牡蠣殼超細(xì)球霰石碳酸鈣的制備與表征

高平章，艾楊城，鐘榕榕，翁文婷，孫麗丹，呂鳳嬌，謝曉蘭

(泉州師范學(xué)院 化工與材料學(xué)院，福建 泉州, 362000)

牡蠣是我國沿海地區(qū)的四大養(yǎng)殖貝類之一，也是我國衛(wèi)生部門批準(zhǔn)的第一批藥食同源的海產(chǎn)品之一[1]。福建地處沿海，近年來牡蠣養(yǎng)殖量逐年增加，產(chǎn)量約占全國的40%，是國內(nèi)最大的養(yǎng)殖省份[2]。開發(fā)利用牡蠣殼日益受到關(guān)注。

牡蠣殼中，碳酸鈣占總質(zhì)量的90%～95%，鈣元素含量達(dá)40%左右[3-5]，是一種良好的自然生物鈣源。以牡蠣殼為原料制備成各種食藥級(jí)鈣劑的研究受到廣泛關(guān)注，已有以牡蠣殼為原料制備的各種鈣制劑[1,6-12]。不同鈣制劑不僅含鈣量不同，鈣的吸收率也不同，常用的葡萄酸鈣、乳酸鈣、碳酸鈣等補(bǔ)鈣劑的吸收率分別為27%、32%、39%[13]，高的含鈣量和吸收率使碳酸鈣補(bǔ)鈣劑具有更好的市場(chǎng)前景。

但碳酸鈣補(bǔ)鈣劑需通過胃酸分解解離出Ca2+，才可被消化吸收，過程中產(chǎn)生的CO2會(huì)引發(fā)噯氣，不適用于胃潰瘍等消化道疾病患者，故改進(jìn)天然碳酸鈣晶體結(jié)構(gòu)和組成，對(duì)擴(kuò)大碳酸鈣補(bǔ)鈣劑的可適用人群具有良好的研究?jī)r(jià)值。

碳酸鈣主要有方解石、文石、球霰石等3種熱力學(xué)穩(wěn)定性依次下降的晶體結(jié)構(gòu)，天然形成的牡蠣殼碳酸鈣是多糖、蛋白質(zhì)等有機(jī)基質(zhì)含量較少的熱穩(wěn)定的方解石和文石，熱力學(xué)不穩(wěn)定的球霰石碳酸鈣一般只有在實(shí)驗(yàn)室中添加適當(dāng)?shù)木涂刂苿┱{(diào)控才能形成[14-15]。球霰石具有高比表面積、低密度、易溶性、易分散性、良好的生物安全性等特點(diǎn)，作為食藥級(jí)鈣劑具有更好的吸收性和可利用性[16]。近年來，國內(nèi)外相繼有蔗糖、淀粉等糖類和牛血清白蛋白、胃蛋白酶等蛋白質(zhì)類作為晶型控制劑調(diào)控仿生礦化形成球霰石型碳酸鈣的研究報(bào)道[17-21]。

胰蛋白酶是一種水溶性的蛋白水解酶，能特異性水解堿性氨基酸羧基形成的肽鍵，Ca2+對(duì)其具有保護(hù)和激活作用，臨床上主要應(yīng)用于消化道潰瘍、炎癥、創(chuàng)傷性損傷等[22-26]。以牡蠣殼為原料，胰蛋白酶為調(diào)控劑制備鍵合胰蛋白酶的球霰石超微細(xì)碳酸鈣的研究至今未見報(bào)道。

論文探索了牡蠣殼經(jīng)粉碎、乳酸溶提活性鈣后，在胰蛋白酶調(diào)控下采用碳化法制備球霰石型的超細(xì)碳酸鈣工藝，并通過掃描電鏡、紅外光譜等手段表征分析了產(chǎn)品組成與形貌特征，以期為牡蠣殼的開發(fā)利用，制備適用于消化道潰瘍?nèi)巳旱男滦褪乘幖?jí)補(bǔ)鈣制劑提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

近江牡蠣殼，福建泉州恒達(dá)制藥有限公司；99.9% CO2氣體，泉州市豐澤區(qū)東流焊接材料經(jīng)營部。

乙二胺四乙酸二鈉(分析純)，北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司；氯化鈉(分析純)、氨水(分析純)，西隴科學(xué)股份有限公司；乳酸(藥典級(jí))、胰蛋白酶(生物試劑)，羅恩試劑；鈣羧酸指示劑(分析純)，阿拉丁試劑；其他試劑均為分析純，國藥集團(tuán)；實(shí)驗(yàn)用水為去離子水。

1.2 儀器與設(shè)備

DGG-9123A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；DF-101S 集熱式恒溫加熱磁力攪拌器，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；JY3002電子天平，上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司；AR124CN分析天平，奧豪斯儀器(常州)有限公司；DFY-200搖擺式高速萬能粉碎機(jī)，溫嶺市林大機(jī)械有限公司；FE28 pH計(jì)，梅特勒-托利多儀器有限公司；YP-2壓片機(jī)，上海山岳科學(xué)儀器有限公司；NICOLET iS 10紅外光譜儀，Thermo Fisher SCIENTIFIC；ZEISS MERLIN Compact掃描電鏡，德國Zeiss公司；STA 409 PC熱重分析儀，NETZSCH。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 牡蠣殼的預(yù)處理

近江牡蠣殼用自來水沖洗，并用刷子刷去附著的泥沙及其他雜質(zhì)，反復(fù)沖洗干凈后用蒸餾水浸泡1 h，濾干后在電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中80 ℃烘干6 h，再用萬能粉碎機(jī)粉碎至粉末狀，過100 目篩，裝瓶備用。

1.3.2 牡蠣殼乳酸溶提液的鈣含量測(cè)定

采用EDTA滴定法[12]：取25 mL牡蠣殼乳酸溶提稀釋液于錐形瓶并用氨水調(diào)至pH 12～13，再加入適量鈣羧酸指示劑，充分搖勻后用EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，當(dāng)溶液由玫瑰紅色變?yōu)榱了{(lán)色，終止滴定并記錄消耗的EDTA標(biāo)準(zhǔn)液體積，每個(gè)樣品平行滴定2次，取平均值計(jì)算牡蠣殼活性鈣的溶提率如公式(1)所示：

(1)

式中：c，EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol/L；V，滴定消耗的EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，mL；n，乳酸溶提液稀釋倍數(shù)；V總，乳酸溶提液總體積，mL；M，鈣摩爾質(zhì)量，g/mol；m，牡蠣殼粉質(zhì)量，g。

1.3.3 乳酸溶提牡蠣殼活性鈣的工藝條件優(yōu)化

先用單因素實(shí)驗(yàn)考察乳酸濃度、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間、攪拌速度等因素對(duì)牡蠣殼活性鈣溶提率的影響，確定各因素的較佳取值。在此基礎(chǔ)上，再用正交實(shí)驗(yàn)對(duì)工藝條件進(jìn)一步優(yōu)化。所有實(shí)驗(yàn)均做3個(gè)平行組。

1.3.4 胰蛋白酶調(diào)控的牡蠣殼納米碳酸鈣制備

在優(yōu)化工藝條件下，用乳酸溶提牡蠣殼活性鈣，溶提液過濾后，根據(jù)碳酸二級(jí)解離常數(shù)(pKa2=10.2)和胰蛋白酶等電點(diǎn)(pI=10.1～10.8)，為了保證反應(yīng)體系中的胰蛋白酶帶負(fù)電，能與Ca2+鍵合反應(yīng)并碳化成碳酸鈣，溶提液先用氨水調(diào)節(jié)溶液至pH 11～12，再按不同比例的酶鈣質(zhì)量比分別加入適量胰蛋白酶，攪拌溶解完全后，在25 ℃下，以1 L/min的流速持續(xù)通入CO2氣體5 min，碳化制備碳酸鈣，所得產(chǎn)品用去離子水充分洗滌后用恒溫鼓風(fēng)干燥箱在105 ℃下干燥至恒重。同時(shí)為了節(jié)約成本，碳化后母液中的胰蛋白酶可以回收循環(huán)利用。

1.3.5 碳酸鈣產(chǎn)品表征

1.3.5.1 掃描電鏡形貌分析

掃描電鏡分析和測(cè)定碳酸鈣產(chǎn)品形貌即粒徑。樣品采用直接分散法：將導(dǎo)電膠剪成合適大小，直接粘在銅片上，待測(cè)樣品借助外物直接散落在導(dǎo)電膠上，用吸耳球輕輕吹試樣，除去未附著在導(dǎo)電膠上的樣品。接著進(jìn)樣，選擇合適的放大倍數(shù)觀察樣品的外觀形貌及粒徑大小。

1.3.5.2 紅外光譜定性分析

取100～200 mg KBr粉末于瑪瑙研缽中，再加入約2 mg的碳酸鈣樣品，充分研磨后，取樣壓片，以KBr空白片劑作參照，在波長(zhǎng)4 000～400 cm-1內(nèi)掃描紅外光譜，分析鑒定產(chǎn)物特征官能團(tuán)。

區(qū)內(nèi)巖漿活動(dòng)頻繁，巖漿巖種類繁多，具多期多次活動(dòng)的特點(diǎn)，既有噴出巖，又有侵入巖，中元古代以火山噴發(fā)為主，印支期、燕山期巖漿侵入形成各種巖脈和巖體。

1.3.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

用Excel 2007軟件對(duì)單因素實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示；正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果用SPSS 18.0軟件進(jìn)行顯著性差異分析，以P<0.05 表示差異顯著；用Grapher 8.0 軟件進(jìn)行作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素法考察乳酸溶提牡蠣殼活性鈣的工藝條件

2.1.1 溫度對(duì)乳酸溶提牡蠣殼活性鈣的影響

分別取牡蠣殼粉10.00 g，按m(牡蠣殼)∶V(乳酸溶液)=1∶20 的固液比加入1.0 moL/L的乳酸溶液后，在不同反應(yīng)溫度下，300 r/min攪拌反應(yīng)30 min，測(cè)定分析牡蠣殼活性鈣的溶提率，考察溫度對(duì)牡蠣殼活性鈣溶提率的影響。結(jié)果如圖1所示，溫度對(duì)活性鈣溶提率的影響呈鐘罩型趨勢(shì)，溫度低于55 ℃時(shí)，鈣溶提率隨著溫度升高而升高；溫度高于65 ℃時(shí)，鈣溶提率隨溫度升高而下降；在55 ℃與65 ℃下，鈣溶提率分別為39.22%、39.28%，溶提效果相當(dāng)并取得良好效果。對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，顯示溫度對(duì)乳酸溶提牡蠣殼活性鈣的影響具有顯著性。

圖1 溫度對(duì)乳酸溶提牡蠣殼活性鈣的影響Fig.1 Effect of temperature on calcium extraction rate of oyster shell by lactic acid

溫度升高加快體系溶質(zhì)分子的運(yùn)動(dòng)速度，有助于牡蠣殼碳酸鈣的溶解，提高其與乳酸的化學(xué)反應(yīng)速度；但溫度升高到一定程度，對(duì)放熱反應(yīng)產(chǎn)生抑制，不利于活性鈣的溶提。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，結(jié)合節(jié)能減排，確定55 ℃為較佳牡蠣殼活性鈣的溶提溫度。

2.1.2 反應(yīng)時(shí)間對(duì)乳酸溶提牡蠣殼活性鈣的影響

圖2 反應(yīng)時(shí)間對(duì)乳酸溶提牡蠣殼活性鈣的影響Fig.2 Effect of reaction time on calcium extraction rate of oyster shell by lactic acid

2.1.3 乳酸濃度對(duì)乳酸溶提牡蠣殼活性鈣的影響

分別取牡蠣殼粉10.00 g，按1∶20固液比分別加入不同濃度的乳酸溶液，在55 ℃、300 r/min下分別攪拌反應(yīng)30 min后，測(cè)定分析牡蠣殼活性鈣的溶提率，考察乳酸濃度對(duì)牡蠣殼活性鈣溶提率的影響。圖3表明，當(dāng)乳酸濃度低于1.5 moL/L時(shí)，牡蠣殼活性鈣的溶提率隨著乳酸濃度升高快速提升；乳酸濃度在1.5～2.5 moL/L范圍內(nèi)，隨著乳酸濃度升高鈣溶提率上升緩慢并趨于平穩(wěn)，乳酸濃度為2 moL/L時(shí)，溶提率最大，為39.28%；乳酸濃度大于2.5 moL/L時(shí)，牡蠣殼活性鈣的溶提率隨著乳酸濃度升高呈輕微下降趨勢(shì)。單因素方差分析顯示乳酸濃度對(duì)牡蠣殼鈣溶提率的影響具有顯著性。

圖3 乳酸濃度對(duì)乳酸溶提牡蠣殼活性鈣的影響Fig.3 Effect of lactic acid concentrations on calcium extraction rate of oyster shell by lactic acid

乳酸濃度對(duì)牡蠣殼鈣溶提率影響遵循反應(yīng)物濃度對(duì)反應(yīng)效率的影響。當(dāng)加入低于1 moL/L的乳酸溶液時(shí)，反應(yīng)體系的乳酸量不足，導(dǎo)致牡蠣殼活性鈣不能完全溶提出來；加入1 moL/L的乳酸溶液，乳酸與牡蠣殼碳酸鈣剛好能達(dá)到理論完全反應(yīng)比例，但由于反應(yīng)的可逆性及牡蠣殼中少量雜質(zhì)影響，該乳酸濃度仍不能把牡蠣殼活性鈣完全溶提；加入1 moL/L<濃度<2 moL/L的乳酸溶液，體系中的乳酸適當(dāng)過量，可保證牡蠣殼活性鈣被完全溶提出；當(dāng)乳酸濃度為2 moL/L時(shí)，牡蠣殼活性鈣溶提效果最好，溶提率達(dá)39.28%；但隨著加入乳酸濃度進(jìn)一步升高，乳酸過量時(shí)，乳酸之間容易發(fā)生聚合反應(yīng)，反而影響牡蠣殼活性鈣的溶提效果。故確定2 moL/L的乳酸濃度為較佳提取濃度。

2.1.4 攪拌速度對(duì)乳酸溶提牡蠣殼活性鈣的影響

分別取牡蠣殼粉10.00 g，按1∶20固液比加入2.0 moL/L的乳酸溶液，55 ℃下，在不同攪拌速度下反應(yīng)30 min后，測(cè)定分析牡蠣殼活性鈣的溶提率，考察攪拌速度對(duì)牡蠣殼活性鈣溶提率的影響。圖4顯示，攪拌速度低于300 r/min時(shí)，牡蠣殼活性鈣的溶提率隨著攪拌轉(zhuǎn)速逐漸增加而升高，當(dāng)攪拌轉(zhuǎn)速為300 r/min時(shí)，鈣的溶提率最大，達(dá)39.28%；而攪拌速度高于300 r/min時(shí)，牡蠣殼活性鈣的溶提率表現(xiàn)出快速下降趨勢(shì)。單因素方差分析顯示攪拌速度對(duì)牡蠣殼鈣溶提率的影響具有顯著性。

圖4 攪拌速度對(duì)乳酸溶提牡蠣殼活性鈣的影響Fig.4 Effect of stirring speed on calcium extraction rate of oyster shell by lactic acid

攪拌有助于乳酸和牡蠣殼粉在反應(yīng)體系中的分散，適當(dāng)攪拌有助于兩者之間的充分接觸，提高反應(yīng)；但隨著攪拌速度提高，一方面會(huì)導(dǎo)致兩者接觸時(shí)間縮短，不利于反應(yīng)，另一方面也會(huì)加速乳酸自身的聚合反應(yīng)，不利于牡蠣殼碳酸鈣的溶提。故確定較佳攪拌速度為300 r/min。

2.2 正交試驗(yàn)優(yōu)化乳酸溶提牡蠣殼活性鈣的工藝條件

根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，固定反應(yīng)時(shí)間30 min，以對(duì)鈣溶提率有顯著性影響的乳酸濃度、反應(yīng)溫度、攪拌速度等為考察因素，每個(gè)因素在單因素實(shí)驗(yàn)確定的較佳值周邊選擇3個(gè)水平，按L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)組合出9個(gè)實(shí)驗(yàn)方案，以牡蠣殼活性鈣的溶提率為考察指標(biāo)，確定出不同濃度乳酸溶液提牡蠣殼活性鈣的最佳工藝條件。具體的實(shí)驗(yàn)方案及實(shí)驗(yàn)結(jié)果極差分析見表1，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的SPSS方差顯著性分析見表2。

由表1可知，乳酸溶提牡蠣殼活性鈣的最佳工藝條件是乳酸濃度為2 moL/L，溫度為50 ℃，攪拌速度為350 r/min，乳酸溶提牡蠣殼活性鈣的溶提率可達(dá)39.46%。通過R值可知，3個(gè)因素對(duì)鈣溶提率的影響主次順序?yàn)椋簲嚢杷俣?乳酸濃度>溫度。表2分析結(jié)果顯示，3個(gè)因素對(duì)鈣溶提率均有顯著性影響。

表1 乳酸提取牡蠣殼活性鈣的正交實(shí)驗(yàn)方案及實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 1 The schemes and results of orthogonal experiments about calcium of oyster shell extracted by lactic acid

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果方差統(tǒng)計(jì)分析Table 2 Statistical analysis of variance of orthogonal test results

圖5中的a、b、c、d、e、f分別是未加胰蛋白酶、按0.1∶1、0.15∶1、1∶1、2∶1、3∶1的酶鈣質(zhì)量比添加胰蛋白酶調(diào)控制備的牡蠣殼碳酸鈣的SEM圖像。

2.3 胰蛋白酶調(diào)控對(duì)牡蠣殼納米碳酸鈣的形貌影響

根據(jù)1.3.4的牡蠣殼納米碳酸鈣制備方法，分別按0∶1、0.1∶1、0.15∶1、1∶1、2∶1、3∶1的酶鈣質(zhì)量比，往牡蠣殼活性鈣乳酸溶提液中加入胰蛋白酶，攪拌溶解完全后，碳化法制備碳酸鈣，制備產(chǎn)品充分洗滌后置于105 ℃的恒溫鼓風(fēng)干燥箱中干燥至恒重。對(duì)樣品進(jìn)行掃描電鏡、外紅光譜測(cè)試分析，研究胰蛋白酶調(diào)控對(duì)牡蠣殼納米碳酸鈣的形貌和結(jié)構(gòu)的影響。

2.3.1 掃描電鏡形貌分析

采用掃描電鏡(SEM)測(cè)定分析不同量胰蛋白酶調(diào)控下制備的牡蠣殼碳酸鈣產(chǎn)品的形貌和粒徑差別。

從圖5-a中可見，牡蠣殼乳酸溶提鈣液在未添加胰蛋白酶的情況下，碳化形成的碳酸鈣是由許多納米級(jí)的球狀顆粒緊密團(tuán)聚而成的直徑為5 ～ 10 μm的微球，外觀形貌與王芬等用CaCl2溶液碳化法制備的碳酸鈣相似[16]；圖5-b、5-c顯示，按0.1∶1和0.15∶1的酶鈣質(zhì)量比加入不同量的胰蛋白酶調(diào)控，碳化制備的碳酸鈣微球粒徑雖有所下降，但尺度仍在1 μm以上。物質(zhì)之間一般按摩爾比例相互作用，考慮胰蛋白酶分子量為24 000 Da，跟Ca2+相比，比較大，故提高了酶鈣質(zhì)量比至1∶1、2∶1、3∶1，由圖5-d、5-e、5-f可見，碳酸鈣微球粒徑隨著胰蛋白酶添加量增大明顯減小，納米顆粒的團(tuán)聚由緊密趨向蓬松，微球大小均一性也越來越好。由圖5-f可知，按3∶1酶鈣質(zhì)量比添加了胰蛋白酶調(diào)控碳化制備碳酸鈣，可制備得到大小均一、粒徑300～400 nm的蓬松微球。SEM表征結(jié)果說明胰蛋白酶的添加能有效分散納米碳酸鈣，防止納米碳酸鈣的團(tuán)聚，這對(duì)補(bǔ)鈣制劑或食品鈣強(qiáng)化劑的開發(fā)具有重大的意義，將有助于提高鈣的吸收利用。

a→f-酶鈣質(zhì)量比:0∶1、0.1∶1、0.15∶1、1∶1、2∶1、3∶1圖5 不同量胰蛋白酶調(diào)控下制備的碳酸鈣的掃描電鏡圖Fig.5 Scanning electron microscope of calcium carbonate prepared under the control of different amounts of trypsin

2.3.2 紅外光譜分析

不同晶型的碳酸鈣具有不同的紅外光譜特征峰，方解石碳酸鈣的紅外特征吸收峰主要在1 462、876和712 cm-1；文石碳酸鈣特征吸收峰在1 485、1 082、875、712和700 cm-1；球霰石的特征吸收峰為1 490～1 420、1 085 cm-1、1 070、870～830和743 cm-1。方解石、文石和球霰石的主要鑒別位點(diǎn)分別在712、700和743 cm-1[16-17]。

圖6 未加胰蛋白酶的碳酸鈣紅外譜圖Fig.6 Infrared spectrum of calcium carbonate without trypsin

圖7 加胰蛋白酶的碳酸鈣紅外譜圖Fig.7 Infrared spectrum of calcium carbonate with trypsin

蔗糖、牛血清白蛋白等糖類和蛋白質(zhì)類物質(zhì)作為晶型控制劑調(diào)控球霰石型碳酸鈣的形成，主要是因?yàn)樘砑觿┲械摹狾H、—COOH等極性官能團(tuán)和C—O等極性鍵會(huì)與碳酸鈣發(fā)生作用，誘導(dǎo)球霰石型的生成[17,20]。研究顯示胰蛋白酶調(diào)控下對(duì)牡蠣殼活性鈣乳酸溶提液碳化制備的碳酸鈣晶型沒有影響，可能是因?yàn)轶w系介質(zhì)中本來就含帶—OH、—COOH等極性官能團(tuán)和C—O極性鍵的乳酸，可誘導(dǎo)球霰石型碳酸鈣的生成，故添加胰蛋白酶調(diào)控只影響碳酸鈣微團(tuán)的致密性和粒徑，不影響晶型。

3 結(jié)論

牡蠣殼洗凈粉碎成100目粉末，乳酸溶提活性鈣液后通入CO2，可碳化制備球霰石型納米顆粒團(tuán)聚而成的微球。單因素結(jié)合正交試驗(yàn)確定了乳酸溶提牡蠣殼活性鈣的最佳工藝條件：反應(yīng)時(shí)長(zhǎng)為30 min，乳酸濃度為2 moL/L，溫度為50 ℃，攪拌速度為350 r/min，在此最佳條件下，牡蠣殼活性鈣的溶提率可達(dá)39.46%，乳酸基本能將牡蠣殼中的鈣溶解出來。單因素實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)方差分析顯示乳酸濃度、溫度、攪拌速度均對(duì)鈣溶提率有顯著性影響，但反應(yīng)時(shí)間對(duì)鈣溶提率沒有顯著性影響；正交試驗(yàn)結(jié)果表明乳酸濃度、溫度、攪拌速度等3個(gè)因素對(duì)鈣提取率的影響主次順序?yàn)椋簲嚢杷俣?乳酸濃度>溫度。

考察牡蠣殼活性鈣乳酸溶提液在胰蛋白酶調(diào)控下，碳化結(jié)晶生成的碳酸鈣的形貌及粒徑等的變化。掃描電鏡和紅外光譜的結(jié)果表明，與沒有胰蛋白酶調(diào)控下制備的碳酸鈣晶體比較，胰蛋白酶調(diào)控下制備的碳酸鈣晶型沒有改變，均為球霰石型；但在胰蛋白酶存在下，碳酸鈣納米顆粒在團(tuán)聚成微球時(shí)會(huì)夾雜鍵合部分有機(jī)質(zhì)胰蛋白酶，使納米顆粒團(tuán)聚蓬松，團(tuán)聚而成的微球粒徑由5～10 μm下降至300～400 nm，且大小較均一。得到的產(chǎn)品如果開發(fā)為補(bǔ)鈣制劑或食品鈣強(qiáng)化劑時(shí)，將更容易被溶解、吸收。