超高效液相色譜-質(zhì)譜法（UPLC-MS）檢測7種合成甜味劑的方法的建立

張作松

摘 要：建立液相色譜-質(zhì)譜法對食品中添加的糖精鈉、甜蜜素、安賽蜜、阿斯巴甜、紐甜、阿力甜與三氯蔗糖進(jìn)行檢測。樣品加入50%甲醇溶液后再添加蛋白質(zhì)沉淀劑亞鐵氰化鉀和乙酸鋅，去除蛋白質(zhì)，超聲、離心提取，上清液過0.22 μm有機(jī)濾膜制成待測樣品供檢測，流動相為0.1%甲酸-5 mmol/L甲酸銨水溶液和乙腈，梯度洗脫，在負(fù)離子模式下通過MRM模式采集數(shù)據(jù)，加標(biāo)濃度分別為1、5、10 mg/kg時，加標(biāo)回收率在78.3%～117.4%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在1.95～6.33。

關(guān)鍵詞：液相色譜-質(zhì)譜;糖精鈉;甜蜜素;安賽蜜;阿斯巴甜;紐甜;阿力甜;三氯蔗糖

甜味劑是能夠賦予食品甜味的物質(zhì)的總稱，適量添加可使食品具有適口的感覺、良好的風(fēng)味，又可保留新鮮的味道。甜味劑按其來源分為人工甜味劑和合成甜味劑。人工甜味劑主要是指一些具有甜味但不是糖類的化學(xué)物質(zhì)，甜度一般比蔗糖高十倍至數(shù)百倍;其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，耐熱、耐酸堿，不易出現(xiàn)分解失效現(xiàn)象，不具有任何營養(yǎng)價值[1]。常見的人工甜味劑有糖精鈉、甜蜜素、安賽蜜、阿斯巴甜、紐甜、阿力甜、三氯蔗糖與糖精等。如果超量使用，則會危害人體健康，為此，國家對甜味劑的使用范圍及用量進(jìn)行了嚴(yán)格規(guī)定。為確保合成甜味劑的合理使用，必須對添加種類及含量進(jìn)行準(zhǔn)確測定[2]。本文通過實驗建立了測定食品中7種甜味劑的超高效液相色譜-質(zhì)譜法。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

Waters Xevo TQ-S液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀;湖南赫西儀器裝備離心機(jī)，甲醇（HPLC純）;實驗室自制超純水;甲酸（色譜級），甲酸銨（分析純），乙腈（HPLC純）;安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、阿斯巴甜、阿力甜、紐甜與三氯蔗糖（均≥98%）。

1.2 色譜條件

色譜柱：C18柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）;流動相：A為0.1%（體積分?jǐn)?shù)）甲酸-5 mmol/L甲酸銨水溶液，B為乙腈;柱溫：35 ℃;進(jìn)樣量：10 μL，流動相的洗脫程序見表1。

1.3 質(zhì)譜條件

離子源：ESI;掃描方式：負(fù)離子掃描;檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測掃描模式（MRM），干燥氣溫度：500 ℃;氣體流速：1 000 L/Hr。

1.4 樣品前處理

取3 g左右樣品于50 mL離心管中，加入20 mL甲醇-水（1∶1）超聲提取30 min，加入2 mL 10.6%的亞鐵氰化鉀和22%的乙酸鋅渦旋1 min混勻后，于10 000 r/min速率下離心20 min，上清液轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，重復(fù)提取一次，合并上清液，用甲醇-水（1∶1）定容至刻度線，過0.22 μm有機(jī)濾膜，供液相色譜-質(zhì)譜儀器上機(jī)檢測。

2 結(jié)果與討論

2.1 流動相條件的選擇

參照SN/T3538-2013《出口食品中六種合成甜味劑的檢測方法液相色譜一質(zhì)譜/質(zhì)譜法》檢測標(biāo)準(zhǔn)[3]，分別用純水、0.1%乙酸銨溶液和0.1%甲酸-5 mmol/L甲酸銨溶液作流動相水相，以甲醇和乙腈作為有機(jī)相進(jìn)行試驗，最終確定流動相為0.1%甲酸-5 mmol/L甲酸銨溶液和乙腈。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立與分析

以空白糕點樣品為基質(zhì)制備基質(zhì)空白標(biāo)準(zhǔn)溶液，7種甜味劑用空白標(biāo)準(zhǔn)溶液配制成系列標(biāo)準(zhǔn)濃度。圖1是七種甜味劑樣品的質(zhì)譜圖，實現(xiàn)了7種樣品的同時檢測。將質(zhì)譜檢出的峰面積與標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度進(jìn)行擬合計算出目標(biāo)物的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍和檢出限，如表3所示?；厥章试囼灥募訕?biāo)濃度分別為1、5、10 mg/kg，每份樣品分別測定5次，平均回收率在78.3%～117.4%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在1.95至6.33。

3 結(jié)論

本文通過液相色譜-質(zhì)譜法檢測糕點中的甜味劑，參考SN/T3538-2013《出口食品中六種合成甜味劑的檢測方法液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》，并優(yōu)化質(zhì)譜和色譜條件，提高檢測效率，為甜味劑檢測提供一種高效、快捷的檢測方法。利用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)建立同時測定多組分甜味劑的方法將成為將來食品安全檢測技術(shù)的發(fā)展方向之一，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

參考文獻(xiàn)

[1]劉婷，吳道澄.食品中使用的甜味劑[J].中國調(diào)味品，2010，35（11）：35-39.

[2]舞太鵬，馬康.合成甜味劑檢測技術(shù)的研究進(jìn)展[J].化學(xué)分析計量，2017，26（6）：109-115.

[3]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.SN/T3538—2013出口食品中六種合成甜味劑的檢測方法液相色譜一質(zhì)譜/質(zhì)譜法[S].北京：中國質(zhì)檢出版社，2013.