上皮性卵巢癌組織NFAT3、Maspin 表達及臨床意義

王英，閃海霞，孫勃

（鄭州大學(xué)附屬南陽市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 南陽473000）

上皮性卵巢癌是卵巢腫瘤最常見的病理類型,但由于早期上皮性卵巢癌多無明顯的臨床表征，超過80%的患者確診時已存在腹腔內(nèi)種植、 淋巴轉(zhuǎn)移或處于中晚期階段,這也是造成上皮性卵巢癌患者較高病死率的最主要原因[1]。 臨床研究[2]證實上皮性卵巢癌由于分級或分期不同,給予的手術(shù)方案也不盡相同,因此提高上皮性卵巢癌早期診斷和評估疾病進展準(zhǔn)確率對提高治療效果具有重要意義。 現(xiàn)臨床針對上皮性卵巢癌的診斷主要依靠影像學(xué)檢查聯(lián)合血清標(biāo)志物,但診斷的特異性較低且對腫瘤分期無法確準(zhǔn)。 活化T 細(xì)胞核因子3(Activated T cell nuclear factor 3,NFAT3) 與轉(zhuǎn)錄關(guān)系密切，存在于多種非免疫組織細(xì)胞中，被證實可參與脂肪細(xì)胞分化、心肌細(xì)胞肥大及乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程[3]；乳腺絲氨酸蛋白酶抑制劑（Mammary serine protease inhibitor，Maspin）是新發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制基因，具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和血管生成的作用,但現(xiàn)階段NFAT3、Maspin 與卵巢癌的作用研究資料較少[4]。 故而，本研究探討了上皮性卵巢癌組織NFAT3、Maspin 表達及臨床意義，旨在為臨床卵巢癌的診斷、 治療和預(yù)后提供數(shù)據(jù)參考，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017 年1 月至2019 年4 月我院保存的上皮性卵巢癌組織97 例，同時選取良性卵巢腫瘤56 例，正常卵巢組織50 例作為對照，各組臨床資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴均經(jīng)病理學(xué)確診；⑵術(shù)前未行放療、化療等治療；⑶患者及家屬知情同意。 排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴合并有其他系統(tǒng)惡性腫瘤；⑵有免疫缺陷性疾病、內(nèi)分泌疾病、肝腎功能障礙等疾病。

表1 各組一般資料比較

1.2 實驗方法 采用免疫組化染色法檢測NFAT3、Maspin 表達： 取適量上皮性卵巢癌組織甲醛固定后常規(guī)石蠟包埋并切片;梯度乙醇水化;3 次PBS 沖洗;根據(jù)對應(yīng)一抗要求修復(fù)相關(guān)組織;過氧化氫10 min 孵育后3 次PBS 沖洗; 分別滴加NFAT3、Mas pin 一抗，室溫2h 孵育；分別滴加對應(yīng)后1h 室溫孵育；吸除PBS 液后，DAB 溶液顯色；蘇木精復(fù)染；封片觀察;已知卵巢癌陽性切片為陽性對照;PBS 代替一抗作陰性對照[5]。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn) 采用半定量評分，染色范圍：陽性細(xì)胞比例＜5%為0 分，5%～25%為1 分，26%～50%為2 分，51%～75%為3 分，＞75%為4 分； 染色強度：無著色為0 分，黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分。染色范圍和染色強度得分之積≥4 分為陽性表達[6]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 統(tǒng)計分析采用SPSS22.0 軟件，年齡、體質(zhì)量等資料采用（x±s)表示，多組間比較使用方差分析,兩兩比較采用LSD-t 檢驗；各組NFAT3、Maspin 陽性率比較使用χ2檢 驗；NFAT3、Maspin相關(guān)性采用Spearman 秩相關(guān)分析。 P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組織NFAT3、Maspin 表達比較 上皮性卵巢癌NFAT3、Maspin 蛋白陽性表達率明顯高于良性卵巢腫瘤和正常卵巢組織（P＜0.05）,見表2 和圖1。

表2 各組織NFAT3、Maspin 表達比較

圖1 免疫組化染色圖

2.2 NFAT3 表達與臨床病理特征關(guān)系 臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、中低分化和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者NFAT3 蛋白陽性表達率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期、高分化和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P＜0.05），見表3。

2.3 Maspin 表達與臨床病理特征關(guān)系 臨床分期Ⅲ～Ⅳ期和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Maspin 蛋白陽性表達率明顯低于Ⅰ～Ⅱ期和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者 （P＜0.05），見表4。

2.4 相關(guān)性分析 將上皮性卵巢癌組織NFAT3 和Maspin 蛋白進行相關(guān)分析，結(jié)果顯示：上皮性卵巢癌組織NFAT3 和Maspin 蛋白呈負(fù)相關(guān)(rs=-0.373，P＜0.05)，見表5。

表3 NFAT3 表達與臨床病理特征關(guān)系

表4 Maspin 表達與臨床病理特征關(guān)系

3 討論

上皮性卵巢癌是最常見的卵巢癌類型,屬于女性生殖系統(tǒng)腫瘤死亡率最高的惡性腫瘤,由于缺乏高特異性的腫瘤標(biāo)記物和早期診斷的特異性臨床癥狀,上皮性卵巢癌的5 年生存率非常低,不足20%[7]。現(xiàn)階段關(guān)于卵巢癌的發(fā)病機制尚存在分歧，但普遍認(rèn)為可考慮從分子或基因水平研究細(xì)胞周期的相關(guān)調(diào)控機制,分析惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程。

表5 相關(guān)性分析

NFAT 是表達于淋巴細(xì)胞和活化T 細(xì)胞的一種轉(zhuǎn)錄因子,可抵抗多種致癌物質(zhì)，而激活的NFAT可誘導(dǎo)IL-8、TNF-α 及COX-2 等各種與癌癥進展有關(guān)的細(xì)胞因子的表達[8,9]。 甲狀腺、前列腺及乳腺等人體多種器官均可發(fā)現(xiàn)Maspin 的高表達, 而對應(yīng)部位的惡性腫瘤細(xì)胞中存在Maspin 的表達下調(diào)甚至表達缺失, 這均提示Maspin 的表達可能與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展具有密切相關(guān)性[10]。 但早期的研究[11，12]發(fā)現(xiàn)正常的卵巢組織并未發(fā)現(xiàn)Maspin 的表達，國內(nèi)也有研究發(fā)現(xiàn)卵巢癌中Maspin 存在高表達，這也說明了Maspin 在卵巢腫瘤進展過程中的表達復(fù)雜化，需要研究者給予額外的重視。

本研究對各組織NFAT3、Maspin 表達比較結(jié)果顯示上皮性卵巢癌NFAT3、Maspin 蛋白陽性表達率明顯高于良性卵巢腫瘤和正常卵巢組織。 上述結(jié)果說明NFAT3、Maspin 均有可能成為診斷上皮性卵巢癌重要指標(biāo)。 本研究中Maspin 的結(jié)果入前列腺癌及乳腺癌的結(jié)果相反可能是因為Maspi在腫瘤細(xì)胞中呈現(xiàn)出復(fù)雜的后生性改變,特別是甲基化和轉(zhuǎn)錄因子均可通過轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)上調(diào)Maspin 的表達。

NFAT3 表達與臨床病理特征關(guān)系結(jié)果顯示臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、中低分化和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者N FAT3 蛋白陽性表達率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期、 高分化和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者。 該結(jié)果說明NFAT3 可能參與上皮性卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展，與惡性腫瘤的惡性程度正相關(guān)。 Maspin 表達與臨床病理特征關(guān)系結(jié)果顯示臨床分期Ⅲ～Ⅳ期和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Maspin 蛋白陽性表達率明顯低于Ⅰ～Ⅱ期和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者。 該結(jié)果提示Maspin 的陽性表達情況隨卵巢腫瘤的發(fā)展而下降,可以成為卵巢癌預(yù)后的重要標(biāo)記物。 相關(guān)研究[13-16]對胃癌及正常黏膜的Maspin 表達情況研究也發(fā)現(xiàn)了相似結(jié)果,我們推測Maspin 可能是通過抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和運動能力，增加細(xì)胞黏附性等抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。

本研究將上皮性卵巢癌組織NFAT3 和Maspin 蛋白進行相關(guān)分析，結(jié)果顯示：上皮性卵巢癌組織NFAT3 和Maspin 蛋白呈負(fù)相關(guān)。該結(jié)果提示NFAT3 和Maspin 蛋白可通過相關(guān)信號通路或路徑進行調(diào)控，NFAT3 的活化抑制了Maspin 的表達，并在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用，這為疾病的預(yù)后提供新的參考指標(biāo)。

綜上所述，上皮性卵巢癌組織NFAT3、Maspin表達上調(diào)，與臨床分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，兩者間存在負(fù)相關(guān)關(guān)系。