撫州市CoxA6 的流行特征及病原核酸檢測結(jié)果分析

朱智龍，黃凡卿，劉華振

（1.撫州市疾病預(yù)防控制中心，江西 撫州344000；2.樂安縣疾病預(yù)防控制中心，江西 撫州344300）

手足口病 （hand,foot,mouth disease, HFMD）是腸道病毒屬A 組腸道病毒引起的發(fā)熱出疹綜合征,主要感染病原體是腸道病毒71 型(enterovirus 71,EV71)和柯薩奇病毒A16 型(Coxsackie virus A16,CoxA16), 近年來CoxA6 和CoxA10 感染也呈現(xiàn)上升趨勢。 如繼續(xù)僅開展手足口病的腸道病毒通用型、EV71 型、CoxA16 型常規(guī)核酸檢測難以達到預(yù)期效果。 我市對非EV71、非CoxA16 型腸道病毒陽性標(biāo)本進一步開展CoxA6 和CoxA10 型核酸檢測，完善手足口病病原譜,掌握其流行規(guī)律。報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2018 年7 月至2019 年6 月, 撫州市以縣（區(qū)）為單位,采集初次就診手足口病病例咽拭子樣本696 例。 其中男性435 例，女性261 例，年齡7 個月~5 歲。所有標(biāo)本均按要求運送和保存。

1.2 主要試劑及器材 RNA 提取采用Promega 核酸自動純化儀及配套試劑盒；熒光定量EV、EV7l、CoxAl6、COXA6 和COXA10 型核酸檢測試劑盒由深圳生科原生物股份有限公司提供； 擴增儀為BIO-RAD CFX96 Real-Time System。

1.3 病毒核酸檢測 核酸提取按照Promega 公司的提取試劑盒說明書提取病毒RNA。EV、Ev7l、CoxA l6、COXA6 和COXA10 型核酸檢測反應(yīng)體系和條件按照深圳生科原公司HFMD 病毒熒光定量RTPCR 檢測試劑盒說明書操作， 擴增條件為反轉(zhuǎn)錄和預(yù)變性：50℃,10min,95℃,3min; 擴增：95℃，5s,55℃，60s, 循環(huán)數(shù)45 次， 檢測通道有明顯擴增曲線， 檢測結(jié)果Ct≤35.5， 有明顯指數(shù)增長為陽性，35.538.5 或無Ct 為陰性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 使用Excel 2007 及SPSS l7.0 軟件進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果

2.1 核酸檢測結(jié)果 2018 年7 月－2019 年6 月共采集的696 例HFMD 試子樣本進行Real-time PCR 檢測。 檢出腸道病毒陽性樣本396 例, 其中EV71 陽性19 例，CoxA16 陽性157 例，非EV71、非CoxA16 型陽性220 例，占總陽性的55.56%。 進一步分型,檢出CoxA6 陽性138 例,CoxA10 陽性4 例,其它未分型腸道病毒陽性78 例，見表1。CoxA6 陽性病例中,男性97 例，女性41 例(χ2=4.46，P<0.05)；9-11 月和4 月發(fā)病數(shù)最多,分別占全年的12.32%、15.94%、25.36%和12.32%。

2.2 不同年齡CoxA6 陽性HFMD 分布 <1 歲、1歲、2 歲、3 歲、4 歲、5 歲CoxA6 陽性HFMD 占發(fā)病總數(shù)的比例分別為13.04%(18/138)、44.93%(62/138)、28.26%(39/138)、6.52%(9/138)、5.80%(8/138)、1.45%(2/138)；年齡最小的7 個月,最大的5 歲。1 歲的發(fā)病人數(shù)最多，2 歲的次之，見圖1。

2.3 不同縣區(qū)CoxA6 陽性HFMD 分布 全市各縣(區(qū))均有CoxA6 陽性的HFMD 患者，發(fā)病數(shù)水平差別較大，從高到低依次為崇仁縣、臨川區(qū)、樂安縣、南豐縣、金溪縣、資溪縣、廣昌縣、黎川縣、宜黃縣、東鄉(xiāng)區(qū)和南城縣，見圖2。

表1 2018.7-2019.6 撫州市HFMD 病毒核酸檢出情況的比較

圖1 CoxA6 陽性HFMD 不同年齡分布情況

3 討論

圖2 CoxA6 陽性HFMD 縣（區(qū)）分布情況

引起手足口病的腸道病毒有20 多種，其中以CoxA16 型和EV71 型最為常見[1,2]。近年來，CoxA16和EV71 型腸道病毒流行在減弱，未分型腸道病毒呈不斷增長趨勢[3,4]；各地未分型腸道病毒中又以C oxA6 型居多,也存在CoxA10 型[5,6]。 通過此次研究發(fā)現(xiàn)，非EV71、非CoxA16 型陽性已經(jīng)占到總陽性的55.56%，而CoxA6 是非EV71、非CoxA16 型陽性的主要致病毒株,占62.73%(138/220)，CoxA10 型檢出4 例。 CoxA6 型陽性患者全年除了2 月份外，均有發(fā)病，高峰期在9-11 月份[7]，4 月份有個小高峰。 可能與撫州市的空氣潮濕，氣候溫暖等自然因素有關(guān)，適于病毒繁殖，九月份又是大批新生入學(xué)的開學(xué)期，加之室內(nèi)空氣流通性較差，均易于疾病傳播。

此次年齡組研究發(fā)現(xiàn)，CoxA6 陽性HFMD 的兒童年齡集中在1 歲和2 歲組,發(fā)病的平均年齡比較小,與黃浩等人的報導(dǎo)相似[8,9]。 提示我們幼兒應(yīng)是預(yù)防CoxA6 陽性HFMD 的重點人群。 其原因為此階段兒童對病毒的防御能力相對較差, 喜歡觸摸、抓握和舔食東西等因素有關(guān),導(dǎo)致發(fā)病率高。隨著年齡增長，好的衛(wèi)生習(xí)慣增強,患病率逐漸下降，所以散居兒童明顯高于托幼兒童。 這也與幼兒園加強防控措施，群眾就診意識增強密切相關(guān)。 在性別分布上，男性多于女性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.46，P<0.05)，與張穎等人的報導(dǎo)相似[10]男孩更加好動，更容易通過消化道感染病毒。

撫州市CoxA6 陽性HFMD 呈現(xiàn)明顯區(qū)域性分布，2018 年9 月－2019 年6 月,崇仁縣陽性率最高，其次為臨川區(qū)和樂安縣，與崇仁縣均為相鄰，城鄉(xiāng)結(jié)合部，流動人口和非法個體診所較多，因此較易造成流行。

總之，HFMD 的傳染源是病人和健康帶毒者，隨著未分型腸道病毒不斷增長,分析手足口病新的病原譜及其流行規(guī)律，為我市形成比較實用，有效的手足口病防控體系提供科學(xué)依據(jù),對疾病的早期防控和治療有重要意義。