飲料中霉菌和酵母計(jì)數(shù)檢驗(yàn)結(jié)果不確定度的評(píng)定

摘 要：為了真實(shí)反應(yīng)飲料中霉菌和酵母計(jì)數(shù)檢驗(yàn)結(jié)果的精確度，評(píng)定霉菌和酵母計(jì)數(shù)的不確定度，探討并建立了簡(jiǎn)單易行的飲料中霉菌和酵母計(jì)數(shù)檢驗(yàn)的不確定度評(píng)定方法，確定了樣品中霉菌和酵母計(jì)數(shù)檢測(cè)的置信區(qū)間。

關(guān)鍵詞：飲料;霉菌和酵母計(jì)數(shù);不確定度

測(cè)量不確定度是與測(cè)量結(jié)果相關(guān)聯(lián)的參數(shù)，正確評(píng)定測(cè)量不確定度對(duì)客觀分析測(cè)量結(jié)果有重要意義[1-3]。隨著實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可和資質(zhì)認(rèn)定工作的開(kāi)展，很多實(shí)驗(yàn)室認(rèn)識(shí)到了評(píng)定不確定度的重要性，并在日常實(shí)驗(yàn)室中開(kāi)展了這項(xiàng)工作，但微生物檢驗(yàn)中不確定度評(píng)定在實(shí)驗(yàn)室工作中的實(shí)際應(yīng)用并不多。本文對(duì)飲料中霉菌和酵母計(jì)數(shù)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行不確定度評(píng)定。

1 材料與方法

1.1 材料

啤酒酵母ATCC 9763購(gòu)于北京陸橋技術(shù)股份有限公司、孟加拉紅瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào)170316）北京陸橋技術(shù)股份有限公司。

1.2 方法

GB 4789.15-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)》[4]、JJF1059.1-2012《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》[5]。

1.3 樣品制備

取啤酒酵母（ATCC 9763）新鮮培養(yǎng)物于滅菌生理鹽水中制成0.5麥?zhǔn)蠞舛鹊娜芤?，稀? 000倍后制成約1×104 CFU/mL的菌懸液，取該菌懸液1 mL加入500 mL已滅菌飲料中充分混勻后制成原始檢樣。

制作10個(gè)小樣：無(wú)菌操作分別吸取10 mL上述原始檢樣充分混勻后入10個(gè)無(wú)菌試管，作為小樣。

1.4 霉菌和酵母總數(shù)測(cè)定

以無(wú)菌操作方法吸取1 mL樣品，注入盛有9 mL無(wú)菌生理鹽水的試管中，充分振搖，制成1∶10的稀釋液;吸取1∶10的稀釋液1 mL注入盛有9 mL無(wú)菌生理鹽水的試管中，混勻制成1∶100稀釋液;按同法制備梯度稀釋液備用;用滅菌吸管取未稀釋的水樣和2～3個(gè)適宜稀釋度的水樣1 mL，分別注入滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做2個(gè)平皿對(duì)照。然后將冷卻至46 ℃左右的孟加拉紅瓊脂約20 mL注入平皿，并旋搖混勻，同時(shí)做培養(yǎng)基空白對(duì)照;待瓊脂凝固后，置（28±1） ℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)5 d，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù);選擇菌落數(shù)在10～150平板計(jì)算平均數(shù)，以平均數(shù)乘以稀釋倍數(shù)作為檢測(cè)結(jié)果，每管均做2個(gè)平行。

2 不確定度來(lái)源分析

樣品稱樣引入的不確定度，樣品稀釋過(guò)程引入的不確定度為A類評(píng)定;重復(fù)檢測(cè)產(chǎn)生的不確定度為B類評(píng)定。檢驗(yàn)結(jié)果的不確定度具體來(lái)源見(jiàn)圖1。

3 不確定度的分量評(píng)定

3.1 樣品稱樣引入的不確定度

3.2 樣品稀釋過(guò)程引入的不確定度

3.3 重復(fù)檢測(cè)產(chǎn)生的不確定度

同一樣品重復(fù)10次，將10次重復(fù)測(cè)量的結(jié)果列入表1中。

由于微生物測(cè)量結(jié)果分散性很大，其最大值與最小值之間可相差到1個(gè)數(shù)量級(jí)，因此不能直接利用測(cè)量數(shù)據(jù)做不確定度評(píng)估，而需要對(duì)數(shù)據(jù)做對(duì)數(shù)處理，結(jié)果見(jiàn)表1。

4 結(jié)論

本論文依據(jù) GB 4789.15-2016 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)》，利用孟加拉紅瓊脂對(duì)飲料中的酵母進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行不確定度評(píng)定，給出不確定度。由于微生物檢測(cè)中，測(cè)量結(jié)果的發(fā)散性較大，不屬于正態(tài)分布，檢測(cè)結(jié)果必需轉(zhuǎn)換成對(duì)數(shù)，使其靠近正態(tài)分布，便于建立數(shù)學(xué)模型用于計(jì)算。在測(cè)定時(shí)，必須嚴(yán)格控制條件，由同一試驗(yàn)人員進(jìn)行操作，測(cè)試結(jié)果取對(duì)數(shù)，評(píng)定不確定度。結(jié)果顯示，飲料中霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)的取值區(qū)間為1.330235±0.085812，該樣品中霉菌和酵母的含量范圍為18～26 CFU/mL。

參考文獻(xiàn)

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[4]國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.GB 4789.15-2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 霉菌和酵母計(jì)數(shù)[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2016.

[5]國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.JJF 1059-2012 測(cè)量不確定度評(píng)定與表示[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2012.

[6]國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.JJG 196-2006 常用玻璃儀器檢定規(guī)程[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2006.

基金項(xiàng)目：福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院科技項(xiàng)目（編號(hào)：KY201822A）。

作者簡(jiǎn)介：傅德江（1986—），男，福建福州人，本科，工程師。研究方向：食品微生物。