非洲馬瘟概況綜述

吳顥　趙靜　肖冉　王巧娜　阮征

摘要：介紹了非洲馬瘟病原學(xué)、流行病學(xué)、臨床癥狀、病理變化、診斷及疫苗研究情況，分析了非洲馬瘟防控現(xiàn)狀，提出了防控非洲馬瘟的目標(biāo)及措施，為我國(guó)防范非洲馬瘟疫情提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞：馬瘟;非洲馬瘟病毒;防控

中圖分類號(hào)：S858.21 ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ? ? ? ?文章編號(hào)：1007-273X（2020）08-0008-03

非洲馬瘟（African horse sickness， AHS）是由非洲馬瘟病毒（African horse sickness virus， AHSV）感染馬屬動(dòng)物引起的一種急性或亞急性非接觸的蟲媒介傳染病[1]。普遍認(rèn)為AHS原發(fā)于非洲，庫(kù)蠓是其傳播媒介[2]，以擬蚊庫(kù)蠓（Culicoides imicola）為主。該病病程短、死亡率高，有明顯的季節(jié)性和地域性，多見(jiàn)于溫?zé)岢睗窦竟?jié)，在非洲撒哈拉沙漠以南是地方性流行病。世界衛(wèi)生組織（OIE）將其列為A 類動(dòng)物疫病，我國(guó)將其列為一類動(dòng)物疫病。馬屬動(dòng)物感染后的臨床癥狀根據(jù)種類不同而不同，主要表現(xiàn)為發(fā)熱、皮下水腫和病毒血癥，嚴(yán)重時(shí)伴有組織和臟器出血。馬最易感，病死率可達(dá)95%，相反斑馬和驢感染后幾乎不表現(xiàn)出臨床癥狀。近年來(lái)周邊國(guó)家頻頻出現(xiàn)AHS疫情，同時(shí)我國(guó)也存在超過(guò)300種庫(kù)蠓屬昆蟲，為AHS在我國(guó)暴發(fā)提供了條件。如何有效預(yù)防AHS是我國(guó)面臨的全新挑戰(zhàn)。

1 ?病原學(xué)

AHSV是呼腸孤病毒科（Reoviri-dae）環(huán)狀病毒屬（Orbivirus）的成員，環(huán)狀病毒屬還包括藍(lán)舌病病毒（Bluetongue virus， BTV）、流行性出血熱病毒（Epizootic hemorrhagic disease virus，EHDV）以及馬器質(zhì)性腦病病毒（Equine encephalitis virus，EEV）。其中AHSV與EEV和BTV較為相似[1]。

AHSV病毒顆粒直徑約為75 nm，主要由衣殼（Capsid）、內(nèi)膜（Inner envelop）、內(nèi)核心殼（Core shell）和病毒基因組（Genome）構(gòu)成[2]。32個(gè)殼粒構(gòu)成衣殼雙層20面立體對(duì)稱結(jié)構(gòu)，基因組為10個(gè)長(zhǎng)短不等的雙鏈RNA 片段，3個(gè)長(zhǎng)片段L1～L3;3個(gè)中等片段M4～M6;4個(gè)短片段S7～S10。分別編碼結(jié)構(gòu)蛋白VP1～VP7及非結(jié)構(gòu)蛋白NS1～NS3和 NS3A。蛋白VP1、VP3、VP4、VP6、VP7構(gòu)成內(nèi)衣殼。蛋白VP2、VP5構(gòu)成外衣殼[3]。3個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白（NS1、NS2和NS3/3A）主要存在于受感染的細(xì)胞中[4]。

AHSV病毒有9個(gè)抗原性不同的血清型（AHSV 1～9），但在血清學(xué)試驗(yàn)或疫苗免疫上經(jīng)常出現(xiàn)某些交叉反應(yīng)[5]。1型至8型只存在于撒哈拉沙漠以南的部分地區(qū)，但20世紀(jì)90年代在西班牙和葡萄牙暴發(fā)的AHS是由4型引起的。9型分布最為廣泛，在非洲之外也有流行。2019年，斯威士蘭、乍得向OIE報(bào)告發(fā)生非洲馬瘟疫情，2020年泰國(guó)向OIE報(bào)告發(fā)生非洲馬瘟疫情，都疑似由9型引起的。

AHSV病毒對(duì)酸堿度較為敏感，pH低于6.0易失活，pH 3.0迅速失活，pH 7.0～8.5則保持活性。對(duì)乙醚、氯仿等有一定的抵抗力，還能抗胰蛋白酶，但在0.1%甲醛溶液中48 h即可被滅活。不耐高溫，于60 ℃ 30 min即失活。

AHSV病毒在血液或血清中可長(zhǎng)期存活，在4 ℃或室溫條件下甚至可存活多年。即使載體腐敗，病毒仍能存活。病毒經(jīng)Parker培養(yǎng)基培養(yǎng)后，凍干或-70 ℃冷凍保存，復(fù)蘇后保持較高活性，但在（-50）～（-20） ℃極易失活[6]。

2 ?流行病學(xué)

2.1 ?流行現(xiàn)狀和地理分布

目前，AHSV 在撒哈拉沙漠南部的非洲熱帶和亞熱帶地區(qū)呈地方性流行，范圍很廣，西起塞內(nèi)加爾、埃塞俄比亞，東至索馬里，并且向南擴(kuò)展至南非北部[7，8]。后傳播到北非、中東、阿拉伯半島、西南亞和地中海區(qū)域國(guó)家。1987—1990年，傳播至西班牙、葡萄牙。2020年3月泰國(guó)也暴發(fā)非洲馬瘟疫情，目前它在亞洲的流行病學(xué)情況還不清楚。

2.2 ?傳染源、易感動(dòng)物和傳播途徑

自然條件下，斑馬是AHSV的天然宿主，但其基本不表現(xiàn)臨床癥狀，在病毒傳播中主要作為傳染源。馬屬動(dòng)物及其雜交種都是易感動(dòng)物，馬尤其是幼齡馬最為易感;騾較易感;驢具有耐受性。AHSV主要依靠蟲媒介傳播，由庫(kù)蠓類昆蟲叮咬在易感動(dòng)物間傳播，其中擬蚊庫(kù)蠓是最重要的傳播媒介。伊蚊、蟄蠅、按蚊等吸血昆蟲也可傳播。我國(guó)存在的藍(lán)舌病也由此類蟲媒傳播，表明AHSV在我國(guó)傳播有成熟條件。

3 ?臨床表現(xiàn)

AHSV自然感染的潛伏期一般為5～7 d，根據(jù)引起臨床癥狀的不同可分為發(fā)熱型、心型、肺型和混合型[8]。

發(fā)熱型是最輕型，通常只有溫和到中等程度的發(fā)熱和眶上窩水腫，無(wú)死亡，病程短，很快恢復(fù)正常。多發(fā)生在低毒力株病毒感染，或是發(fā)生于具有一定抵抗力的感染動(dòng)物，是斑馬惟一能表現(xiàn)出來(lái)的癥狀類型[9]。

心型呈亞急性型，以持續(xù)幾周的發(fā)熱為特征。病程發(fā)展很慢，有部分病例可恢復(fù)。主要的臨床表現(xiàn)是皮下水腫，表現(xiàn)為頭部、頸部皮下水腫，發(fā)熱，上眼瞼、口唇和腭等部位腫脹，并向胸、肩及腹部擴(kuò)展。發(fā)生水腫的部位不會(huì)低于四肢。有時(shí)結(jié)膜充血，眼中有出血點(diǎn)，舌的腹側(cè)面可能有出血斑。常伴有腹痛癥狀，致死率超過(guò)50%[2]。瀕死期病馬有呼吸頻率增加、倒地橫臥、肌肉震顫、出汗等表現(xiàn)。

肺型呈極急性經(jīng)過(guò)，發(fā)展非?？?，多見(jiàn)于流行初期或新發(fā)病的地區(qū)。通常有明顯的精神沉郁和發(fā)熱（40～42 ℃），心跳加速、呼吸困難導(dǎo)致痙攣性咳嗽，頭頸大量出汗，最終鼻孔擴(kuò)張，流出大量泡沫樣液體，結(jié)膜發(fā)紺?；即诵图膊〉鸟R匹多數(shù)因呼吸困難而死亡，僅有少數(shù)病例恢復(fù)，預(yù)后極度不良，致死率常常超過(guò)95%[7]。

混合型是AHS最常見(jiàn)的類型，呈現(xiàn)肺型和心型兩種病型的臨診癥狀，多呈亞急性經(jīng)過(guò)，心肺混合型。致死率約70%，通常在發(fā)熱開(kāi)始后的1周內(nèi)因肺水腫和心臟衰竭而死亡[2]。

4 ?病理變化

不同類型病變各異，但主要特征為急性肺水腫和心肌損害（心肌炎和心肌的彌漫性出血），心肺有黃色膠凍樣液體，肝輕度腫脹，淋巴結(jié)急性腫脹，脾多不腫大。

肺型最顯著的病變是肺小葉間水腫和胸腔積液。全肺呈粉紅色或紅色，整個(gè)支氣管樹(shù)充滿白色泡沫。腹部和胸腔內(nèi)充滿大量黃色透明液體。胃底部充血，腸系膜、腹膜、盲腸和結(jié)腸漿膜有點(diǎn)狀出血。

心型最主要的損傷是皮下、筋膜下、肌內(nèi)組織出現(xiàn)大量的黃色明膠樣液體，肌肉呈茶褐色并有出血。心包內(nèi)充滿黃色或紅褐色液體，心內(nèi)外膜點(diǎn)狀或斑狀出血。肺臟在非混合型感染時(shí)有點(diǎn)狀出血。盲腸和結(jié)腸漿膜表面有出血點(diǎn)。肝臟腫大呈暗褐色、脂肪變性、充血。脾臟腫大，有大量出血點(diǎn)。

混合型的損傷與心型和肺型所發(fā)生的損傷一樣。

5 ?診斷

OIE和FAO等國(guó)際組織推薦的AHSV實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法主要分為病原學(xué)和血清學(xué)檢測(cè)方法。病原學(xué)方法主要是病毒分離和鑒定。血清學(xué)檢測(cè)方法有補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、中和試驗(yàn)。

5.1 ?病原學(xué)檢測(cè)

病料樣品采集：病畜全血應(yīng)于發(fā)熱期采集，最好用EDTA或OPG（50%甘油水溶液+0.5%草酸鈉溶液+0.5%石炭酸溶液）處理，4 ℃保存待檢[8]。血清采集雙份，分別在急性期和康復(fù)期或急性期和相隔21 d采集，于-20 ℃保存。取病死動(dòng)物的脾、肺和淋巴結(jié)在研缽中用無(wú)菌沙研磨后，加入10%甘油制備成10%～20%的懸浮液，4 ℃保存或送檢[8，10]。

病毒分離、鑒定：2～4日齡的乳鼠腦內(nèi)接種是原代分離AHSV的首選方法。取血液或肺、脾、淋巴結(jié)等病料的滅菌上清液，接種于2～4日齡乳鼠腦內(nèi)，觀察4～10 d;若出現(xiàn)神經(jīng)癥狀則需要在乳鼠腦內(nèi)繼代接種。也可用感染組織處理后的上清液、紅細(xì)胞裂解液接種倉(cāng)鼠腎細(xì)胞、馬腎細(xì)胞及雞胚細(xì)胞進(jìn)行病毒培養(yǎng)，觀察細(xì)胞病變或進(jìn)行熒光抗體染色檢查。

5.2 ?血清學(xué)檢測(cè)

5.2.1 ?補(bǔ)體結(jié)合（CF） ?試驗(yàn)因補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)抗體是群特異性的，與非洲馬瘟的9種補(bǔ)體抗原具有群特異性反應(yīng)?？捎脺缁畹鸟R屬動(dòng)物血清（60 ℃ 30 min）進(jìn)行補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)對(duì)該病進(jìn)行診斷。

5.2.2 ?中和抗體試驗(yàn)（VN） ?因中和抗體是型特異性抗體，滴度上升較慢，需要5 d或更多時(shí)間才能得出結(jié)果，故診斷價(jià)值小，主要用于AHSV的血清分型。

5.2.3 ?酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) ?ELISA具有群特異性和高敏感性，建立的間接ELISA方法可以鑒別血清中的非洲馬瘟病毒抗體，具有良好的特異性和靈敏性。目前商業(yè)化ELISA試劑盒的準(zhǔn)確率達(dá)95%。

5.2.4 ?RT-PCR ?敏感性和特異性高，可檢測(cè)多種樣品，操作簡(jiǎn)單快速，是目前用于實(shí)驗(yàn)室診斷的主要方法。原理是基于AHSV基因組s7的設(shè)計(jì)特異引物，然后進(jìn)行熒光定量檢測(cè)。經(jīng)試驗(yàn)實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR快速檢測(cè)方法靈敏度可達(dá)10拷貝/μL。

5.2.5 ?環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增原理 ?基于AHSV的VP7保守序列，設(shè)計(jì)特異性擴(kuò)增引物。然后通過(guò)對(duì)反應(yīng)體系中各組分濃度、反應(yīng)溫度及時(shí)間的優(yōu)化，建立快速、靈敏的檢測(cè)方法。該檢測(cè)方法具有快速、特異、靈敏、操作簡(jiǎn)單、設(shè)備要求低的特點(diǎn)，適合用于AHSV現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。

鑒別診斷應(yīng)注意與馬器質(zhì)性腦病、血小板減少性紫癜和馬病毒性動(dòng)脈炎、馬鉤端螺旋體病、巴貝斯蟲病等區(qū)別。尤其是易與馬器質(zhì)性腦病引起的臨床癥狀和損傷相混淆[11，12]。

6 ?疫苗

6.1 ?弱毒疫苗

多價(jià)弱毒疫苗能產(chǎn)生穩(wěn)定的免疫力，但偶爾會(huì)有嚴(yán)重的副作用，風(fēng)險(xiǎn)較大[13，14]。

6.2 ?滅活疫苗

滅活疫苗的優(yōu)點(diǎn)是不會(huì)有嚴(yán)重副作用。但生產(chǎn)成本較高，且接種程序復(fù)雜，才能達(dá)到較高水平保護(hù)性免疫力[15]。

6.3 ?亞單位疫苗

體外表達(dá)VP2和VP5蛋白作為疫苗的基礎(chǔ)組分。接種該疫苗的動(dòng)物能產(chǎn)生針對(duì)同源病毒的中和抗體，有明顯保護(hù)作用。

無(wú)疫情國(guó)家及地區(qū)均禁止使用AHS弱毒疫苗，以防控為主。

7 ?防控目標(biāo)

基于泰國(guó)發(fā)生非洲馬瘟疫情，最近疫點(diǎn)離我國(guó)邊境直線距離不足800 km，疫情傳入我國(guó)的風(fēng)險(xiǎn)較高。而我國(guó)是已獲得OIE認(rèn)可的非洲馬瘟歷史無(wú)疫國(guó)。故防控AHS的目標(biāo)是采取一切措施防止AHSV傳入我國(guó)。當(dāng)發(fā)生可疑病例時(shí)，應(yīng)及時(shí)確診，并進(jìn)行隔離;一旦確診，立刻按照《中華人民共和國(guó)動(dòng)物防疫法》的規(guī)定采取緊急、強(qiáng)制性的控制和撲滅措施。封鎖疫區(qū)，撲殺病畜并作無(wú)害化處理，對(duì)被病畜污染的環(huán)境進(jìn)行徹底消毒，噴灑殺蟲劑、驅(qū)蟲劑等消滅媒介昆蟲。

8 ?防控措施

8.1 ?加強(qiáng)邊境防控

高度警惕境外傳入風(fēng)險(xiǎn)，密切關(guān)注境外疫情動(dòng)向 ，抓好疫情預(yù)警、邊境地區(qū)防控、口岸檢疫、野生馬屬動(dòng)物巡查、打擊走私等工作，嚴(yán)防非洲馬瘟疫情傳入。

8.2 ?提升應(yīng)急能力

應(yīng)建立完善的AHS監(jiān)測(cè)體系和應(yīng)急隊(duì)伍，一旦發(fā)現(xiàn)馬屬動(dòng)物出現(xiàn)AHS臨床癥狀，或大量發(fā)病死亡等情況，能進(jìn)行快速反應(yīng)、及時(shí)處置，防止疫情擴(kuò)散。

8.3 ?夯實(shí)技術(shù)儲(chǔ)備

要深入開(kāi)展非洲馬瘟病毒病原學(xué)研究，加強(qiáng)快速診斷等技術(shù)研究?jī)?chǔ)備。組織具備條件企業(yè)緊急生產(chǎn)、儲(chǔ)備相應(yīng)數(shù)量應(yīng)急用疫苗。加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力，提高非洲馬瘟病原學(xué)檢測(cè)能力。

8.4 ?加強(qiáng)宣傳培訓(xùn)

加大非洲馬瘟防控知識(shí)宣傳普及力度，提升馬屬動(dòng)物養(yǎng)殖、經(jīng)營(yíng)等相關(guān)從業(yè)人員生物安全意識(shí)。提升畜牧獸醫(yī)人員開(kāi)對(duì)非洲馬瘟的預(yù)警水平和早期識(shí)別、及時(shí)報(bào)告、快速處置能力。

9 ?展望

AHS是馬類疾病中致死率最高的一種疾病，雖然地域性較強(qiáng)，但近年來(lái)全球一體化進(jìn)程加劇，疫病流行范圍急劇擴(kuò)大，經(jīng)由鄰近國(guó)家傳入我國(guó)風(fēng)險(xiǎn)與日俱增。而目前AHS疫苗發(fā)展不足以應(yīng)對(duì)疾病暴發(fā)。要提高防控意識(shí)，強(qiáng)化防控手段，將疫病拒之于國(guó)門之外。同時(shí)加大對(duì)疫苗研究的投入。吸取國(guó)外優(yōu)秀防控經(jīng)驗(yàn)，建立快速高效的非洲馬瘟檢測(cè)監(jiān)測(cè)方法，針對(duì)AHSV流行病學(xué)以及病原學(xué)特征加強(qiáng)聯(lián)防聯(lián)控，避免我國(guó)畜牧業(yè)遭受損失。

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收稿日期：2020-06-10

作者簡(jiǎn)介：吳 ?顥（1987-），男，湖北武漢人，助理獸醫(yī)師，碩士，主要從事重大動(dòng)物疫病防控工作，（電子信箱）150303893@qq.com;通信作者，

阮 ?征（1966-），男，正高級(jí)畜牧師，主要從事重大動(dòng)物疫病防控工作，（電子信箱）972147621@qq.com。