微柱凝膠技術(shù)在ABO新生兒溶血病患兒輸血前檢驗中的應(yīng)用分析

孫偉杰 初慧 王依彩

【摘要】 目的 分析微柱凝膠技術(shù)在ABO新生兒溶血病患兒輸血前檢驗中的應(yīng)用效果。方法 80例ABO新生兒溶血患兒作為研究對象， 采集患兒的血液標(biāo)本制作血清標(biāo)本和放散液標(biāo)本， 采用同型的ABO紅細(xì)胞制劑直接進(jìn)行交叉配血， 并使用微柱凝膠技術(shù)以及微孔板凝聚胺技術(shù)對患兒的血液標(biāo)本進(jìn)行檢測。分析患兒血清和放散液交叉配血與直抗類型情況;比較放散液和血清的微柱凝膠技術(shù)和微孔板凝聚胺技術(shù)配血結(jié)果。結(jié)果 80例患兒共進(jìn)行454次血清交叉配血， 其中， 血清微柱凝膠技術(shù)檢測226次不合格， 放散液微柱凝膠技術(shù)檢測194次不合格;血清微孔板凝聚胺技術(shù)檢測30次不合格， 放散液微孔板凝聚胺技術(shù)檢測36次不合格;血清和放散液的微柱凝膠技術(shù)檢測不合格率分別為49.78%（226/454）、42.73%（194/454）， 均高于微孔板凝聚胺技術(shù)的6.61%（30/454）、7.93%（36/454）， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。微柱凝膠技術(shù)和微孔板凝聚胺技術(shù)的放散液交叉配血結(jié)果一致性差， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。微柱凝膠技術(shù)和微孔板凝聚胺技術(shù)的血清交叉配血結(jié)果一致性差， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 在為ABO新生兒溶血病患兒進(jìn)行輸血前檢驗的過程中， 微柱凝膠技術(shù)具有較高的靈敏度以及準(zhǔn)確度。

【關(guān)鍵詞】 微柱凝膠技術(shù);ABO新生兒溶血病;微孔板凝聚胺技術(shù);輸血前檢驗;應(yīng)用分析

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.24.064

新生兒之所以會發(fā)生溶血性疾病， 一個十分重要的原因就在于嬰兒與母親的血型不一致， 進(jìn)而導(dǎo)致新生兒存在免疫系統(tǒng)缺陷， 出現(xiàn)溶血性疾病。臨床上， 在治療此類疾病的過程中主要以輸血為主， 但是， 受新生兒個體因素的影響， 在輸血的過程中需要最大限度的保證安全， 這一問題也開始越來越多的受到了國內(nèi)外醫(yī)學(xué)界的關(guān)注?，F(xiàn)階段， 在對新生兒進(jìn)行輸血前檢測的過程中， 最常用的方法就是微注凝膠技術(shù)以及微孔板凝聚胺技術(shù)， 為了使兩種不同檢測技術(shù)的敏感性及準(zhǔn)確性能夠得到有效驗證， 文章就此進(jìn)行了研究， 具體報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選擇本院2019年1～12月接診的80例ABO新生兒溶血病患兒作為研究對象， 其中男38例， 女42例;年齡1～5 d， 平均年齡（2.2±1.0）d;體重3～4 kg，?平均體重（3.25±0.26）kg。

1. 2 排除標(biāo)準(zhǔn) ①存在藥物過敏史的患兒;②具有家族精神病史以及家族心臟病史的患兒;③家長針對本次研究內(nèi)容存在異議的患兒[1]。

1. 3 方法

1. 3. 1 標(biāo)本制作 采集所有患兒的血液標(biāo)本， 對所采集的血液標(biāo)本進(jìn)行離心10 min處理， 將患兒血液標(biāo)本中的紅細(xì)胞和血清分開， 對分離出來的紅細(xì)胞進(jìn)行洗滌處理， 洗滌過程中， 需使用生理鹽水反復(fù)進(jìn)行3次洗滌操作。將洗滌好的紅細(xì)胞抽出一部分進(jìn)行細(xì)胞懸液制作， 細(xì)胞懸液的濃度為3%， 所使用的溶液為生理鹽水。抽取1 ml患兒紅細(xì)胞血液， 加入1 ml生理鹽水， 進(jìn)行3 min離心處理， 進(jìn)行7 min水浴操作， 水浴的溫度控制在50℃左右， 制作放散液標(biāo)本[2]。

1. 3. 2 微孔板凝聚胺技術(shù)檢測 采用微孔板凝聚胺技術(shù)對患兒進(jìn)行交叉配血檢測， ①收集患兒的血液標(biāo)本， 選擇與患兒血型相同的紅細(xì)胞進(jìn)行配血操作， 選一支干凈的試管， 將制作好的放散液標(biāo)本2滴置入患兒的紅細(xì)胞液或血清溶液中， 同時取0.7 ml低離子介質(zhì)，?1滴用于配型的紅細(xì)胞懸液， 同時加入2滴凝聚胺溶液， 將上述溶液進(jìn)行10 s離心處理， 處理干凈上述溶液之后， 輕輕搖晃裝有混合液的試管， 確定紅細(xì)胞已經(jīng)聚集， 若紅細(xì)胞未出現(xiàn)聚集的情況， 需要重新進(jìn)行二次操作， 保證紅細(xì)胞凝結(jié)之后， 在試劑中加入2滴重懸液， 搖晃充分混合后對最終結(jié)果進(jìn)行有效判斷。

1. 3. 3 微柱凝膠技術(shù)檢測 采用微柱凝膠技術(shù)對患兒進(jìn)行交叉配血， 抽取患兒的血液標(biāo)本之后， 對血液標(biāo)本進(jìn)行標(biāo)記操作， 操作的過程中使用的工具為微柱凝膠試劑卡， 在試管中加入患兒的血液標(biāo)本， 對溶液進(jìn)行5 min的離心處理， 觀察實驗結(jié)果。

1. 4 觀察指標(biāo) 分析患兒血清和放散液交叉配血與直抗類型情況;比較放散液和血清的微柱凝膠技術(shù)和微孔板凝聚胺技術(shù)配血結(jié)果。

1. 5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS25.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗;計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗;一致性采用Kappa檢驗。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 血清和放散液交叉配血與直抗類型分析 80例患兒共進(jìn)行454次血清交叉配血， 其中， 血清微柱凝膠技術(shù)檢測226次不合格， 放散液微柱凝膠技術(shù)檢測194次不合格;血清微孔板凝聚胺技術(shù)檢測30次不合格， 放散液微孔板凝聚胺技術(shù)檢測36次不合格;血清和放散液的微柱凝膠技術(shù)檢測不合格率分別為49.78%（226/454）、42.73%（194/454）， 均高于微孔板凝聚胺技術(shù)的6.61%（30/454）、7.93%（36/454）， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2. 2 放散液微柱凝膠技術(shù)和微孔板凝聚胺技術(shù)配血結(jié)果比較 微柱凝膠技術(shù)和微孔板凝聚胺技術(shù)的放散液交叉配血結(jié)果一致性差， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

2. 3 血清微柱凝膠技術(shù)和微孔板凝聚胺技術(shù)配血結(jié)果比較 微柱凝膠技術(shù)和微孔板凝聚胺技術(shù)的血清交叉配血結(jié)果一致性差， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表3。

3 討論

從遺傳學(xué)的角度來講， 新生兒之所以會出現(xiàn)溶血問題， 主要原因為新生兒在母體內(nèi)部階段遺傳了父親的基因， 而這部分基因在母體內(nèi)不具備相應(yīng)的抗原， 胎盤將母體抗體傳導(dǎo)給胎兒， 致使抗原和抗體相互排斥， 進(jìn)而出現(xiàn)免疫反應(yīng)， 導(dǎo)致新生兒的紅細(xì)胞受損[3]。新生兒發(fā)生溶血病初期， 水腫、貧血、黃疸是最常見的臨床表現(xiàn)， 病情嚴(yán)重的患兒還會出現(xiàn)膽紅素腦病， 很多患兒因此而失去生命。因此， 一旦發(fā)現(xiàn)新生兒存在溶血病的傾向， 早期評估是前提條件， 這對于患兒的后期康復(fù)有著十分重要的現(xiàn)實意義。

通過對出現(xiàn)溶血病新生兒的現(xiàn)實情況進(jìn)行分析， 發(fā)現(xiàn)其普遍存在母源溶血性抗體， 部分抗體通過分解進(jìn)入嬰兒的血液， 剩余部分則會附著在紅細(xì)胞的表面， 尋找時機(jī)與紅細(xì)胞相結(jié)合， 因此， 在對此類疾病進(jìn)行鑒別診斷的過程中， 最常用的方法就是直接抗人球蛋白試驗、紅細(xì)胞抗體釋放試驗以及血清游離抗體實驗[4]。從本次研究結(jié)果來看， 患兒的紅細(xì)胞抗體普遍具有較高的陽性率， 這與現(xiàn)階段其他醫(yī)學(xué)研究人員的研究結(jié)果保持一致， 這也在一定程度上說明了通過紅細(xì)胞抗體釋放試驗?zāi)軌蛴行Ы鉀Q新生兒溶血病的問題， 但是， 在實際判斷的過程中應(yīng)結(jié)合多種診斷結(jié)果， 進(jìn)而有效提升診斷結(jié)果的準(zhǔn)確率以及可信度。在操作交叉配血試驗的過程中， 標(biāo)本不僅包含了提前制作好的患兒紅細(xì)胞放散液， 與此同時也包含了患兒的血清放散液， 其主要目的在于了解患兒供血紅細(xì)胞與溶血性抗體之間的關(guān)系[5]。以往， 在實際操作交叉配血實驗的過程中， 酶法、鹽水法的應(yīng)用也十分普遍， 但是， 在實際應(yīng)用鹽水法的過程中， 由于準(zhǔn)確度十分有限， 非常容易出現(xiàn)漏檢的問題， 因此， 現(xiàn)階段這種方式已被淘汰， 而在采用酶法進(jìn)行驗證的過程中， 雖然準(zhǔn)確率能夠得到保證， 但是反應(yīng)時間較長， 無法滿足臨床的實際需要， 因此， 在臨床上應(yīng)用較少。

在對ABO新生兒溶血病患兒進(jìn)行輸血前檢驗的過程中， 微孔板凝聚胺技術(shù)的應(yīng)用十分普遍， 在實際操作的過程中， 其主要通過凝聚胺自身帶有的正電荷發(fā)揮作用， 通過結(jié)合紅細(xì)胞， 使紅細(xì)胞表層的電荷數(shù)能夠得以消減， 在此基礎(chǔ)上， 加速紅細(xì)胞凝聚， 通過溶液中的負(fù)電荷和凝聚胺中的正電荷發(fā)生消解作用， 使不具備特性的凝集紅細(xì)胞能夠得以有效分散， 但是， 具備特異性抗原抗體凝集功能的紅細(xì)胞則很難散開， 因此， 在抗原檢測工作的開展過程中， 若采用微孔板凝聚胺技術(shù)往往需要較長的反應(yīng)時間， 且對抗體水平要求相對較高， 非常容易出現(xiàn)假陽性的問題， 進(jìn)而加大漏檢問題的發(fā)生率。

相比之下， 微柱凝膠技術(shù)能夠很好的解決上述問題， 其主要以血型理論為基礎(chǔ)， 具有較高的靈敏度， 同時特異性較強(qiáng)， 在輸血前血清篩查工作的開展過程中應(yīng)用十分普遍。微柱凝膠技術(shù)主要在于將符合血清學(xué)標(biāo)準(zhǔn)的稀釋液轉(zhuǎn)化成凝膠， 將凝膠灌注于微柱中， 在微柱中， 紅細(xì)胞經(jīng)過過濾， 進(jìn)而逐漸發(fā)生凝集， 在此基礎(chǔ)上， 分析反應(yīng)效果。通過微柱凝膠技術(shù)對患兒進(jìn)行輸血前檢查， 不僅具有直觀性的特點， 與此同時， 對于顯微鏡的依賴相對較小， 通過將試劑進(jìn)行離心處理， 如果凝膠中間部位或上層部位發(fā)生分散， 則明確說明是陽性結(jié)果， 未發(fā)生分散反應(yīng)， 則可以判定為陰性結(jié)果。但是， 這種方法依然存在其固有的缺陷， 實際應(yīng)用過程中由于需要較長的反應(yīng)時間， 因此， 選中的應(yīng)用范圍十分有限， 針對紅細(xì)胞中是否存在抗體的問題， 很難做出準(zhǔn)確判斷。從本次研究結(jié)果來看， 通過血清微孔板凝聚胺技術(shù)檢測的方式以及放散液微孔板凝聚胺技術(shù)進(jìn)行檢測， 兩組結(jié)果均為陽性， 與此同時， 采用微柱凝膠技術(shù)技術(shù)進(jìn)行檢測結(jié)果同樣為陽性， 但是， 在檢測結(jié)果的一致性方面， 兩組檢測結(jié)果的相似度整體較差， 這也符合其他類型文獻(xiàn)的研究結(jié)果， 說明微孔板凝聚胺技術(shù)在靈敏度方面存在一定的缺陷。

綜上所述， 在ABO新生兒溶血病輸血前檢測的過程中， 相比于微孔板凝聚胺技術(shù)， 微柱凝膠技術(shù)在靈敏度方面具有更加明顯的優(yōu)勢， 但是， 由于微柱凝膠技術(shù)在實際應(yīng)用的過程中存在其固有的缺陷， 因此， 在實際應(yīng)用的過程中尚無法完全取代微孔板凝聚胺技術(shù)。實際應(yīng)用的過程中， 需要充分考慮患兒的免疫學(xué)特點以及生理情況， 采取多種有效的手段進(jìn)行抗原抗體排查， 有效提升患兒在接受輸血過程中的安全度。

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[收稿日期：2020-03-19]