蛻膜組織自然殺傷細(xì)胞亞群比例與早期流產(chǎn)的相關(guān)性分析

彭婧，張敏，甘維梅

(南昌市洪都中醫(yī)院，江西 南昌330000)

孕婦妊娠期間自然流產(chǎn)(SA)的發(fā)生率約為15%，其中絕大多數(shù)為早期流產(chǎn)，即妊娠時(shí)間低于12 周，其常見原因?yàn)榕咛ト旧w異常、免疫功能異常、黃體功能不足、甲狀腺功能減退癥以及感染等[1]。盡管經(jīng)過(guò)一系列檢查，還是有60%～70%的早期流產(chǎn)無(wú)法找到明確原因[2]。由于在孕早期蛻膜組織淋巴細(xì)胞中殺傷細(xì)胞(NK)占主要地位，推測(cè)蛻膜組織中NK細(xì)胞異常可能是孕早期自然流產(chǎn)的重要病因[3]。本研究通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析早期自然流產(chǎn)孕婦與早期正常妊娠孕婦蛻膜組織中NK細(xì)胞亞群比例的差異，進(jìn)一步探討其與早期流產(chǎn)的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年1月—2018年12月收治的早期自然流產(chǎn)孕婦20 例作為觀察組，年齡(28.43±2.12) 歲，體質(zhì)量指數(shù)(BMI)(20.43±1.38) kg/m2，孕周(8.75±1.89) 周，流產(chǎn)次數(shù)(2.52±0.42) 次；經(jīng)相關(guān)檢查排除染色體、自身免疫、感染、遺傳等因素引起的流產(chǎn)。選擇同期正常妊娠行早期人工流產(chǎn)的孕婦20 例作為對(duì)照組，年齡(27.23±2.08) 歲，BMI(20.78±1.48) kg/m2，孕周(8.01±1.22) 周，流產(chǎn)次數(shù)(2.01±0.23) 次；既往無(wú)不良妊娠史，自愿終止早期妊娠且B超顯示胎兒發(fā)育正常。兩組孕婦的年齡、孕周、BMI、流產(chǎn)次數(shù)等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，且所有孕婦均已簽署知情同意書。

1.2 方法

所有孕婦在行無(wú)痛清宮術(shù)前均接無(wú)菌負(fù)壓吸引瓶，吸取其蛻膜組織置于預(yù)冷的磷酸鹽緩沖液(PBS)離心管中，迅速送至醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行蛻膜組織單細(xì)胞懸液的制備。然后用流式細(xì)胞儀(美國(guó)BeckmanCoulte公司)以CD45-FITC/CD(56+16)-RD1/CD3-PC5對(duì)蛻膜組織單細(xì)胞懸液進(jìn)行染色，并以CD45設(shè)門篩選出總淋巴細(xì)胞，用CD3和CD(56+16)雙抗標(biāo)記蛻膜NK細(xì)胞。同時(shí)所有孕婦在行清宮術(shù)當(dāng)天早晨空腹抽取靜脈血3 mL，用于檢測(cè)外周血雌二醇(E2)、孕酮(P)水平，所有操作均嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 兩組孕婦蛻膜組織NK細(xì)胞亞群表型特征比較

所有孕婦蛻膜組織淋巴細(xì)胞中NK細(xì)胞總量(即CD3-CD56+細(xì)胞)占70%左右，兩組孕婦蛻膜組織內(nèi)NK細(xì)胞總量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。觀察組孕婦蛻膜組織內(nèi)CD3-CD56+CD16-NK細(xì)胞比例明顯低于對(duì)照組，CD3-CD56+CD16+NK細(xì)胞比例明顯高于對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見表1)。

表1 兩組孕婦蛻膜組織NK細(xì)胞亞群表型特征比較

2.2 兩組孕婦外周血E2和P水平比較

觀察組孕婦外周血E2和P水平均明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見表2)。

表2 兩組孕婦外周血E2和P水平比較

2.3 蛻膜組織NK細(xì)胞亞群比例與E2和P的關(guān)系

Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，所有孕婦外周血E2和P水平與蛻膜組織內(nèi)CD3+CD56+CD16+NK細(xì)胞比例均呈負(fù)相關(guān)(r值分別為-0.463和-0.502)，與CD3-CD56+CD16-NK細(xì)胞比例均呈正相關(guān)(r值分別為0.455和0.476)。

3 討 論

早期流產(chǎn)主要是孕婦在妊娠12 周以前發(fā)生腹痛、陰道流血的現(xiàn)象。早期流產(chǎn)時(shí)，絨毛與子宮底蛻膜的聯(lián)系尚不牢固，常先有陰道流血，然后伴有陣發(fā)性下腹疼痛。NK細(xì)胞是不同于T和B淋巴細(xì)胞的第三類淋巴細(xì)胞，不表達(dá)特異性抗原識(shí)別受體，妊娠時(shí)蛻膜組織內(nèi)NK細(xì)胞含量非常豐富，約占蛻膜組織內(nèi)淋巴細(xì)胞的70%～80%，由于其直接識(shí)別胎兒抗原，推測(cè)蛻膜組織NK細(xì)胞在母胎界面免疫耐受中發(fā)揮著重要作用[4-5]。

根據(jù)NK細(xì)胞表面抗原標(biāo)志，NK細(xì)胞亞群主要可以分為CD3-CD56+CD16+NK細(xì)胞和CD3-CD56+CD16-NK細(xì)胞，蛻膜組織內(nèi)NK細(xì)胞則以CD3-CD56+CD16-亞群為主(約占90%)，而外周血以CD3-CD56+CD16+亞群為主(約占95%)[6]。與外周血NK細(xì)胞相比，蛻膜組織NK細(xì)胞有著不同的作用，由于CD16的低水平表達(dá)，蛻膜組織NK細(xì)胞表現(xiàn)出對(duì)表達(dá)主要組織相容性復(fù)合物Ⅰ類(MHC-Ⅰ)分子的滋養(yǎng)層細(xì)胞殺傷能力的下降，說(shuō)明蛻膜組織中CD16的低表達(dá)水平可能有利于維持妊娠過(guò)程中滋養(yǎng)細(xì)胞功能[7-8]。

本研究結(jié)果顯示，所有孕婦蛻膜組織淋巴細(xì)胞中NK細(xì)胞總量(即CD3-CD56+細(xì)胞)占70%左右，其中正常早期妊娠孕婦蛻膜組織NK細(xì)胞亞群主要為CD3-CD56+CD16-NK細(xì)胞，約占(82.13±9.74)%，而早期自然流產(chǎn)孕婦CD3-CD56+CD16-NK細(xì)胞比例均值為(73.86±9.95)%，明顯低于正常早孕組，而CD3-CD56+CD16+NK細(xì)胞比例為(16.32±3.35)%，明顯高于正常早孕孕婦。CD16又稱為L(zhǎng)eu11抗原，是NK細(xì)胞表面一種低親和力IgG Fc受體(FcγRⅢ)，主要介導(dǎo)NK細(xì)胞的自然殺傷和抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒效應(yīng)(ADCC)作用，當(dāng)蛻膜組織內(nèi)CD3-CD56+CD16+NK細(xì)胞比例升高、而CD3-CD56+CD16-NK細(xì)胞比例降低時(shí)不利于胚胎發(fā)育及妊娠的維持，導(dǎo)致孕婦妊娠早期發(fā)生流產(chǎn)[9-10]。E2主要由孕婦的黃體以及胎盤分泌，可以反映孕婦胎盤的生理狀態(tài)與發(fā)育狀態(tài)。正常早期妊娠孕婦黃體以及胎盤分泌良好，E2水平較高，若黃體和胎盤受到外界影響，E2水平降低可影響胚胎發(fā)育，最終導(dǎo)致流產(chǎn)[11]。而P是妊娠早期重要的監(jiān)測(cè)指標(biāo)，可用于反映早孕期胚胎的發(fā)育情況，其血中P水平降低可能導(dǎo)致子宮平滑肌纖維收縮，血供不足，影響胚胎發(fā)育而出現(xiàn)流產(chǎn)[12]。本研究結(jié)果顯示，早期自然流產(chǎn)的孕婦外周血E2和P水平均明顯低于正常早期妊娠的孕婦，且與蛻膜組織內(nèi)CD3-CD56+CD16+NK細(xì)胞比例均呈負(fù)相關(guān)，與CD3-CD56+CD16-NK細(xì)胞比例均呈正相關(guān)，說(shuō)明蛻膜組織內(nèi)NK細(xì)胞比例失調(diào)可通過(guò)損傷胎盤等組織影響孕婦E2和P的表達(dá)。

綜上所述，早期自然流產(chǎn)孕婦較正常早期妊娠孕婦蛻膜組織中CD3-CD56+CD16-NK細(xì)胞比例降低，而CD3-CD56+CD16+NK細(xì)胞比例升高，早孕期蛻膜組織NK細(xì)胞亞群比例失衡可影響E2和P的分泌，可能是導(dǎo)致早期流產(chǎn)的重要原因。