆茫?2)所有孕婦于分娩后立即抽取新生兒臍帶血4 ml，處理及保存方法同母血，同時測量新生兒的出生身長及體重；(3)所有孕婦在胎盤娩出后，立即在胎盤母體面中央?yún)^(qū)取一塊1 cm×1 cm×1 cm的組織，置于10%中性甲醛溶液中固定，用石蠟包埋制作蠟塊，保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 檢測方法 孕婦血清中Lp-PLA2測定采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)，試劑盒為美國R&D公司產(chǎn)品，嚴(yán)格按照說明書進行操作。胎盤中Lp-PLA2表達情況的檢測采用免疫組織化學(xué)方法。兔抗人Lp-PLA2抗體及免疫組化試劑盒均購自武漢博士德生物工程有限公司，抗體工作濃度為1∶100。

1.3 免疫組化染色結(jié)果的判定 陽性細胞為細胞漿有清晰的棕黃色顆粒染色，陰性細胞為無著色或者著色與背景顏色相一致。在每張切片上隨機選取10個高倍視野，每個視野對100個細胞進行計數(shù)，按陽性細胞數(shù)和染色強度占細胞總數(shù)的百分比作綜合計分。(1)按陽性細胞數(shù)計分：陽性細胞數(shù)<5%時計為0分，陽性細胞數(shù)占5 %～25 %計為1分，陽性細胞數(shù)占26 %～50 %計為2分，陽性細胞數(shù)>50 %計為3分；(2)按染色強度計分：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色2分，棕褐色為3分；(3)將陽性細胞數(shù)的得分與染色強度的得分相乘，≥4分計為(+)，0～3分計為(-)。

1.4 評價指標(biāo) 對兩組胎盤中Lp-PLA2表達水平及血清中Lp-PLA2水平進行比較。對兩組血清與胎盤中Lp-PLA2水平的相關(guān)性進行分析。

2 結(jié) 果

2.1 孕婦胎盤中Lp-PLA2表達水平的比較 Lp-PLA2主要表達于胎盤絨毛滋養(yǎng)細胞及蛻膜細胞的細胞漿中(圖1A-B)。妊娠期高血壓疾病組胎盤中Lp-PLA2表達水平明顯高于對照組(P<0.05)，兩組之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。輕度子癇前期Lp-PLA2表達水平顯著高于對照組(P<0.05)，重度子癇前期Lp-PLA2表達水平顯著高于輕度子癇前期(P<0.05，表2)；妊娠高血壓Lp-PLA2表達水平與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

圖1 孕婦胎盤絨毛滋養(yǎng)細胞及蛻膜細胞中Lp-PLA2的陽性表達(X200)

表2 各組孕期高血壓孕婦胎盤中Lp-PLA2表達水平的比較 (n)

2.2 孕婦血清中Lp-PLA2水平的比較 妊娠期高血壓疾病組血清中Lp-PLA2水平高于對照組(P<0.01)。隨著病情的加重，Lp-PLA2水平呈逐漸上升趨勢，對照組、妊娠高血壓、輕度子癇前期、重度子癇前期兩兩之間比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05，表3)。

表3 各組孕期高血壓孕婦血清中Lp-PLA2水平的比較

2.3 相關(guān)性研究 妊娠期高血壓疾病組及對照組血清與胎盤中Lp-PLA2水平呈正相關(guān)(r=0.435，P<0.05；r=0.411，P<0.05)。

3 討 論

妊娠期高血壓疾病的病因及發(fā)病機制目前尚無定論。近年來認(rèn)為，脂質(zhì)代謝異常、血管內(nèi)皮細胞發(fā)生炎性損傷及功能障礙可能是該病發(fā)生的中心環(huán)節(jié)。Lp-PLA2為磷脂酶 A2(Phospholipase A2，PLA2)超家族的成員，它的基因位于染色體 6p21.2-p12Lp-PLA，由441個氨基酸組成[10]。研究發(fā)現(xiàn)，Lp-PLA2可促進炎性介質(zhì)的釋放，使機體發(fā)生炎性反應(yīng)，血管內(nèi)皮細胞受到破壞[11]；可使血小板聚集，導(dǎo)致血栓的形成[12]；并在穩(wěn)定細胞膜、重建磷脂、傳遞細胞信號、脂質(zhì)代謝過程中發(fā)揮重要的作用[13-15]。在體內(nèi)T 淋巴細胞、成熟的巨噬細胞等炎性細胞可以合成并分泌Lp-PLA2至血液循環(huán)中，以載脂蛋白B為載體，與低密度脂蛋白相結(jié)合，參與脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)[16]。由于Lp-PLA2在炎癥反應(yīng)及脂代謝中的作用，推測其可能與妊娠期高血壓疾病的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。

Balc等[17]研究發(fā)現(xiàn)，子癇前期患者Lp-PLA2及C反應(yīng)蛋白(CRP)水平均高于健康對照組，且兩者呈正相關(guān)，認(rèn)為Lp-PLA2水平的變化導(dǎo)致內(nèi)皮細胞發(fā)生炎性反應(yīng)，繼而導(dǎo)致子癇前期的發(fā)生。本研究發(fā)現(xiàn)，妊娠期高血壓疾病組胎盤中Lp-PLA2表達水平明顯高于對照組(P<0.05)；輕度子癇前期Lp-PLA2表達水平高于對照組(P<0.05)，重度子癇前期Lp-PLA2表達水平高于輕度子癇前期(P<0.05)，提示Lp-PLA2水平的升高與妊娠期高血壓疾病的發(fā)生及病情發(fā)展有關(guān)。

引發(fā)妊娠期高血壓疾病的可能機制如下：(1)Lp-PLA2與低密度脂蛋白相結(jié)合，引起脂質(zhì)代謝紊亂，繼而導(dǎo)致子宮和胎盤動脈發(fā)生動脈粥樣硬化，胎盤功能下降，最終導(dǎo)致妊娠期高血壓疾病的發(fā)生；(2)Lp-PLA2可使卵磷脂水解氧化，產(chǎn)生游離脂肪酸和溶血卵磷脂，兩者均為促進炎性反應(yīng)發(fā)生的介質(zhì)，通過激活細胞因子和黏附因子，使血管內(nèi)皮細胞受損、功能障礙，導(dǎo)致妊娠期高血壓疾病的發(fā)生和發(fā)展[18]；(3)Lp-PLA2通過促進IL-6釋放，參與血管炎性反應(yīng)，促使炎性反應(yīng)部位膠原沉積、纖維母細胞增生，同時促使血小板凝集，導(dǎo)致血管內(nèi)皮細胞損傷，誘發(fā)妊娠期高血壓疾病的發(fā)生[19]。

Güng?r ZB 等[20]以200名妊娠婦女為研究對象，將其分為對照組(血壓正常組)、早發(fā)型子癇前期組[平均孕周為(28.7±3.0)周]、晚發(fā)型子癇前期組[平均孕周為(36.0±1.4)周]，檢測血清中Lp-PLA2水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，早發(fā)及晚發(fā)型子癇前期組血清Lp-PLA2水平明顯高于對照組，提示Lp-PLA2水平升高可能與子癇前期及產(chǎn)后心血管疾病的發(fā)生有關(guān)，并可能作為該病的預(yù)測指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)，妊娠期高血壓疾病組血清中Lp-PLA2水平顯著高于對照組(P<0.05)；且隨著病情的加重，Lp-PLA2水平呈逐漸上升趨勢，對照組、妊娠高血壓、輕度子癇前期、重度子癇前期每兩組之間比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)；另外血清與胎盤中Lp-PLA2水平呈正相關(guān)(P<0.05)，提示血清Lp-PLA2水平的變化反映了病情的輕重，對于臨床監(jiān)測妊娠期高血壓疾病有一定的意義，有可能作為一個新的預(yù)測指標(biāo)應(yīng)用于臨床。

總之，Lp-PLA2水平的變化與妊娠期高血壓疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，檢測孕婦血清中Lp-PLA2水平可能為預(yù)測該病的發(fā)生提供一個新的指標(biāo)。有效抑制胎盤組織中Lp-PLA2的表達可能成為預(yù)防及治療妊娠期高血壓疾病的新的方法。