葛根素調(diào)控miR-7 抗小鼠肝細(xì)胞缺氧-復(fù)氧存活和細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制

張威，王帥，王喜梅，張帆

作者單位：洛陽東方醫(yī)院消化科，河南 洛陽471003

肝缺血再灌注（Ischemia reperfusion，IR）損傷是一個(gè)復(fù)雜的病理生理過程，由缺氧引起的細(xì)胞損傷，隨后是血流量和供氧量的恢復(fù)，從而導(dǎo)致細(xì)胞損傷［1］。IR損傷是肝移植、肝切除、失血性休克和肝衰竭等常見的臨床并發(fā)癥［2］。在肝移植病例中，IR損傷的發(fā)生引起10%病人早期移植失敗，在急性和長(zhǎng)期的排斥反應(yīng)中發(fā)生率更高［3］。在肝IR 損傷過程中，缺血損傷不僅直接造成細(xì)胞損傷，還會(huì)引起急性炎癥反應(yīng)，進(jìn)而加重肝細(xì)胞損傷、器官功能障礙和衰竭。目前，IR 損傷的機(jī)制尚不清楚，臨床仍然缺乏有效的預(yù)防策略，因此，迫切需要開發(fā)新的治療方法。葛根素主要提取自豆科植物野葛Pueraria lobata（Willd.）Ohwi的干燥根。既往研究表明，葛根素（Puerarin）或葛根素注射液在肝IR損傷中表現(xiàn)出良好的治療效果［4-6］，但其分子機(jī)制并未完全闡明。因此，本研究于2018年4月至2019年2月建立小鼠肝細(xì)胞缺氧-復(fù)氧（Hypoxia and reoxygenation，H-R）損傷模型來模擬IR 損傷，考察葛根素對(duì)H-R 損傷的小鼠肝細(xì)胞增殖和凋亡的影響，結(jié)合miR-7 和核因子-κB（Nuclear factor-κB，NF-κB）信號(hào)通路進(jìn)一步探索葛根素的作用機(jī)制，為葛根素在IR損傷中的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1試劑及儀器小鼠肝細(xì)胞購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心，DMEM 培養(yǎng)基、胎牛血清購(gòu)于美國(guó)Gibco 公司，葛根素購(gòu)于上海阿拉丁生化公司，miRNA 提取試劑盒購(gòu)于上海Qiagen公司，胰酶、RIPA裂解液、3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴鹽（MTT）、佛波酯（PMA）購(gòu)于美國(guó)Sigma公司，膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素（Annexin V-FITC）細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)于上海碧云天生物技術(shù)研究所，Lipofectamine 2000、實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）試劑盒購(gòu)于美國(guó)賽默飛世爾有限公司，miR-7、anti-miR-7、miR-7 陰性對(duì)照（miR-con）、antimiR-7陰性對(duì)照（anti-miR-con）購(gòu)于廣州銳博生物有限公司，β-肌動(dòng)蛋白（β-actin）、細(xì)胞核相關(guān)抗原Ki-67、B 細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2（B cell lymphoma/lewkmia-2，Bcl-2）、Bcl-2 相關(guān)X 蛋白（Bcl-2 associated X protein，Bax）、核因子-κB（NF-κB）p65蛋白抗體購(gòu)于美國(guó)Cellular Signaling Technology 公司，辣根過氧化物酶標(biāo)記二抗購(gòu)于博士德生物公司。BD FACSCalibur流式細(xì)胞儀購(gòu)于美國(guó)BD公司，酶標(biāo)儀購(gòu)于美國(guó)Bio-Rad公司。

1.2細(xì)胞培養(yǎng)小鼠肝細(xì)胞用含10%胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)基，于37 ℃、5%二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。每周換液2～3 次。待細(xì)胞生長(zhǎng)至約80%融合度時(shí)，使用胰酶消化，按1∶4比例接種傳代。

1.3細(xì)胞轉(zhuǎn)染收集小鼠肝細(xì)胞，以1×105/mL的密度接種于6孔細(xì)胞板，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)約80%進(jìn)行轉(zhuǎn)染，按照Lipofectamine 2000試劑說明書操作，在細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-7或anti-miR-7及miR-con、anti-miR-con。轉(zhuǎn)染24h后，進(jìn)行H-R處理。

1.4實(shí)驗(yàn)分組將生長(zhǎng)狀態(tài)良好的小鼠肝細(xì)胞采用隨機(jī)數(shù)字表法分為正常組（未H-R處理正常小鼠肝細(xì)胞）：對(duì)照組（0 μmol/L葛根素處理小鼠肝細(xì)胞）、不同濃度葛根素組（分別用70 μmol/L、140 μmol/L、280 μmol/L、560 μmol/L葛根素處理小鼠肝細(xì)胞）；HR組（H-R處理小鼠肝細(xì)胞）：對(duì)照組（0 μmol/L 葛根素處理小鼠肝細(xì)胞）、不同濃度葛根素組（分別用70 μmol/L、14 0 μmol/L、280 μmol/L、560 μmol/L葛根素處理小鼠肝細(xì)胞），以篩選最佳藥物劑量。

確定最佳藥物劑量后，對(duì)小鼠肝細(xì)胞進(jìn)行分組，研究葛根素對(duì)H-R損傷小鼠肝細(xì)胞的作用。小鼠肝細(xì)胞采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為對(duì)照組（0 μmol/L 葛根素處理小鼠肝細(xì)胞）、葛根素組（280 μmol/L 葛根素處理小鼠肝細(xì)胞）、H-R 組（H-R 處理小鼠肝細(xì)胞）、H-R+葛根素組（280 μmol/L葛根素預(yù)處理小鼠肝細(xì)胞，并進(jìn)行H-R 處理）、H-R+miR-con組（小鼠肝細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-con 并進(jìn)行H-R 處理）、H-R+miR-7 組（小鼠肝細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-7 并進(jìn)行HR處理）、H-R+葛根素+anti-miR-con 組（小鼠肝細(xì)胞中轉(zhuǎn)染anti-miR-con，并進(jìn)行280 μmol/L葛根素預(yù)處理和H-R處理）、H-R+葛根素+anti-miR-7組（小鼠肝細(xì)胞中轉(zhuǎn)染anti-miR-7，并進(jìn)行280 μmol/L葛根素預(yù)處理和H-R處理）、H-R+葛根素+PMA組（280 μmol/L 葛根素預(yù)處理小鼠肝細(xì)胞，并進(jìn)行H-R 和NF-κB信號(hào)通路激活劑PMA 處理）。其中，葛根素預(yù)處理24 h。H-R處理均為缺氧3 h，復(fù)氧6 h［7］。

1.5四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法（MTT法）檢測(cè)細(xì)胞活性小鼠肝細(xì)胞以1×105/mL 的密度接種于96 孔細(xì)胞板，每孔加入MTT 溶液（5 mg/mL）20 μL，37 ℃孵育4 h，棄去上清，加入二甲基亞砜（DMSO）150 μL，37 ℃搖床孵育10 min，酶標(biāo)儀讀取各孔細(xì)胞在490 nm 波長(zhǎng)處光密度（OD）值，細(xì)胞活性＝實(shí)驗(yàn)組OD值/對(duì)照組OD值×100%。

1.6 qPCR檢測(cè)細(xì)胞中miR-7水平利用miRNA提取試劑盒提取細(xì)胞中總miRNA，逆轉(zhuǎn)錄為互補(bǔ)DNA（cDNA），并以合成的cDNA為模板，U6為內(nèi)參，按照qPCR 試劑盒說明書步驟，于熒光定量PCR 儀進(jìn)行反應(yīng)，檢測(cè)miR-7水平。miR-7正向引物序列為5′-AAAAAGAACACGTGGAAGGATAG-3′，反向引物序列為 5′-CCGCCTAACGTACCGCGAATTT-3′。實(shí)驗(yàn)設(shè)置 3 次重復(fù)，以 2-ΔΔCt法計(jì)算 miR-7 相對(duì)表達(dá)量。

1.7流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡調(diào)整各組細(xì)胞密度為1×106/mL，根據(jù)細(xì)胞凋亡試劑盒的說明，使用195 μL Annexin V-FITC 結(jié)合液重懸細(xì)胞，加入5 μL Annexin V-FITC，輕輕混勻，10 μL碘化丙啶（PI），輕輕混勻，在室溫條件下避光孵育20 min，置流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡情況。

1.8蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot）檢測(cè)Ki-67、Bcl-2、Bax、磷酸化核因子-κB p65（p-NF-κB p65）和NF-κB p65蛋白表達(dá)各組細(xì)胞中加入RIPA裂解液提取總蛋白，后經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE），將蛋白樣品轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜，用5%脫脂奶粉于常溫條件下封閉1 h，加入一抗（1∶1 000稀釋），同時(shí)加入β-actin一抗（1∶1 000 稀釋）作內(nèi)參蛋白，4 ℃孵育過夜，次日用Tris-HCl-Tween緩沖鹽溶液（TBST）充分漂洗，加入二抗（1∶5 000稀釋），室溫孵育1 h，TBST充分漂洗，置化學(xué)發(fā)光液顯色，曝光，分析目的蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 22.0軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析。數(shù)據(jù)以xˉ±s表示，兩組間數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn)，多組數(shù)據(jù)間比較采用單因素方差分析，多組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1不同濃度葛根素對(duì)正常小鼠肝細(xì)胞和小鼠肝細(xì)胞H-R后細(xì)胞活性的影響MTT 法檢測(cè)結(jié)果顯示（表1），與正常對(duì)照組相比，不同濃度葛根素處理小鼠肝細(xì)胞后，細(xì)胞活性呈下降趨勢(shì)，70 μmol/L、140 μmol/L、280 μmol/L 葛根素組細(xì)胞活性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P1＝0.935，P2＝0.385，P3＝0.116），560 μmol/L 葛根素組細(xì)胞活性顯著降低（P4＝0.001）。與H-R 對(duì)照組相比，不同濃度葛根素組預(yù)處理H-R小鼠肝細(xì)胞后，細(xì)胞活性隨葛根素濃度增加呈先升后降趨勢(shì)，70 μmol/L和560 μmol/L葛根素組細(xì)胞活性與對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P1＞0.05，P4＞0.05），而140 μmol/L和280 μmol/L葛根素組細(xì)胞活性均顯著高于H-R 對(duì)照組（P2＜0.001，P3＜0.001）。蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)結(jié)果表明（表1、圖1），與正常對(duì)照組相比，不同濃度葛根素處理小鼠肝細(xì)胞后，70 μmol/L、140 μmol/L、280 μmol/L葛根素組細(xì)胞中Ki-67蛋白表達(dá)量無明顯變化（P1＝0.691，P2＝0.552，P3＝0.06），560 μmol/L 葛根素組細(xì)胞中Ki-67 蛋白表達(dá)量顯著降低（P4＜0.001）。與H-R對(duì)照組相比，不同濃度葛根素組預(yù)處理H-R的小鼠肝細(xì)胞后，細(xì)胞中Ki-67 蛋白表達(dá)量隨葛根素濃度增加呈先升后降趨勢(shì)，其中70 μmol/L、140 μmol/L、560 μmol/L 葛根素組Ki-67 蛋白表達(dá)量與對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P1＞0.05，P2＞0.05，P4＞0.05），280 μmol/L 葛根素則顯著高于H-R對(duì)照組（P3＜0.001）。

表1 不同濃度葛根素對(duì)正常小鼠肝細(xì)胞和小鼠肝細(xì)胞缺氧-復(fù)氧（H-R）后細(xì)胞活性的影響/xˉ±s

2.2葛根素對(duì)小鼠肝細(xì)胞H-R后小鼠肝細(xì)胞凋亡的影響對(duì)細(xì)胞凋亡的檢測(cè)結(jié)果表明（圖2A，表2），相比于對(duì)照組，H-R 處理的小鼠肝細(xì)胞凋亡率大幅增加（P＜0.001）。相比于H-R組，葛根素+H-R組小鼠肝細(xì)胞凋亡率明顯降低（P＜0.001）。對(duì)Bcl-2 和Bax 蛋白表達(dá)的檢測(cè)結(jié)果顯示（圖2B，表2），與對(duì)照組比較，H-R處理的小鼠肝細(xì)胞Bcl-2蛋白表達(dá)量明顯增加（P＜0.001），而Bax蛋白表達(dá)量顯著降低（P＜0.001）。與H-R組比較，葛根素+H-R組小鼠肝細(xì)胞Bcl-2 蛋白表達(dá)量明顯升高（P＜0.001），而Bax 蛋白表達(dá)量顯著減少（P＜0.001）。

表2 葛根素對(duì)小鼠肝細(xì)胞缺氧-復(fù)氧（H-R）后細(xì)胞凋亡的影響/xˉ±s

2.3不同濃度葛根素對(duì)小鼠肝細(xì)胞中miR-7的表達(dá)qPCR 檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組（1.00±0.07）相比，miR-7 表達(dá)量在 70 μmol/L（1.12±0.13）、140 μmol/L（1.35±0.11）、280 μmol/L（1.39±0.09）和560 μmol/L（1.49±0.09）濃度葛根素處理的小鼠肝細(xì)胞中呈上升趨勢(shì)（F＝12.320，P＝0.001；P1＝0.073，P2＜0.001，P3＜0.001，P4＜0.001）。與H-R 組（1.00±0.05）相比，miR-7 表達(dá)量在70 μmol/L（1.46±0.11）、140 μmol/L（1.73±0.15）、280 μmol/L（3.39±0.23）和560 μmol/L（2.73±0.26）濃度葛根素處理的小鼠肝細(xì)胞中呈先升后降趨勢(shì)，均顯著高于H-R 組（F＝90.663，P＜0.001；P1＝0.001，P2＜0.001，P3＜0.001，P4＜0.001）。

2.4過表達(dá)miR-7對(duì)小鼠肝細(xì)胞H-R后細(xì)胞凋亡的影響H-R 組小鼠肝細(xì)胞中的miR-7 表達(dá)量、細(xì)胞活性、Ki-67 蛋白表達(dá)量明顯低于對(duì)照組（均P＜0.001，圖3、表3），其細(xì)胞凋亡率、Bcl-2、Bax 蛋白表達(dá)受到顯著影響（均P＜0.001），結(jié)果同“2.2”。在小鼠肝細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-7，并用H-R 處理，發(fā)現(xiàn)與H-R+miR-con組相比，過表達(dá)miR-7顯著提升miR-7水平，增強(qiáng)細(xì)胞活性（P＝0.001），降低細(xì)胞凋亡率（P＜0.001），提升Ki-67、Bcl-2 蛋白水平而減少Bax蛋白表達(dá)量（均P＜0.001）。

2.5干擾miR-7表達(dá)部分逆轉(zhuǎn)葛根素對(duì)小鼠肝細(xì)胞H-R后細(xì)胞凋亡的抑制作用miR-7 表達(dá)、細(xì)胞活性、細(xì)胞凋亡率、Ki-67、Bcl-2 和 Bax 蛋白表達(dá)在H-R 組或H-R+葛根素組小鼠肝細(xì)胞受到明顯影響（均P＜0.001，表4），結(jié)果同2.1～2.4部分。與H-R+葛根素+anti-miR-con組比較，H-R+葛根素+anti-miR-7組顯著降低miR-7 表達(dá)量（P＜0.001）、細(xì)胞活性（P＝0.013），明顯增加細(xì)胞凋亡率（P＜0.001），降低Ki-67、Bcl-2 蛋白水平而提高Bax 蛋白表達(dá)量（均P＜0.001，圖4、表4）。

2.6葛根素調(diào)控miR-7表達(dá)影響小鼠肝細(xì)胞H-R NF-κB信號(hào)通路蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)結(jié)果顯示（圖5、表5、表6），H-R 組小鼠肝細(xì)胞中p-NF-κB p65 表達(dá)量高于對(duì)照組（P＜0.001），H-R+葛根素+PMA 組p-NF-κB p65 表達(dá)量高于 H-R+葛根素組（P＝0.001），H-R+葛根素組p-NF-κB p65表達(dá)量低于H-R組（P＜0.001），而在H-R+葛根素+anti-miR-7組小鼠肝細(xì)胞中，p-NF-κB p65 表達(dá)量高于H-R+葛根素+anti-miR-con組（P＜0.001）；H-R組、H-R+葛根素組、H-R+葛根素+PMA組、H-R+葛根素+anti-miR-con組和 H-R+葛根素+anti-miR-7 組中 NF-κB p65 表達(dá)量均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P1＝0.729，P2＝0.943）。

表6 葛根素調(diào)控miR-7表達(dá)影響小鼠肝細(xì)胞缺氧-復(fù)氧（H-R）核因子-κB（NF-κB）信號(hào)通路/xˉ± s

圖5 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)葛根素調(diào)控miR-7表達(dá)影響小鼠肝細(xì)胞缺氧-復(fù)氧（H-R）核因子-κB（NF-κB）信號(hào)通路：A為葛根素、激活劑佛波酯（PMA）對(duì)小鼠肝細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路的影響；B為葛根素調(diào)控miR-7表達(dá)影響小鼠肝細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路

3 討論

葛根素是一種異黃酮類衍生物［8］，具有抗氧化、降血糖、抗炎、抗凝血、抗腫瘤、改善微循環(huán)等活性［9-10］，在糖尿病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、骨質(zhì)疏松癥、高血壓和心血管疾病［11-14］中擁有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。資料顯示，在IR 損傷方面，葛根素表現(xiàn)出顯著的保護(hù)作用［15-16］，葛根素注射液可以顯著抑制大鼠肝臟IR損傷的肝細(xì)胞凋亡，從而實(shí)現(xiàn)保護(hù)作用［5］。本研究同樣發(fā)現(xiàn)葛根素可以減輕小鼠肝細(xì)胞IR 損傷。不同濃度葛根素組作用于H-R損傷的小鼠肝細(xì)胞，細(xì)胞活性、Ki-67 蛋白表達(dá)顯著增加（P＜0.05）。使用280 μmol/L 葛根素預(yù)處理后，H-R 損傷的小鼠肝細(xì)胞凋亡率和Bax蛋白表達(dá)量明顯減少（P＜0.05），Bcl-2 蛋白水平明顯升高（P＜0.05）。證實(shí)葛根素可以減輕小鼠肝細(xì)胞IR損傷，促進(jìn)細(xì)胞增殖并抑制細(xì)胞凋亡，這與前人研究［17］結(jié)果一致。

miR-7 作為腫瘤抑制因子，可以減少腫瘤細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，如肝細(xì)胞癌，非小細(xì)胞肺癌和胃癌［18-20］。miR-7 還參與 IR 損傷，在心肌細(xì)胞H-R模型中，miR-7能夠抑制心肌細(xì)胞凋亡，干擾其表達(dá)則發(fā)揮相反的作用［21］。miR-7可以在一定程度上保護(hù)腦IR損傷，機(jī)制與調(diào)控PI3K/Akt信號(hào)通路活性，調(diào)控下游Bcl-2和Bax表達(dá)有關(guān)［22］。miR-7a/b對(duì)IR 損傷敏感，并通過在體內(nèi)和體外負(fù)調(diào)節(jié)聚（ADP-核糖）聚合酶表達(dá)來保護(hù)心肌細(xì)胞免受IR 誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡［23］。為探究葛根素保護(hù)小鼠肝細(xì)胞IR損傷的分子機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)用不同濃度葛根素預(yù)處理H-R 損傷的小鼠肝細(xì)胞，結(jié)果顯示，葛根素預(yù)處理后，H-R損傷小鼠肝細(xì)胞中的miR-7表達(dá)上調(diào)；在H-R 損傷小鼠肝細(xì)胞中，miR-7 表達(dá)顯著下調(diào)（P＜0.05）；干擾miR-7表達(dá)部分逆轉(zhuǎn)葛根素對(duì)小鼠肝細(xì)胞H-R損傷后細(xì)胞凋亡的抑制作用，這與Geng等［24］對(duì)姜黃素通過上調(diào)miR-7a/b 表達(dá)來保護(hù)缺氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞免受細(xì)胞凋亡的研究結(jié)果相符。此外，本實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)過表達(dá)miR-7顯著增強(qiáng)H-R損傷小鼠肝細(xì)胞活性，降低細(xì)胞凋亡率，提升Ki-67、Bcl-2 蛋白水平而減少Bax蛋白表達(dá)量（P＜0.05）；干擾miR-7表達(dá)部分逆轉(zhuǎn)葛根素對(duì)小鼠肝細(xì)胞H-R損傷后細(xì)胞活性和Bcl-2蛋白水平的促進(jìn)作用，以及對(duì)Bax蛋白表達(dá)的抑制作用。上述結(jié)果表明，miR-7 是葛根素保護(hù)小鼠肝細(xì)胞H-R損傷的重要調(diào)控因子。

NF-κB 主要包括 p65、RelB、c-Rel、p50 和 p52等，可以調(diào)節(jié)免疫、炎癥、細(xì)胞生存和增殖等相關(guān)基因。NF-κB 密切參與細(xì)胞凋亡，在不同類型的細(xì)胞和不同刺激中發(fā)揮著促凋亡和抗凋亡作用［25］。多項(xiàng)研究表明心肌細(xì)胞中NF-kB p65 活化是促凋亡的［26］。研究表明，葛根素通過顯著降低大鼠IR損傷后肝臟組織中NF-κB 蛋白和mRNA 表達(dá)，保護(hù)大鼠肝臟 IR 損傷［27］。唐東等［28］報(bào)道指出，在大鼠肝臟IR損傷處理中，NF-κB p65表達(dá)量顯著增加；使用葛根素預(yù)處理會(huì)明顯降低NF-κB p65 蛋白水平，與本研究結(jié)果相同。同時(shí)，使用NF-κB信號(hào)通路激活劑PMA 處理后，明顯提高H-R+葛根素組p-NF-κB p65蛋白表達(dá)。干擾miR-7表達(dá)部分逆轉(zhuǎn)葛根素對(duì)小鼠肝細(xì)胞H-R損傷后NF-κB p65表達(dá)的抑制作用。提示NF-κB信號(hào)通路是葛根素減輕肝細(xì)胞H-R損傷的重要途徑之一，葛根素可能通過調(diào)控miR-7 表達(dá)抑制NF-κB信號(hào)通路活性，從而發(fā)揮對(duì)肝細(xì)胞H-R 損傷的保護(hù)作用。

總之，葛根素能夠促進(jìn)H-R 損傷的小鼠肝細(xì)胞增殖，并抑制細(xì)胞凋亡，其作用機(jī)制與調(diào)控miR-7表達(dá)，抑制NF-κB 信號(hào)通路活性有關(guān)，這將為治療肝IR損傷提供新思路。

（本文圖2見插圖9-3）

圖2 葛根素對(duì)小鼠肝細(xì)胞缺氧復(fù)氧后細(xì)胞凋亡的影響：A為流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡圖；B為葛根素對(duì)小鼠肝細(xì)胞缺氧復(fù)氧后小鼠肝細(xì)胞B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）和Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bax）蛋白表達(dá)的影響