血清7-AABs、CEA、ProGRP 水平變化與肺癌患者預(yù)后的關(guān)系研究

李曼，翟成凱，張祥杰

（新鄉(xiāng)市第一人民醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科，河南 新鄉(xiāng)453000）

部分地區(qū)的報道研究發(fā)現(xiàn),肺癌的發(fā)病率或者致殘率均具有明顯的上升趨勢[1]。 在長期吸煙或者合并有肺癌家族史的群體中,肺癌的發(fā)病風(fēng)險可持續(xù)上升[2]。臨床上肺癌患者的整體臨床預(yù)后較差,肺癌患者遠(yuǎn)期生存時間較短。 而通過對于肺癌臨床預(yù)后的預(yù)測或者評估,能夠為臨床上肺癌的診療提供理論方面的參考。 血清學(xué)腫瘤蛋白的檢測，能夠在肺癌的診療過程中發(fā)揮作用。7 種自身免疫性抗體（seven autoantibodies，7-AABs）能夠通過反應(yīng)癌細(xì)胞膜異常自身抗原的激活情況,反應(yīng)癌細(xì)胞的持續(xù)性自我擴(kuò)增過程,最終影響到腫瘤細(xì)胞的異常分裂[3]；癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）能夠反應(yīng)癌細(xì)胞的浸潤和粘附過程,評估腫瘤細(xì)胞復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險[4]；胃泌素釋放肽前體(pro-gastrinreleasing peptide，ProGRP) 能夠通過影響到腫瘤細(xì)胞內(nèi)信號通路的激活,最終促進(jìn)肺泡上皮細(xì)胞的持續(xù)病變過程[5]。 為了揭示7-AABs、CEA、ProGRP 的表達(dá)與肺癌患者臨床預(yù)后的關(guān)系,從而為臨床上肺癌的診療提供參考， 本次研究選取2015 年8 月-2017 年8 月在我院接受治療的肺癌患者為研究對象，探討了7-AABs、CEA、ProGRP 的表達(dá)及其與肺癌患者臨床預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015 年8 月-2017 年8 月在我院接受治療的肺癌患者為研究對象。 納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴年齡≥18 周歲；⑵病理確診為肺癌者；⑶無其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病者；排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴不愿參與本項研究者；⑵存在其他部位原發(fā)腫瘤者。 根據(jù)納入排除標(biāo)準(zhǔn)共納入病例數(shù)100 例，男85 例，女15 例，年齡49~78 歲，平均56.27±3.11 歲；對照組納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡≥18 周歲,無腫瘤相關(guān)疾病者,共納入100 例，男70 例,女30 例，年齡56.29±3.07 歲。 本項研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會評審?fù)ㄟ^,且所有患者均知情同意。

1.2 研究方法 采用一次性靜脈血采集器進(jìn)行肘部靜脈血采集，采集5ml 靜脈血后自然放置，取上清液體進(jìn)行檢測。 采用貝克曼庫爾特公司UniCel DxI 800 免疫發(fā)光儀器進(jìn)行CEA、ProGRP 的檢測，配套試劑盒購自北京九強(qiáng)生物公司。

采用ELISA 法進(jìn)行7-AABs 的檢測,采用十字交叉的方法進(jìn)行抗原濃度的測定,采用碳酸鹽緩沖液進(jìn)行抗原稀釋，加入96 孔的酶標(biāo)板中，蓋好酶標(biāo)板蓋后置于4℃冰箱過夜,蒸餾水沖洗3 次，每次5min,輕輕叩擊酶標(biāo)板甩干。每孔中加入5%的脫脂牛奶200μl，置于4℃冰箱過夜，蒸餾水沖洗3 次，每次5min,加入稀釋好的抗體（購自abcum 公司 批號：20083845 濃度1：800），蒸餾水沖洗3 次，每次5min，每孔中加入100μl 的底物，顯色后在酶標(biāo)儀上進(jìn)行吸光度的檢測。

1.3 評價指標(biāo) 觀察兩組患者7-AABs、CEA、Pro-GRP 水平的差異, 比較不同預(yù)后的肺癌患者7-AABs、CEA、ProGRP 水平的不同。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用Excel 錄入后,采用SPS S 11.5 軟件分析。 7-AABs、CEA、ProGRP 水平使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示, 采用t 檢驗和相關(guān)分析法進(jìn)行統(tǒng)計處理。 P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 研究結(jié)果

2.1 兩組患者7-AABs 水平的比較 觀察組患者的抑 癌 基 因 產(chǎn) 物p53、PGP 9.5、SOX2、GAGE7、ATP結(jié)合RNA 解旋酶GBU4-5、MAGE A1、CAGE 水平高于對照組患者（P<0.001）。 見表1。

2.2 兩組患者CEA、ProGRP 水平的比較 觀察組患者的CEA、ProGRP 水平分別為85.23±4.24μg/L、46.79±5.08pg/ml，高于對照組患者（P<0.001）。 見表2。

表1 兩組患者7-AABs 水平的比較

表2 兩組患者CEA、ProGRP 水平的比較

2.3 不同預(yù)后肺癌患者7-AABs 水平的比較 存活組 患 者 的 抑 癌 基 因 產(chǎn) 物p53、PGP 9.5、SOX2、GAGE7、ATP 結(jié)合RNA 解旋酶GBU4-5、MAGEA1、CAGE 水平低于死亡組患者（P<0.001）。 見表3。

2.4 不同預(yù)后肺癌患者CEA、ProGRP 水平的比較存活組患者的CEA、ProGRP 水平分別為18.92±2.35μg/L、30.25±4.12pg/ml，明顯低于死亡組（t=-8 9.555、-17.447，P<0.001）。 見表4。

2.5 p53、PGP 9.5、SOX2、GAGE7、ATP 結(jié) 合RNA解旋酶GBU4-5、MAGEA1、CAGE 水平與患者預(yù)后的相關(guān)性 相關(guān)分析法結(jié)果顯示，p53、ATP 結(jié)合RNA 解旋酶GBU4-5 與患者預(yù)后密切相關(guān)(r=0.34 2、0.413，P<0.05）。

表3 不同預(yù)后肺癌患者7-AABs 水平的比較

表4 不同預(yù)后肺癌患者CEA、ProGRP 水平的比較

3 討論

持續(xù)性的肺泡腺體上皮細(xì)胞的病變,或者長期環(huán)境、遺傳基因等病理生理因素的刺激，均能夠促進(jìn)肺泡腺體上皮細(xì)胞的異常病變[6]。在年齡大于65歲長期吸煙的男性群體中,肺癌的整體發(fā)生風(fēng)險可明顯上升[7]。 流行病學(xué)隨訪觀察研究發(fā)現(xiàn)，肺癌患者的5 年生存率不超過40%,同時肺癌患者的無瘤生存時間也明顯的縮短[8]。 通過對于肺癌臨床預(yù)后的早期評估,能夠在肺癌的臨床治療方案的確定或者隨訪方式的制定等方面發(fā)揮參考作用。 影像學(xué)檢查雖然能夠在肺癌的診斷過程中發(fā)揮參考作用,但其對于肺癌臨床轉(zhuǎn)歸或者病死風(fēng)險的預(yù)測價值較低，對于肺癌生存預(yù)后評估的滯后性較為明顯。血清鱗狀細(xì)胞抗原或者CA199 等腫瘤指標(biāo), 雖然能夠在肺癌的臨床預(yù)后評估過程中發(fā)揮參考作用。 但依靠CA199 等指標(biāo)評估肺癌臨床預(yù)后的靈敏度不足35%,其對于肺癌臨床預(yù)后評估的特異性較低[9]。 而本次研究的創(chuàng)新性在于探討了7-AABs、CEA、ProGRP 的表達(dá)與肺癌臨床預(yù)后的關(guān)系。

抑癌基因產(chǎn)物P53、 蛋白基因產(chǎn)物9.5（PGP 9.5）、性別決定區(qū)Y 框蛋白2（SOX2）、睪丸抗原G抗原7(GAGE7)、ATP 結(jié)合RNA 解旋酶（GBU4-5）、黑色素瘤抗原A1 （MAGEA1）、 腫瘤相關(guān)基因（CAGE）,作為腫瘤自身免疫性抗體，其能夠在癌基因的激活或者腫瘤細(xì)胞核DNA 的異常分裂過程中發(fā)揮作用[10]； CEA 是非特異性的腫瘤相關(guān)抗原，在腫瘤細(xì)胞線粒體或者內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，CEA 可顯著表達(dá)[11]；ProGRP 是胃泌素調(diào)控相關(guān)因子，其不僅能夠參與到胃腸道激素的分泌過程,同時還能夠影響到胃粘膜腺體上皮細(xì)胞的早期病變過程[12,13]。 目前為止多數(shù)研究探討了CEA 在胃癌患者中的表達(dá)情況, 認(rèn)為在胃癌患者中CEA 蛋白的表達(dá)水平可明顯上升[14]，但對于7-AABs 的分析研究不足。

在本次研究中，可以發(fā)現(xiàn)的是胃癌患者中，腫瘤自身免疫性抗體成分如p53、PGP 9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGEA1、CAGE 的表達(dá)均明顯上升,高于肺囊腫對照組患者，統(tǒng)計學(xué)差異顯著，表明p53、PGP 9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGEA 1、CAGE 的高表達(dá)均能夠影響到肺癌的病情進(jìn)展過程。 這主要由于肺癌癌細(xì)胞的增殖失控，能夠通過誘導(dǎo)T 淋巴細(xì)胞及體液免疫抗體的激活,最終促進(jìn)自身免疫性抗體的合成和釋放。項保利等[15]研究者也一致認(rèn)為, 在肺癌患者中SOX-2 的表達(dá)濃度可隨著肺癌患者的病情進(jìn)展為上升,在肺癌病情較晚嚴(yán)重或者遠(yuǎn)期生存預(yù)后較差的患者中，SOX-2的表達(dá)水平可進(jìn)一步的上升。 肺癌患者中CEA、ProGRP 的表達(dá)濃度也明顯上升，高于肺囊腫患者，統(tǒng)計學(xué)差異明顯，CEA、ProGRP 的上升主要由于肺癌細(xì)胞異常凋亡的過程中,部分癌細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)蛋白的分解,能夠顯著促進(jìn)癌細(xì)胞內(nèi)CEA、ProGRP 的釋放，從而導(dǎo)致外周血中CEA、ProGRP 的上升。 在探討不同因子的表達(dá)與肺癌臨床預(yù)后的關(guān)系中，發(fā)現(xiàn)在存活組肺癌患者中,p53、PGP 9.5、SOX2、GA GE7 等的表達(dá)水平明顯下降，低于病死組患者，這主要由于存活組患者，其體內(nèi)癌細(xì)胞的擴(kuò)增、異常分化及浸潤等病理過程程度較輕,降低了其對于機(jī)體免疫系統(tǒng)的侵犯,從而降低了自身免疫性抗體的合成。 存活組肺癌患者，其體內(nèi)CEA、ProGRP 的表達(dá)濃度同樣明顯下降,低于病死組患者，提示CEA、ProGRP 的表達(dá)與肺癌患者的臨床預(yù)后同樣有關(guān)。臨床上可以通過早期檢測CEA、ProGRP 等指標(biāo)，進(jìn)而協(xié)助預(yù)測肺癌的臨床預(yù)后和轉(zhuǎn)歸情況。 相關(guān)分析研究可見，p53、ATP 結(jié)合RNA 解旋酶GBU4-5 與患者預(yù)后密切相關(guān),提示相比于其他指標(biāo),p53、ATP 結(jié)合RNA 解旋酶GBU4-5 與肺癌患者臨床預(yù)后的緊密程度更高。 臨床上可以通過檢測p53、ATP 結(jié)合RNA解旋酶GBU4-5 等指標(biāo)， 進(jìn)而評估肺癌患者的臨床預(yù)后。

綜上所述,在肺癌患者中7-AABs、CEA、ProGR P 的表達(dá)水平明顯上升, 同時7-AABs、CEA、Pro-GRP 的表達(dá)與肺癌患者的臨床預(yù)后有關(guān)。 但關(guān)于7-AABs、CEA、ProGRP 診斷肺癌臨床預(yù)后的具體血清臨界值仍然需要進(jìn)一步探討。