血清Klotho 蛋白在妊娠期糖尿病早期腎損傷中臨床意義

吳昌志，余興火

（江西省婦幼保健院檢驗(yàn)科，江西 南昌330006）

隨著經(jīng)濟(jì)社會(huì)的發(fā)展及二胎政策的放開，妊娠期糖尿病已成為威脅孕產(chǎn)婦尤其是高齡產(chǎn)婦健康的一大公共衛(wèi)生問題[1-3]。 妊娠期糖尿病既是巨大兒、新生兒黃疸、新生兒低血糖和孕婦2 型糖尿病的高危因素,又可導(dǎo)致妊娠期糖尿病腎臟疾病并發(fā)癥[4,5]。 近年來，妊娠期糖尿病導(dǎo)致的腎功能損傷發(fā)病率日益增高。 妊娠期糖尿病早期腎損傷疾病在臨床上的早期表現(xiàn)主要是蛋白尿、腎小球?yàn)V過率升高和后期腎功能緩慢減退[6]。 klotho 蛋白是1997年由日本科學(xué)家在自發(fā)性高血壓大鼠中發(fā)現(xiàn)的具有抗衰老活性的蛋白,既往的研究主要集中在細(xì)胞存活、增值和凋亡等抗衰老功能，近年發(fā)現(xiàn)其也參與調(diào)節(jié)機(jī)體能量代謝過程[7,8]。 klotho 對(duì)能量代謝方面的影響,促使我們對(duì)其在妊娠期糖尿病早期腎損傷疾病的可能作用進(jìn)行了系列研究,我們前期的研究發(fā)現(xiàn)klotho 蛋白在妊娠期糖尿病表達(dá)水平顯著降低，并與血糖控制指標(biāo)呈負(fù)相關(guān)。 因此我們推測(cè)klotho 蛋白對(duì)妊娠期糖尿病可能起到保護(hù)作用，而其在妊娠期糖尿病早期腎損傷疾病相關(guān)研究還未見文獻(xiàn)報(bào)道。 本研究以妊娠期糖尿病早期腎損傷疾病為研究對(duì)象，分析klotho 蛋白在該病過程中的變化趨勢(shì),為妊娠期糖尿病早期腎損傷疾病預(yù)防與治療提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 妊娠期糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)：采用美國(guó)糖尿病協(xié)會(huì)推薦的OGTT 試驗(yàn),孕婦在24~28 周75 g 葡萄糖口服后,分別采集空腹、口服葡萄糖1、2h三次標(biāo)本進(jìn)行血糖檢測(cè),三次血糖值分別達(dá)到或超過5.1mmol/L、10.0mmol/L、8.5mmol/L 則 判 定 為 妊娠期糖尿病[9]。本研究招募入研究對(duì)象共158 例,其中妊娠期糖尿病早期腎損傷疾病患者49 例、妊娠期糖尿病58 例和正常妊娠孕婦51 例, 均于20 18年11 月至2019 年11 月在江西省婦幼保健院孕期檢查或住院治療的孕婦， 年齡24~46 （28±4.8）歲，孕婦于24~28 周行OGTT 試驗(yàn)，測(cè)量孕婦空腹Glu、口服葡萄糖后1、2h 血糖及24h 微量白蛋白尿等指標(biāo)。 其中妊娠期糖尿病早期腎損傷疾病組按照24h 微量白蛋白尿分為妊娠期糖尿病微量白蛋白尿組（20~300mg/24h) 28 例和妊娠期糖尿病大量白蛋白尿組（>300mg/24h）21 例，所有入組的孕婦均為中低危人群、單胎妊娠、無高血壓、心血管疾病、肝腎疾病史,近期無外傷手術(shù)史,此次懷孕排除急慢性感染史、無呼吸系統(tǒng)和泌尿生殖系統(tǒng)炎癥疾病史，無其他產(chǎn)科并發(fā)癥和合并癥。

1.2 血清Klotho 蛋白含量檢測(cè) 采用人α-Klotho和β-klotho 蛋白酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒,分別購自欽城生物有限公司、百奧萊博有限公司，操作步驟按照商品試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPPS17.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以mean±s 表示,非正態(tài)分布變量以四分位間距表示而后進(jìn)行分析。 多組間比較采用單因素方差分析,血漿Klotho 蛋白水平與指標(biāo)參數(shù)的關(guān)系采用Pearson 相關(guān)分析, 其各組分的相對(duì)危險(xiǎn)度采用多元逐步回歸分析。 P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 α-Klotho 和β-klotho 蛋白在妊娠期糖尿病早期腎損傷疾病組、 妊娠期糖尿病組和正常妊娠組分布情況 α-Klotho 和β-klotho 蛋白在妊娠期糖尿病早期腎損傷疾病組表達(dá)水平明顯低于妊娠期糖尿病組及正常妊娠組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），α-Klotho 和β-klotho 蛋白在各組表達(dá)水平為正常妊娠組>妊娠期糖尿病組>妊娠期糖尿早期腎損傷疾病組, 且α-Klotho 和β-klotho 蛋白在正常妊娠組及妊娠期糖尿病組比較差異同樣有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

表1 各組α-Klotho 和β-klotho 蛋白水平

2.2 在妊娠期糖尿病早期腎損傷疾病組α-Klotho和β-klotho 蛋白與24h 微量白蛋白尿相關(guān)性 在妊娠期糖尿病早期腎損傷疾病人群中血清α-Klotho 和β-klotho 蛋白隨著24h 微量白蛋白尿升高表達(dá)水平下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2 妊娠期糖尿病早期腎損傷疾病組α-Klotho和β-klotho 蛋白與24h 微量白蛋白尿分布

3 討論

妊娠期糖尿病是一種特殊類型的糖尿病，一般指妊娠期首次出現(xiàn)或發(fā)現(xiàn)的糖耐量異常。 妊娠期糖尿病發(fā)病率各國(guó)家和地區(qū)有很大差異,流行病學(xué)數(shù)據(jù)提示在1.7~16.7%之間，并且近年來有上升趨勢(shì)[10]。 在我國(guó)，隨著經(jīng)濟(jì)社會(huì)的發(fā)展及二胎政策的放開,肥胖和高齡孕婦所導(dǎo)致的妊娠期糖尿病發(fā)病率急劇升高,對(duì)妊娠期糖尿病展開相關(guān)研究為該病的防治提供重要作用[11]。

由于妊娠期糖尿病是臨床上威脅孕產(chǎn)婦和圍產(chǎn)兒健康和生命的重要疾病之一， 其主要原因之一是長(zhǎng)期高血糖可引起一系列微血管并發(fā)癥，包括妊娠期糖尿病伴腎臟并發(fā)癥和視網(wǎng)膜病變，其中腎臟并發(fā)癥可導(dǎo)致妊娠期糖尿病孕婦腎功能減退甚至衰竭[12]。研究數(shù)據(jù)顯示Klotho 基因主要表達(dá)在腎臟,并在各種腎病模型中表達(dá)下降。 如急性腎損傷往往表現(xiàn)Klotho 蛋白減少, 慢性腎臟疾病Klotho 的表達(dá)也處在下調(diào)水平[13,14]。那么，妊娠期糖尿病及相關(guān)并發(fā)癥患者體內(nèi)Klotho 基因表達(dá)呈現(xiàn)什么樣的趨勢(shì)，Klotho 蛋白能否可以作為妊娠期糖尿病合并腎臟疾病進(jìn)展的生物學(xué)標(biāo)志物值得進(jìn)一步詳細(xì)研究。 目前關(guān)于Klotho 基因在糖尿病患者體內(nèi)表達(dá)水平報(bào)道較多,而血清中Klotho 蛋白水平在妊娠期糖尿病伴腎臟并發(fā)癥相關(guān)研究尚無相關(guān)報(bào)道。 基于我們前期的研究已經(jīng)證實(shí)Klotho 蛋白與妊娠期糖尿病相關(guān),我們猜測(cè)Klotho 蛋白與妊娠期糖尿病伴腎臟并發(fā)癥同樣存在某種相關(guān)性。

首先我們檢測(cè)了娠期糖尿病早期腎損傷疾病患者、妊娠期糖尿病患者和正常妊娠孕婦三類人群中血清Klotho 蛋白水平差異,研究數(shù)據(jù)顯示無論是α-Klotho 還是β-klotho 蛋白在妊娠期糖尿病早期腎損傷疾病組表達(dá)水平明顯低于妊娠期糖尿病組及正常妊娠組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 此外，α-Klotho 和β-klotho 蛋白在各組表達(dá)水平高低依次是正常妊娠組、妊娠期糖尿病組、妊娠期糖尿病早期腎損傷疾病組, 且α-Klotho 和β-klotho蛋白在正常妊娠組及妊娠期糖尿病組同樣具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。由于腎臟近、遠(yuǎn)曲小管是Klotho基因的主要表達(dá)部位，因此，妊娠期糖尿孕婦長(zhǎng)期的高血糖會(huì)導(dǎo)致腎臟近、遠(yuǎn)曲小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)衰老及功能障礙，進(jìn)而使得klotho 蛋白的表達(dá)受到抑制[15]。

眾所周知，腎臟為非可再生器官，如何在慢性腎臟疾病進(jìn)展的過程阻止腎臟功能進(jìn)一步惡化， 從而最大程度保護(hù)腎臟功能是目前臨床醫(yī)生面對(duì)的一大難題。近年來klotho 蛋白在糖尿病腎病診斷中的作用備受關(guān)注[16]。考慮到妊娠期糖尿病可導(dǎo)致腎臟功能異常病理改變,于是我們以妊娠期糖尿病早期腎損傷疾病為研究對(duì)象,將其分為微量白蛋白尿和大量白蛋白尿組, 分析蛋白尿程度與Klotho 蛋白相關(guān)性。我們研究數(shù)據(jù)表明在妊娠期糖尿病合并腎臟疾病人群中血清α-Klotho 和β-klotho 蛋白隨著24h 微量白蛋白尿升高表達(dá)水平下降。進(jìn)一步提示Klotho蛋白可能是預(yù)測(cè)妊娠期糖尿病合并腎臟疾病損傷的早期標(biāo)志物,將有助于妊娠期糖尿病合并腎臟疾病進(jìn)展監(jiān)測(cè)及早期干預(yù)治療。

綜上所述,我們不難發(fā)現(xiàn)，klotho 蛋白在妊娠期糖尿病早期腎損傷疾病的表達(dá)水平隨著腎臟功能逐漸降低而下降，提示klotho 蛋白可能參與妊娠期糖尿病早期腎損傷疾病進(jìn)程。