靈芝多糖和豬苓多糖及其復(fù)方的免疫調(diào)節(jié)作用研究進(jìn)展

黃 青，李麗媛，劉晴晴，王 釗,*

（1.清華大學(xué)藥學(xué)院，蛋白質(zhì)科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100084；2.清華大學(xué)天津高端裝備研究院，天津 300300）

多糖是一類由多個(gè)單糖通過分子脫水縮合形成的天然高分子化合物，結(jié)構(gòu)復(fù)雜而龐大，其分子式為（C6H12O6）n，由10 個(gè)以上的單糖基通過糖苷鍵連接而成，是構(gòu)成生命的四大基本物質(zhì)之一。天然類多糖因其毒副作用小而備受關(guān)注。近年來，從植物、食用菌中提取的多糖類物質(zhì)作為改善健康的膳食補(bǔ)充劑引起了越來越多的關(guān)注。大量的研究表明，食用菌多糖具有廣泛的生物活性，如抗腫瘤、抗菌、抗氧化、抗病毒和免疫調(diào)節(jié)活性等，其中多糖的免疫調(diào)節(jié)活性被認(rèn)為是最重要的生物活性。然而，因多糖結(jié)構(gòu)復(fù)雜，不同來源的多糖所產(chǎn)生的免疫調(diào)節(jié)作用不同。

靈芝（Ganoderma lucidum）及豬苓（Polyorus umbellatus）是珍貴的食藥兩用菌，有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，在我國(guó)均有2 000多年的應(yīng)用歷史。兩者均有廣泛的藥理作用，如抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化等。靈芝和豬苓中含有多種活性成分，其中多糖成分主要發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)的作用。目前關(guān)于靈芝多糖（Ganoderma lucidumpolysaccharide，GLP）或豬苓多糖（Polyporus umbellatuspolysaccharides，PUP）對(duì)免疫功能的單一的報(bào)道很多，而將二者合用或綜合討論的報(bào)道較少。本文將對(duì)食用菌多糖的免疫活性進(jìn)行簡(jiǎn)要介紹，總結(jié)概括靈芝多糖和豬苓多糖的免疫調(diào)節(jié)功能及作用機(jī)制，并簡(jiǎn)要闡述關(guān)于靈芝多糖和豬苓多糖復(fù)方的研究進(jìn)展，為靈芝多糖和豬苓多糖在免疫功能方面的研發(fā)和應(yīng)用提供指導(dǎo)。

1 食用菌及其多糖的免疫活性

食用菌是指可食用的大型真菌，俗稱蘑菇，絕大多數(shù)屬于擔(dān)子菌亞門。食用菌具有形態(tài)各異的子實(shí)體，能夠生長(zhǎng)于地表和地下，裸眼可見，可被采集[1]。目前已知在世界各地分布著約有15 000 種蘑菇，約有650 種被報(bào)道具有藥用價(jià)值[2]。研究表明，食用菌富含蛋白質(zhì)（＞20%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同）），而脂肪含量卻很低（＜3%），脂肪主要為多元不飽和脂肪酸（72%～85%），同時(shí)也富含必需氨基酸（如賴氨酸和亮氨酸等）以及富含維生素（如硫胺酸（VB1）、核黃素（VB2）、煙酸、生物素、葉酸和抗壞血酸等[3-4]），除此之外，食用菌還富含各種礦物質(zhì)（如鎂、鈣、銅、鐵、鋅等）。糖類在食用菌中的含量占有較大的比例，除葡萄糖、幾丁質(zhì)、海藻糖和甘露糖外，還含有纖維素、β-葡聚糖、半纖維素及果糖等碳水化合物[5-8]。由于食用菌含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，不僅能作為一種健康的食物來源，也可以作為優(yōu)質(zhì)的原料用于功能性食品、保健品及藥物的研發(fā)[4,8]。

在一些文化中，食用菌也被作為傳統(tǒng)藥物用于治療各種疾病，如治療糖尿病、癌癥以及強(qiáng)化免疫系統(tǒng)功能。食用菌像一個(gè)小型的制藥工廠，能夠產(chǎn)生各種有活性的生物大分子[8-9]，在過去幾十年，針對(duì)食用菌藥理活性的研究快速增長(zhǎng)。同時(shí)，隨著對(duì)腫瘤發(fā)生及代謝研究的深入，使這些生物大分子作為抗腫瘤藥物也成為了可能[10]。目前從食用菌中發(fā)現(xiàn)的藥用功能超過100 種，主要有抗氧化、抗癌、治療糖尿病、抗過敏、免疫調(diào)節(jié)、心血管保護(hù)、抗病毒、抗菌和寄生蟲、解毒以及肝臟保護(hù)等[11-13]，其中抵抗腫瘤的發(fā)生以及免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)功能受到了密切的關(guān)注。在中國(guó)和日本，部分藥用菌已經(jīng)被用作治療癌癥的輔助藥物，已有30 年的使用歷史。這些藥用菌安全性高，單一用藥或聯(lián)合放化療藥物治療癌癥均具有很好療效。菌類對(duì)免疫反應(yīng)途徑和直接抗腫瘤的機(jī)制已被證實(shí)。菌類通過刺激天然免疫細(xì)胞，如單核細(xì)胞、自然殺傷（natural killer，NK）細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞（dendritic cells，DC）來調(diào)節(jié)免疫效果。這種活性通常被認(rèn)為是蘑菇中存在高分子質(zhì)量多糖，盡管其他成分也可能參與其中[14]。

食用菌能夠合成多種生物活性分子，主要有多糖、苷類、生物堿類、揮發(fā)油、萜類、酚類、酚醛類、黃酮類、類胡蘿卜素、凝集素、有機(jī)酸等。其中多糖類在目前的研究中最受歡迎，研究發(fā)現(xiàn)β-葡聚糖具有多種生物學(xué)功能[15-16]。從食用菌中能夠獲得許多具有生物活性的多糖或多糖蛋白復(fù)合物，通過研究發(fā)現(xiàn)，其能夠增強(qiáng)初次免疫和細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，在人和動(dòng)物體中表現(xiàn)出抗腫瘤的活性。食用菌中的多種大分子具有免疫調(diào)節(jié)的功能，能夠破壞腫瘤細(xì)胞，抑制腫瘤生長(zhǎng)。目前在亞洲已經(jīng)有多種來自食用菌中的多糖通過了臨床實(shí)驗(yàn)，被成功地用于治療各種腫瘤和疾病[17]。

在中國(guó)，對(duì)于食用菌的利用具有悠久的歷史。中國(guó)具有國(guó)土面積大、地形地貌復(fù)雜、氣候特征多樣等特征，分布著許多種類的食用菌。這些食用菌不僅可以作為食物來源，而且也是重要的藥用成分。在古代，靈芝和豬苓等菌類便被作為傳統(tǒng)藥物來使用。雖然食用菌具有寶貴的利用價(jià)值，但是目前也面臨著許多問題。許多野生菌類無法在人工條件下大量繁殖[18]；由于加工條件的限制，食用菌中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)也不能得到較好的保存和利用。在藥用方面，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)踐依靠高純度的藥物分子，通過研究藥物的活性以及毒性，對(duì)其構(gòu)效關(guān)系有徹底的了解，而食用菌中的藥用成分通常包含多種物質(zhì)，使其機(jī)制無法得到全面的研究[19]。由于這一特點(diǎn)，食用菌中活性物質(zhì)的分離純化技術(shù)需要得到重視，同時(shí)對(duì)活性物質(zhì)發(fā)揮的生物學(xué)功能也需要進(jìn)行深入的研究。

大量的研究表明，食用菌多糖具有廣泛的生物活性，如抗腫瘤、抗菌、抗氧化、抗病毒、抗糖尿病、降血脂和免疫調(diào)節(jié)活性等[20]，但是多糖的免疫調(diào)節(jié)活性被認(rèn)為是最重要的生物活性[21]。從天然植物中提取的多種多糖被證明參與機(jī)體先天性免疫和獲得性免疫的過程，對(duì)各種重要的免疫器官、免疫細(xì)胞及免疫因子都有調(diào)節(jié)作用。這類多糖能參與巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞、DC等活性調(diào)節(jié)過程、與細(xì)胞表面特異性受體結(jié)合，從而激活細(xì)胞內(nèi)各種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，促進(jìn)細(xì)胞因子或抗體的生成，從而多層次、多通道、多靶點(diǎn)地調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能[22]。盡管真菌多糖這種生物活性的確切機(jī)理還在研究中，但是其分子結(jié)構(gòu)、分子質(zhì)量和鏈構(gòu)象被普遍認(rèn)為是影響其活性的重要因素[23]。

天然類多糖因其毒副作用小而備受關(guān)注。一些結(jié)構(gòu)確定的多糖物質(zhì)如香菇多糖、舞菇多糖等已應(yīng)用與臨床實(shí)驗(yàn)。在醫(yī)藥方面，一些多糖類產(chǎn)品已被廣泛用作癌癥放療和化療的佐劑、抗生素及疫苗等[15]。在食品方面，多糖類通常作為營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑或膳食補(bǔ)充劑來調(diào)節(jié)免疫功能及促進(jìn)人類健康[24]。多種多糖產(chǎn)品已經(jīng)投入市場(chǎng)，造福人類，特別是在醫(yī)療方面的應(yīng)用，挽救了很多患者的生命，因此多糖正逐漸成為新藥開發(fā)的重要方向[4,20,25]。

2 靈芝及其多糖的免疫功能

靈芝又名芝草、瑞草、仙草，屬于擔(dān)子菌綱、多孔菌科、靈芝屬真菌。中國(guó)古代醫(yī)學(xué)學(xué)者認(rèn)為，靈芝具有增強(qiáng)機(jī)體抵抗力，鞏固患者體質(zhì)，即“扶正固本”的作用。長(zhǎng)期以來，靈芝在我國(guó)被用于防治支氣管炎、肝炎、高血壓、腫瘤、免疫紊亂等多種人類疾病。目前靈芝已收錄入《國(guó)家藥典》，被正式批準(zhǔn)為新資源食品。現(xiàn)代研究表明，靈芝菌絲和孢子中含有大約400 種不同活性物質(zhì)，主要包括多糖、三萜、蛋白質(zhì)、酶、類固醇、甾醇、核苷酸、脂肪酸、維生素和礦物質(zhì)等[26]。其中靈芝多糖被認(rèn)為是其主要活性成分之一，近年來以其獨(dú)特的活性功能贏得了廣泛的關(guān)注。

靈芝多糖是靈芝孢子各成分中含量最大的成分。自1971年從靈芝中分離出第一個(gè)具有抗腫瘤的支鏈多糖以來，隨后又從不同靈芝種類的子實(shí)體中提取出了各種生物活性多糖。目前有200多種多糖已從靈芝子實(shí)體、菌絲和孢子中被分離并鑒定，然而還有一些新的靈芝多糖正通過現(xiàn)代分析化學(xué)的方法被發(fā)現(xiàn)。從靈芝中分離的多糖包含葡萄糖、甘露糖、半乳糖、海藻糖、木糖、阿拉伯糖等不同組合，且與蛋白質(zhì)或多肽通過糖苷鍵連接[27]。先前的研究主要集中在靈芝多糖的抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)活性，其抗氧化等活性也受到了深入的研究。靈芝多糖的免疫調(diào)節(jié)功能與靈芝多糖的初級(jí)結(jié)構(gòu)、鏈構(gòu)象和溶解性的關(guān)系也有少量研究，然而，靈芝多糖的高級(jí)結(jié)構(gòu)至今還不清楚，同時(shí)其結(jié)構(gòu)與生物活性的關(guān)系也未知。

據(jù)統(tǒng)計(jì)，靈芝多糖生物活性作用廣泛，目前已被報(bào)道的生物活性作用有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗腫瘤、降血糖、降血脂、抗肌炎、抗輻射、保護(hù)心臟、鎮(zhèn)靜、催眠、緩解腰痛、抗抑郁、抗菌、促進(jìn)血液循環(huán)、止血、保肝、抗面癱、抗鏈脲霉素誘導(dǎo)的糖尿病腎病、抗衰老、抗博萊霉素誘導(dǎo)的肺纖維化、抗慢性胰腺炎等[26]。其中靈芝多糖免疫調(diào)節(jié)作用，在開發(fā)保健品，提高人體免疫功能的應(yīng)用上具有非常好的應(yīng)用前景。

目前，國(guó)際上學(xué)者們普遍認(rèn)同靈芝的免疫調(diào)節(jié)功能是其多種藥理作用的基礎(chǔ)。多種體內(nèi)及體外研究表明，靈芝多糖是一種有效的免疫調(diào)節(jié)劑，能夠全面且有效地影響免疫細(xì)胞，包括B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞和DC的功能，同時(shí)釋放多種趨化因子、細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子，從而調(diào)節(jié)機(jī)體先天性免疫和適應(yīng)性免疫。靈芝多糖可能通過對(duì)免疫細(xì)胞綜合作用而產(chǎn)生強(qiáng)大的免疫調(diào)節(jié)功能，并有可能是其抗腫瘤作用的潛在機(jī)制之一[28]。

大量研究表明，靈芝多糖能夠增加巨噬細(xì)胞的吞噬能力并促進(jìn)細(xì)胞因子分泌。在早期的研究中發(fā)現(xiàn)，靈芝的水提取物靈芝多糖通過灌胃的方式給藥能顯著增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞對(duì)雞紅細(xì)胞的吞噬作用[29]。You Yuhong等[30]通過體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，靈芝多糖多肽能抑制叔丁基過氧化氫造成的巨噬細(xì)胞損傷，提高巨噬細(xì)胞的存活率。Li Mingchun等[31]研究表明，靈芝多糖能顯著增加由小鼠腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-1α和腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）-α水平。靈芝多糖處理巨噬細(xì)胞或T淋巴細(xì)胞時(shí)，TNF-α及干擾素（interferon，IFN）-γ水平顯著增加[32]。Guo Liang等[33]提取出的一種水溶性的靈芝多糖能誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌TNF-α和IL-6，并且能夠增強(qiáng)小鼠脾細(xì)胞增殖反應(yīng)及其抗Lewis肺癌的活性。Berovic等[34]發(fā)現(xiàn)一種主要含有β-葡聚糖的靈芝多糖能誘導(dǎo)原代培養(yǎng)的人源外周血單核細(xì)胞分泌TNF-α。靈芝多糖也能促進(jìn)巨噬細(xì)胞分化，且促進(jìn)一氧化氮的釋放[34]。此外，用一定質(zhì)量濃度（25～400 mg/L）的靈芝多糖處理巨噬細(xì)胞能夠增加TNF-αmRNA的表達(dá)[32]。

靈芝多糖也能通過其他方式調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的免疫功能，如靈芝多糖能夠減少巨噬細(xì)胞產(chǎn)生氧自由基，并促進(jìn)鈣離子的轉(zhuǎn)運(yùn)。有研究表明，靈芝多糖可能通過增加中性粒細(xì)胞的蛋白激酶C、絲裂原激活的蛋白激酶/MAP激酶以及各種酪氨酸激酶的活性來增強(qiáng)非特異性免疫[35]。除此之外，靈芝多糖能夠劑量依賴性地增加人原代中性粒細(xì)胞的噬菌作用和遷移能力，并通過激活蛋白激酶B調(diào)節(jié)信號(hào)通路來抑制中性粒細(xì)胞凋亡[36]。

DC是一種專門的抗原呈遞細(xì)胞，它能通過激活初始T細(xì)胞來啟動(dòng)免疫應(yīng)答，在細(xì)胞免疫中起著重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，靈芝多糖能增加培養(yǎng)中骨髓來源的DC表面CD11c的表達(dá)，并增加細(xì)胞因子IL-12p40 mRNA的表達(dá)[37]。靈芝多糖能促進(jìn)成熟DC與混合淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)的淋巴細(xì)胞增殖，表明靈芝多糖不僅能促進(jìn)體外鼠骨髓源性DC的成熟，還能促進(jìn)DC誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答啟動(dòng)[37]。靈芝多糖可能通過IFN-γ和顆粒酶B通路，在抗原呈遞階段促進(jìn)DC誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞[38]。

NK細(xì)胞是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，其對(duì)靶細(xì)胞具有直接殺傷作用。然而NK細(xì)胞對(duì)腫瘤的直接殺傷作用能被腫瘤細(xì)胞表面纖維蛋白所減弱，而有研究表明，靈芝多糖提取物能夠抑制纖維蛋白對(duì)黑色素瘤的黏附作用，從而阻斷腫瘤細(xì)胞表面纖維蛋白對(duì)NK細(xì)胞的抑制[39]。另外一項(xiàng)研究表明，從靈芝多糖中提取的一種含有巖藻糖成分的糖蛋白物質(zhì)能增加人類臍帶血單核細(xì)胞中NK細(xì)胞表面標(biāo)記物CD56的含量，從而增強(qiáng)NK細(xì)胞活性[40]。

T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞是后天免疫的重要組成部分，T淋巴細(xì)胞主要介導(dǎo)細(xì)胞免疫，B淋巴細(xì)胞主要介導(dǎo)體液免疫。研究發(fā)現(xiàn)，靈芝多糖能夠刺激體外培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞或T淋巴細(xì)胞呈劑量依賴和時(shí)間依賴地釋放TNF-α和INF-γ[32]。Gao Yihuai等[41]研究表明，靈芝多糖能夠顯著增加小鼠細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷力以及NK細(xì)胞的活性。Bao Xingfeng等[42]報(bào)道，靈芝多糖在體外對(duì)T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞有不同程度地促進(jìn)增殖作用。靈芝多糖還能促進(jìn)脾細(xì)胞增殖以及細(xì)胞因子如IL-1α、IL-1β、IFN-γ、TNF-α和TNF-β的產(chǎn)生[43]。有研究指出，將靈芝多糖包埋在脂質(zhì)體中能增強(qiáng)小鼠抗原特異性免疫應(yīng)答，與普通接種脂質(zhì)體的小鼠相比，接種靈芝多糖-脂質(zhì)體的小鼠通過顯著激活脾細(xì)胞和CD3+CD4+及CD3+CD8+T細(xì)胞來提高免疫球蛋白G（immunoglobulin G，I g G）抗性，促進(jìn)脾細(xì)胞增殖以及細(xì)胞因子的分泌[44]。此外，有研究團(tuán)隊(duì)從靈芝中提取了一種糖蛋白物質(zhì)（碳水化合物與蛋白質(zhì)量比為11.5∶1.0）能顯著促進(jìn)脾細(xì)胞增殖，且能增加B細(xì)胞表面CD71和CD25的表達(dá)及增加IgG的分泌[45]。上述研究表明，靈芝多糖具有免疫增強(qiáng)的作用。

3 豬苓及其多糖的免疫功能

豬苓又稱豬茯苓，屬于擔(dān)子菌綱、多孔菌科的食藥兩用真菌。豬苓有治療瘧疾、解毒、通利水道、延年益壽的作用。在中醫(yī)臨床上常用于治療全身水腫、急性腎炎、腹瀉等疾病，在日本、印度等國(guó)家豬苓也常作為傳統(tǒng)藥材治療水腫。近年來，科學(xué)家們利用現(xiàn)代生物技術(shù)，從豬苓中分離出多種活性成分，如甾體類、多糖、生物素類、蛋白質(zhì)、萜類、蒽醌類、氨基酸等，這些成分具有廣泛的生物活性作用，如免疫增強(qiáng)、利尿、抗腫瘤、抗炎、抗氧化、肝保護(hù)、腎保護(hù)、抑菌、抗突變、抗輻射、促進(jìn)頭發(fā)生長(zhǎng)等作用。其中多糖作為其主要有效成分，生物活性廣泛，具有很好的開發(fā)前景。

人們對(duì)豬苓多糖研究已有40多年歷史，自1973年日本科學(xué)家從豬苓菌核中分離出多糖以來，對(duì)豬苓多糖的提取工藝不斷改進(jìn)，對(duì)其生物活性作用進(jìn)行了更深刻的研究，并已將豬苓多糖應(yīng)用于臨床。豬苓多糖多為水溶性多糖，以雜多糖為主，主要由D-巖藻糖、D-木糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖和L-鼠李糖等單糖組成。目前已證明，豬苓多糖具有多種藥理作用，如抗腫瘤、抗病毒、抗炎、增強(qiáng)免疫力、抗氧化、防輻射、肝保護(hù)等。臨床上，豬苓多糖常與其他藥物如乙肝疫苗、干擾素、拉米夫定、乙型肝炎免疫核糖核酸等聯(lián)合治療慢性乙型肝炎。除此之外，豬苓多糖具有減輕化療藥物所引起的副作用并增強(qiáng)化療藥物療效的作用，常與一些化療藥物聯(lián)合治療肺癌及食道癌等[46]。

豬苓多糖對(duì)免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用得到了廣泛的證實(shí)。目前豬苓多糖已被制備成注射液以及膠囊，用于調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，與抗腫瘤化療藥物聯(lián)用以增強(qiáng)化療藥物的療效并減少其毒副作用[47]。許多研究表明，豬苓多糖是一種有效的免疫增強(qiáng)劑，對(duì)機(jī)體非特異性和特異性免疫均有調(diào)節(jié)作用，豬苓多糖對(duì)免疫調(diào)節(jié)作用也可能與其抗癌作用機(jī)制相關(guān)。簡(jiǎn)而言之，豬苓多糖在開發(fā)提高機(jī)體免疫力方面具有非常廣闊的應(yīng)用前景。

在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中，機(jī)體免疫能力降低與腫瘤細(xì)胞分泌免疫抑制物有關(guān)。在早期研究中發(fā)現(xiàn)，豬苓多糖能夠通過下調(diào)S180細(xì)胞免疫抑制物質(zhì)的合成或分泌，降低S180細(xì)胞培養(yǎng)上清液的免疫抑制作用[48]。Li Xinqun等[49]研究報(bào)道，豬苓多糖能夠誘導(dǎo)小鼠骨髓源性DC的表型和功能。在該研究中，豬苓多糖上調(diào)DC的CD86的表達(dá)，并促進(jìn)IL-12p40和IL-10的產(chǎn)生。而豬苓多糖誘導(dǎo)IL-12p40的作用能被Toll樣受體4（Toll-like receptor 4，TLR4）的單克隆抗體所阻斷。通過流式細(xì)胞技術(shù)發(fā)現(xiàn)熒光標(biāo)記的豬苓多糖與DC特異性結(jié)合，而這種結(jié)合被未標(biāo)記的豬苓多糖和抗TLR4抗體阻斷。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明靈芝多糖可能通過TLR4促進(jìn)小鼠DC的活化和成熟。此外，該團(tuán)隊(duì)還發(fā)現(xiàn)豬苓多糖能夠上調(diào)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的功能，促進(jìn)NO、TNF-α和IL-1β產(chǎn)生[50]。而豬苓多糖促進(jìn)細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β產(chǎn)生能被TLR4單克隆抗體阻斷。同樣通過流式細(xì)胞技術(shù)發(fā)現(xiàn)熒光標(biāo)記的豬苓多糖與巨噬細(xì)胞特異性結(jié)合，而這種結(jié)合被未標(biāo)記的豬苓多糖和抗TLR4抗體阻斷。這些研究表明，豬苓多糖可能通過激活TLR4信號(hào)通路來刺激DC和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生免疫應(yīng)答作用。Lu等[51]通過體外實(shí)驗(yàn)表明，一定劑量的豬苓多糖能增加大鼠腸黏膜外周單核細(xì)胞上清液中TNF-α和IFN-γ的含量，但也能降低大鼠腸黏膜固有層淋巴細(xì)胞上清液中TNF-α和IFN-γ含量，說明豬苓多糖可調(diào)節(jié)腸黏膜免疫系統(tǒng)淋巴細(xì)胞的功能。也有研究報(bào)道，從豬苓中提取的一種分子質(zhì)量為2.27×103kDa的豬苓多糖在體外實(shí)驗(yàn)中能激活B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞，促進(jìn)IgM的分泌[52]。江澤波等[53]研究表明，豬苓多糖能夠誘導(dǎo)M2亞型巨噬細(xì)胞向M1亞型巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，顯著提高M(jìn)1亞型巨噬細(xì)胞特異性指標(biāo)CD16/32、CD40的陽性表達(dá)率，并促進(jìn)IL-1β和TNF-α分泌，從而提高巨噬細(xì)胞的免疫功能；用豬苓多糖處理、重組人巨噬細(xì)胞集落刺激因子誘導(dǎo)的人M2亞型巨噬細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，豬苓多糖能明顯抑制PD-1、CD206的表達(dá)，升高M(jìn)HC-II、CD86的表達(dá)，并刺激IL-8、IL-6、IL-10、IL-1β、TNF-α炎性因子大量分泌，且能抑制M2亞型巨噬細(xì)胞的黏附和偽足生成[54]。此外，有研究報(bào)道，豬苓多糖能夠介導(dǎo)巨噬細(xì)胞釋放IL-12間接激活NK細(xì)胞，并促進(jìn)NK細(xì)胞分泌TNF-α及IFN-γ[55]。

4 靈芝和豬苓合用的相關(guān)研究

靈芝和豬苓作為傳統(tǒng)藥物來治療疾病、調(diào)節(jié)機(jī)體平衡已有數(shù)千年歷史。《神農(nóng)本草經(jīng)》是最早記載靈芝和豬苓的古代醫(yī)書。該書將藥物分為上、中、下三品，靈芝被列為“上品”，通常被當(dāng)作“君藥”使用，豬苓被列為“中品”，通常被當(dāng)作“臣藥”使用。《中國(guó)藥典》中記載，“靈芝味甘性平，歸心、肺、肝腎經(jīng)，主補(bǔ)氣安神，止咳平喘；豬苓味甘、淡，性平，歸腎和膀胱經(jīng)，主利水滲濕”[56]。靈芝和豬苓配伍，靈芝為君，具有滋補(bǔ)強(qiáng)壯，扶正固本之意，豬苓為臣，利水滲濕，使靈芝補(bǔ)而不滯，二者配伍具有補(bǔ)中有瀉，補(bǔ)而不助邪，瀉而不傷正的特點(diǎn)。近現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，靈芝和豬苓常與其他中藥配伍而產(chǎn)生不同的新的藥理作用。賀玉蓮[57]研究制定出含有靈芝和豬苓的中藥復(fù)方，“豬苓解毒丸”能夠顯著提高大腸癌患者的生活質(zhì)量。蘇亞秦等[58]研究含有靈芝和豬苓的中成藥“心脈復(fù)康膠囊”具有降血脂、降血黏度、抗血栓形成、擴(kuò)張血管及增強(qiáng)機(jī)體免疫力的作用。經(jīng)食品藥品監(jiān)督管理局審批的兩種保健品“瑞欣膠囊”和“三奇堂牌欣欣茶”均同時(shí)含有靈芝和豬苓的提取物，均對(duì)化學(xué)性肝損傷有輔助保護(hù)作用。此外，還有許多與靈芝和豬苓相關(guān)的專利已得到專利局授權(quán)，有多種活性作用，如輔助治療慢性腎功能衰竭、真菌感染、肝炎等[59-61]。這些研究表明，靈芝、豬苓與其他中藥配伍，相互協(xié)調(diào)可以有不同的治療效果。Kim等[62-64]從靈芝和豬苓融合菌絲體中提取到一種混合物并命名為Khz，發(fā)現(xiàn)Khz通過增加活性氧的含量、增加細(xì)胞內(nèi)鈣離子的含量、降低線粒體膜電位等，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的同時(shí)具有抗增殖作用，Khz的抗腫瘤作用表明其可能成為一種潛在的抗癌藥物。

近期有研究報(bào)道，靈芝多糖和豬苓多糖合用能顯著提高小鼠先天性免疫功能[65]。在該報(bào)道中，研究者依據(jù)中醫(yī)基礎(chǔ)理論將靈芝多糖和豬苓多糖以質(zhì)量比3∶1組成復(fù)方，命名為GPP（Ganoderma lucidumandPolyporus umbellatuspolysaccharides）。對(duì)巨噬細(xì)胞而言，吞噬作用是機(jī)體防衛(wèi)外來異物侵入的主要機(jī)制之一，也是巨噬細(xì)胞主要功能之一[66]。研究者用不同濃度的靈芝多糖、豬苓多糖和GPP刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞系RAW264.7，用巨噬細(xì)胞吞噬中性紅的程度來評(píng)價(jià)GPP對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響，用Griess染色法探究GPP對(duì)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，GPP與單用靈芝多糖組比，有增加巨噬細(xì)胞吞噬中性紅和釋放NO能力的趨勢(shì)[66]。此外，同等劑量下，GPP與單用豬苓多糖組比，顯著增強(qiáng)了巨噬細(xì)胞吞噬的能力及產(chǎn)生NO的能力。此外研究者通過反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法檢測(cè)了與一氧化氮產(chǎn)生密切相關(guān)的iNOSmRNA表達(dá)。結(jié)果表明，GPP組中iNOSmRNA表達(dá)顯著高于單用靈芝多糖組和豬苓多糖組，說明GPP可以顯著提高iNOSmRNA表達(dá)[66]。該研究發(fā)現(xiàn)GPP對(duì)IL-6mRNA表達(dá)量無明顯影響。然而，GPP顯著增加了TNF-α的mRNA的表達(dá)。若M1亞型巨噬細(xì)胞不斷增強(qiáng)，將導(dǎo)致組織損傷。此時(shí)M2亞型巨噬細(xì)胞分泌大量IL-10、精氨酸酶-1等抗炎因子抑制炎癥，促進(jìn)組織修復(fù)重建和血管生成，維持體內(nèi)平衡[67]。GPP能顯著促進(jìn)抗炎因子IL-10mRNA表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，GPP可以從多個(gè)角度調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的免疫功能，總體增強(qiáng)了M1亞型巨噬細(xì)胞的功能。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，GPP還顯著增強(qiáng)了小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬功能和NK細(xì)胞的活性。基于以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，研究者推測(cè)GPP對(duì)小鼠先天免疫功能有一定的調(diào)節(jié)作用[65]，但未闡明GPP的作用機(jī)制，后續(xù)研究可能將腸道菌群與免疫調(diào)節(jié)作用相聯(lián)系。

5 結(jié) 語

免疫系統(tǒng)是人體抵抗疾病的第一道屏障，因此免疫調(diào)節(jié)劑在現(xiàn)代保健行業(yè)中占有重要地位。免疫調(diào)節(jié)物質(zhì)通常被劃分為免疫激活劑、免疫抑制劑和免疫佐劑3 類。在過去幾年中，免疫調(diào)節(jié)劑的市場(chǎng)正在不斷擴(kuò)大。免疫調(diào)節(jié)劑不僅可用于臨床疾病的治療，也被用作膳食補(bǔ)充劑在亞健康人群中使用[15]。食用菌因其種類多樣、生物活性獨(dú)特的特點(diǎn)，在開發(fā)增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的食品補(bǔ)充劑方面具有明顯優(yōu)勢(shì)。目前對(duì)于食用菌多糖的研究主要集中在其免疫調(diào)節(jié)功能。但多數(shù)外源性多糖類物質(zhì)不能被機(jī)體直接吸收，現(xiàn)有研究表明，多糖類物質(zhì)可能通過與腸道菌群相互作用，從而對(duì)機(jī)體產(chǎn)生局部或全身的調(diào)節(jié)作用。因此，通過口服的多糖類物質(zhì)可能對(duì)機(jī)體腸道菌群具有一定的調(diào)節(jié)作用。

靈芝和豬苓均富含多糖類、甾體類、生物素類、蛋白質(zhì)類、萜類、蒽醌類等多種生物活性物質(zhì)，具有廣泛的利用價(jià)值。其中，多糖作為含量最高的物質(zhì)，其免疫調(diào)節(jié)作用受到了國(guó)內(nèi)外研究者的關(guān)注。對(duì)于靈芝多糖的研究較多，表明靈芝多糖對(duì)巨噬細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、抗原呈遞細(xì)胞和NK細(xì)胞均表現(xiàn)出直接或間接的刺激作用，整體表現(xiàn)出免疫增強(qiáng)的功能。對(duì)豬苓多糖的免疫調(diào)節(jié)功能的研究較少，但也表明其對(duì)免疫系統(tǒng)有增強(qiáng)的作用。靈芝多糖和豬苓多糖均能通過分泌細(xì)胞因子來調(diào)節(jié)免疫功能。靈芝多糖與豬苓多糖對(duì)各種免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用見圖1。

圖 1 靈芝多糖與豬苓多糖對(duì)免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)[28-30,34-35,37,40-42,46-48,51-52]Fig. 1 Regulation of Ganoderma lucidum polysaccharides and Polyporus umbellatus polysaccharides on immune cells[28-30,34-35,37,40-42,46-48,51-52]

由于多糖的結(jié)構(gòu)復(fù)雜，不同來源的多糖對(duì)不同類型的免疫細(xì)胞的刺激程度可能有所差別，在過去的研究中，對(duì)于同一來源多糖的免疫調(diào)節(jié)功能研究較多，但對(duì)于不同來源多糖的不同配比對(duì)免疫系統(tǒng)的功能研究較少，因此，通過調(diào)節(jié)不同來源多糖的配比，可能會(huì)使多糖的免疫調(diào)節(jié)功能產(chǎn)生更顯著的效果。其次，多糖由于其結(jié)構(gòu)復(fù)雜，成分不單一等特點(diǎn)，使其作為藥物用于發(fā)揮免疫佐劑或腫瘤治療的功能有一定難度，但是由于食用菌多糖來源的廣泛性以及安全性，食用菌多糖作為保健藥品，用于調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能，增強(qiáng)自身免疫力，具有良好的應(yīng)用前景。因此，基于食用菌多糖的多樣性、豐富性、安全性和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值等特點(diǎn)，對(duì)于食用菌多糖的開發(fā)擁有巨大的價(jià)值。