黃芪對(duì)肝纖維化大鼠肝組織TIMP-1、MMP-1表達(dá)水平的影響

陳 源

（漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 漯河 462002）

黃芪是中藥中比較常見的一種藥材，其主要功效是升陽(yáng)固表、補(bǔ)中益氣，在臨床肝病中的應(yīng)用較多，但就目前臨床中對(duì)黃芪的運(yùn)用狀況來看，這一藥材在臨床中的應(yīng)用還不是很完善，在部分病癥的治療中不能較好的發(fā)揮其藥效，因此在臨床中的整體應(yīng)用效果較差。豬血清主要用于細(xì)胞培養(yǎng)，在實(shí)際臨床中建立豬血清誘導(dǎo)的免疫肝纖維化大鼠模型，采用黃芪灌服，然后觀察其肝功能指標(biāo)與肝纖維化指標(biāo)，了解黃芪對(duì)肝纖維化大鼠的抑制與作用機(jī)制。肝炎病毒是造成肝纖維化的主要原因，選用大鼠模型了解黃芪在臨床中對(duì)肝纖維化的治療狀況，能夠更好的了解黃芪對(duì)肝纖維化病理機(jī)制，研究臨床中黃芪的更多藥性，便于臨床治療中更加精確的進(jìn)行用藥，以此提升其臨床治療效果[1-2]。大鼠肝纖維化模型在臨床中能夠更好的觀察藥物作用狀況，在臨床多種藥物的研究中均采用大鼠肝纖維化模型，在國(guó)際臨床藥物研究中，大鼠肝纖維化模型也受到公認(rèn)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

篩選60只肝纖維化大鼠和20只正常大鼠作為研究對(duì)象，20只正常大鼠為正常組，60只肝纖維化大鼠按照雙盲隨機(jī)方法分為黃芪組、模型組、秋水仙堿組,各組大鼠健康狀況對(duì)比沒有顯著差異，P＞0.05，此次研究有意義。

豬血清（生產(chǎn)企業(yè)：上海信帆生物科技有限公司；進(jìn)口貨號(hào):XFA2207-56）；黃芪（生產(chǎn)企業(yè)：北京同仁堂；商品編號(hào)：2318050），采用清水煎煮，制成濃縮液，進(jìn)行灌胃用藥；秋水仙堿（生產(chǎn)企業(yè)：西雙版納藥業(yè)有限責(zé)任公司；批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H53020871），與蒸餾水相融合，制成10 mg/L的溶液；血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶等試劑盒由北京北化康泰臨床試劑有限公司提供。

1.2 方法

將20只正常大鼠與60只肝纖維化大鼠作為研究對(duì)象，正常大鼠為正常組，肝纖維化大鼠隨機(jī)分為黃芪組、模型組、秋水仙堿組，每組20只，選用不同的籠子進(jìn)行圈養(yǎng)。

除正常組以外，各組患者均創(chuàng)造無菌模型，黃芪組、模型組和秋水仙堿組進(jìn)行腹腔無菌豬血清注射，每周2次，每次注射0.3 ml，持續(xù)注射12周，正常組與模型組每日將蒸餾水進(jìn)行灌服，每次10 ml/kg，也進(jìn)行持續(xù)12周治療，黃芪組與秋水仙堿組將相應(yīng)的藥物進(jìn)行灌服，黃芪組采用黃芪煎煮湯劑，每日1次，每次2.3 g/kg，連續(xù)12周治療，秋水仙堿組每日進(jìn)行1次用藥，每次0.1 mg/kg[3]。

在持續(xù)用藥結(jié)束后進(jìn)行麻醉，制備血清，將其肝臟分為3份，1份用氮液罐冷凍，1份用中性福爾馬林浸泡，最后1份留取足量肝組織進(jìn)行勻漿制備。

在進(jìn)行以上用藥的過程中觀察與記錄大鼠的狀況，對(duì)其具體的變化狀況進(jìn)行分析，并對(duì)最終的治療結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)檢測(cè)，分析黃芪的治療狀況[4]。

1.3 觀察指標(biāo)

采用生化、放射免疫等方法觀察大鼠的肝功能，主要觀察指標(biāo)未ALT、AST、ALP，肝纖維化大鼠進(jìn)行血清HA、LN、CIV、PCⅢ檢測(cè)，觀察肝組織TIMP-1、MMP-1表達(dá)水平和膠原沉積狀況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

此次研究數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析用SPSS20.0進(jìn)行，計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，行x2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)。有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義參考P＜0.05。

2 結(jié) 果

2.1 血清肝功能

與正常組對(duì)比，模型組ALP與ALT水平均較高，P＜0.05，AST水平也較高，P＜0.05，秋水仙堿組和模型組對(duì)比，秋水仙堿組的ALP、AST和ALT均沒有顯著差異，P＜0.05，黃芪組與模型組比較，黃芪組的AST和ALT均顯著較高，P＜0.05，ALP也顯著升高，P＜0.05，數(shù)據(jù)見表1。

表1 血清肝功能指標(biāo)的對(duì)比(±s，u/L）

表1 血清肝功能指標(biāo)的對(duì)比(±s，u/L）

組別 n ALT AST ALP正常組 20 43.1±4.1 110.1±36.2 70.2±26.1模型組 20 67.1±13.1 141.7±35.4 91.2±26.5秋水仙堿組 20 70.1±7.9 169.8±42.7 90.5±21.7黃芪組 20 44.6±9.2 96.8±26.5 71.4±17.6

2.2 血清肝纖維化

與正常組比較，模型組的層粘連蛋白、血清透明質(zhì)酸、Ⅲ型膠原蛋白和Ⅳ型膠原均顯著升高，在臨床中有顯著的差異P＜0.05，秋水仙堿組的PCⅢ可顯著較低P＜0.05，HA和LN降低，黃芪組的CIV和LN也明顯降低，P＜0.05，數(shù)據(jù)見表2。

表2 血清肝纖維化指標(biāo)的對(duì)比（±s，μg/L）

表2 血清肝纖維化指標(biāo)的對(duì)比（±s，μg/L）

3 討 論

肝纖維化是細(xì)胞外基質(zhì)降解與失衡產(chǎn)生的結(jié)果，肝臟基質(zhì)金素蛋白酶能夠降解ECM，對(duì)主要成分Ⅰ型與Ⅲ型膠原蛋白降解有關(guān)鍵作用，基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子對(duì)MMPs有顯著的抑制作用，在肝纖維化患者中能夠有效的抑制肝纖維化，臨床中相關(guān)的理論知識(shí)能夠良好的進(jìn)行治療，但在實(shí)際臨床中還未進(jìn)行相關(guān)的實(shí)踐，因此對(duì)其藥物治療的安全性還不能確定，本文中的大鼠模型試驗(yàn)，主要用于觀察黃芪對(duì)肝纖維化大鼠TIMP-1和MMP-1表達(dá)水平的影響，進(jìn)一步了解抗肝纖維化的作用機(jī)制[5]。

此次研究結(jié)果顯示：正常組ALT為（43.1±4.1）u/L，模型組為（67.1±13.1）u/L，秋水仙堿組為（70.1±7.9）u/L，黃芪組為（44.6±9.2）u/L；正常組AST為（110.1±36.2）u/L，模型組為（141.7±35.4）u/L，秋水仙堿組為（169.8±42.7）u/L，黃芪組為（96.8±26.5）u/L；正常組ALP為（70.2±26.1）u/L，模型組為（91.2±26.5）u/L，秋水仙堿組為（90.5±21.7）u/L，黃芪組為（71.4±17.6）u/L,與正常組對(duì)比，模型組ALP與ALT水平均較高，P＜0.05，AST水平也較高，P＜0.05，秋水仙堿組和模型組對(duì)比，秋水仙堿組的ALP、AST和ALT均沒有顯著差異，P＜0.05，黃芪組與模型組比較，黃芪組的AST和ALT均顯著較高，P＜0.05，ALP也顯著升高，P＜0.05；正常組HA為（96.3±4.2）μg/L，LN為（120.8±7.9）μg/L，CIV為（99.1±17.1）μg/L，PCⅢ為（110.7±10.5）μg/L；模型組HA為（117.3±20.3）μg/L，LN為（139.1±17.2）μg/L，CIV為（130.4±26.3）μg/L，PCⅢ為（127.1±16.8）μg/L；秋水仙堿組HA為（94.8±12.9）μg/L，LN為（104.2±23.8μg/L）μg/L，CIV為（131.2±15.2）μg/L，PCⅢ為（114.5±26.1）μg/L；黃芪組HA為（86.1±15.1）μg/L，LN為136.1±18.1）μg/L，CIV為（101.6±13.6）μg/L，PCⅢ為（149.7±24.5）μg/L。與正常組比較，模型組的層粘連蛋白、血清透明質(zhì)酸、Ⅲ型膠原蛋白和Ⅳ型膠原均顯著升高，在臨床中有顯著的差異P＜0.05，秋水仙堿組的PCⅢ可顯著較低P＜0.05，HA和LN降低，黃芪組的CIV和LN也明顯降低，P＜0.05，從此次研究中的數(shù)據(jù)結(jié)果看，黃芪在肝纖維化大鼠中能夠良好的減少總膠原及Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ型膠原蛋白的病理性沉淀；黃芪對(duì)豬血清誘導(dǎo)的免疫肝纖維化大鼠有良好的機(jī)理與作用還未有相關(guān)的官方報(bào)道，此次研究結(jié)果數(shù)據(jù)可進(jìn)行說明，但不能完全肯定其臨床病理機(jī)制[6]。

綜合來看：黃芪在肝纖維化大鼠模型中，獲取了部分的研究數(shù)據(jù)，但其臨床說服力比較有限，對(duì)具體的藥理機(jī)制還需要進(jìn)行進(jìn)一步的研究。