液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查聯(lián)合免疫細(xì)胞化學(xué)法對(duì)肺癌病理類型的診斷價(jià)值

陶璐

(平頂山市第一人民醫(yī)院 病理科，河南 平頂山 467000)

肺癌為常見(jiàn)肺原發(fā)性惡性腫瘤，發(fā)病率較高且逐年上升，吸煙、環(huán)境污染、職業(yè)粉塵、遺傳等均為其致病因素，患者多存在咳嗽、咳痰、胸悶等癥狀，隨著病情的進(jìn)展可出現(xiàn)肝、腦等其他器官的轉(zhuǎn)移，腦轉(zhuǎn)移或因壓迫誘發(fā)腦疝，嚴(yán)重威脅患者生命安全[1-3]。早期診斷可避免患者錯(cuò)過(guò)最佳治療時(shí)間，有利于臨床制定有效治療方案。不同類型肺癌治療方案不同，采用病理活檢明確肺癌分型準(zhǔn)確度高，但部分患者不適合或不愿接受手術(shù)病理活檢，故尋找其他檢查方法明確肺癌分型，對(duì)保證臨床治療效果、改善患者預(yù)后也具有重要價(jià)值?；诖?，本研究選取平頂山市第一人民醫(yī)院74例肺癌患者，探討液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查(thinprep cytologic test，TCT)聯(lián)合免疫細(xì)胞化學(xué)法(immunocytochemistry，ICC)的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2017年9月至2019年3月平頂山市第一人民醫(yī)院收治的74例肺癌患者，其中男49例，女25例，年齡為25～76歲，平均(47.12±8.56)歲，病程為2～10 a，平均(7.56±1.03)a，體質(zhì)量指數(shù)為17～25 kg·m-2，平均(22.15±1.06)kg·m-2。本研究經(jīng)平頂山市第一人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批通過(guò)。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1納入標(biāo)準(zhǔn) (1)經(jīng)胸部CT、骨掃描檢查、組織病理學(xué)檢查確診為肺癌；(2)存在咳嗽、咳痰、痰中帶血等癥狀；(3)一般資料完整。

1.2.2排除標(biāo)準(zhǔn) (1)合并其他惡性腫瘤者；(2)妊娠期或哺乳期女性；(3)伴有精神疾病、認(rèn)知障礙、溝通障礙者。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1標(biāo)本采集 利用B超定位，常規(guī)消毒鋪巾，行胸腔穿刺，抽取100 mL胸腔積液，靜置5 min，取沉淀液20 mL，混勻，儲(chǔ)存送檢。

1.3.2檢測(cè)抗體 所用抗體為p63、細(xì)胞角蛋白7(cytokeratin 7，CK7)、突觸素(synaptophysin，Syn)、CK5/6、甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1(thyroid transcription factor 1，TTF-1)、神經(jīng)細(xì)胞黏附分子1(neural cell adhesion molecule 1，NCAM-1)，均購(gòu)自美國(guó)Dako公司。

1.3.3TCT檢查 將胸腔積液標(biāo)本放入離心管，離心處理，棄上清液，置漩渦混合器上震蕩30 s，加入5 mL緩沖液，進(jìn)行2次離心，棄上清液，置漩渦混合器上震蕩30 s，進(jìn)行薄層細(xì)胞涂片，采用體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精固定10 min，巴氏染色，制片2張，置于-20 ℃的冰箱中存儲(chǔ)，用于ICC染色。

1.3.4ICC檢測(cè) 將標(biāo)本從冰箱取出，使用蠟筆劃分出6個(gè)區(qū)域，放入丙酮中固定4 h，取出標(biāo)本，于55 ℃烤箱中加熱20 min，采用體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇固定2 min，用去離子水沖洗，微波抗原修復(fù)10 min，使用磷酸緩沖鹽溶液沖洗，每次2 min，共沖洗3次；5%～10%血清室溫封閉15 min，棄血清，用磷酸緩沖鹽溶液沖洗，每次2 min，共沖洗3次。加入抗體p63、CK7、Syn、CK5/6、TTF-1、NCAM-1，置于-4 ℃冰箱中12～24 h，用磷酸緩沖鹽溶液沖洗，每次2 min，共沖洗3次。采用二氨基聯(lián)苯胺顯色溶液顯色(5～10 min)，用蒸餾水終止化學(xué)反應(yīng)，復(fù)染，封固，鏡檢。

1.4 觀察指標(biāo)(1)診斷結(jié)果和診斷符合率；(2)p63、CK7、Syn、CK5/6、TTF-1、NCAM-1抗體在不同類型肺癌中的表達(dá)。(3)細(xì)胞學(xué)涂片表現(xiàn)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以率(%)表示，行χ2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 診斷結(jié)果和診斷符合率74例肺癌患者中，病理結(jié)果證實(shí)，鱗癌33例，腺癌29例，小細(xì)胞癌12例。采用TCT聯(lián)合ICC正確診斷出鱗癌31例，腺癌25例，小細(xì)胞癌11例。TCT聯(lián)合ICC診斷肺癌病理類型的診斷符合率為90.54%(67/74)。

2.2 6種抗體在不同類型肺癌中的表達(dá)在鱗癌、腺癌與小細(xì)胞癌中，各種抗體的陽(yáng)性率相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。p63、CK5/6在鱗癌中陽(yáng)性率較高，分別為93.94%、90.91%；CK7、TTF-1在腺癌中陽(yáng)性率較高，均為96.55%；Syn、NCAM-1在小細(xì)胞癌中陽(yáng)性率較高，均為83.33%。見(jiàn)表1。

表1 6種不同抗體在不同類型肺癌中的表達(dá)[n(%)]

2.3 細(xì)胞學(xué)涂片表現(xiàn)p63在鱗癌中表達(dá)為(4+)，CK7在腺癌中表達(dá)為(4+)，Syn在小細(xì)胞癌中表達(dá)為(4+)，CK5/6在小細(xì)胞癌中表達(dá)為(3+)，TTF-1在腺癌中表達(dá)為(4+)，NCAM-1在小細(xì)胞肺癌中表達(dá)為(3+)。

3 討論

相關(guān)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，每年新增肺癌患者17%，每年因肺癌死亡患者占約25%[4-8]。早期診斷治療是改善患者預(yù)后的關(guān)鍵。不同類型肺癌臨床治療方案和治療重點(diǎn)不同，選用合適的診斷方法，提高診斷準(zhǔn)確度，明確肺癌病理分型，是指導(dǎo)臨床選擇最佳治療方案的關(guān)鍵。通過(guò)手術(shù)切除標(biāo)本病理雖可準(zhǔn)確判斷病理分型，但部分患者不適合手術(shù)活檢，此種診斷方法臨床應(yīng)用有一定局限性。

胸腔積液脫落細(xì)胞學(xué)檢測(cè)為早期診斷肺癌的重要方法之一，因具有無(wú)創(chuàng)、簡(jiǎn)便、可重復(fù)操作等優(yōu)點(diǎn)在肺癌篩查和臨床診斷中得到廣泛應(yīng)用，但傳統(tǒng)胸腔積液制片方法存在細(xì)胞涂片厚度不一、背景模糊等不足，易遮蓋腫瘤細(xì)胞，導(dǎo)致漏診。TCT可最大限度利用標(biāo)本，并能通過(guò)離心將炎癥細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞分離，涂片背景干凈、細(xì)胞分布較為均勻，能清晰呈現(xiàn)細(xì)胞結(jié)構(gòu)及染色情況，可依照TCT結(jié)果初步篩選可疑標(biāo)本，在TCT基礎(chǔ)上聯(lián)合ICC可通過(guò)抗體表達(dá)情況有效實(shí)現(xiàn)疾病鑒別和肺癌分型[9]。本研究以74例肺癌患者為研究對(duì)象，探討TCT聯(lián)合ICC的診斷價(jià)值，結(jié)果顯示，TCT聯(lián)合ICC診斷肺癌的診斷符合率為90.54%，可見(jiàn)該診斷方法診斷符合率較高。p63在機(jī)體中的表達(dá)具有廣泛性和選擇性，其在鱗癌中呈高表達(dá)；CK7多作為腺癌分化類型的客觀指標(biāo)；CK5/6主要表達(dá)于鱗狀上皮基底細(xì)胞及導(dǎo)管上皮基底細(xì)胞，可用于鱗癌、腺癌的鑒別；TTF-1為終末呼吸單位細(xì)胞、腫瘤標(biāo)志物，主要表達(dá)于小細(xì)胞肺癌和腺癌中；NCAM-1為小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌鑒別標(biāo)志物[10]。此外，鑒于病理分型是臨床實(shí)施針對(duì)性治療的基礎(chǔ)，不同類型肺癌各個(gè)抗體表達(dá)水平、陽(yáng)性率存在差異，本研究進(jìn)一步觀察6種抗體在不同類型肺癌中的表達(dá)，研究數(shù)據(jù)表明p63、CK5/6在鱗癌中陽(yáng)性率較高，CK7、TTF-1在腺癌中陽(yáng)性率較高，Syn、NCAM-1在小細(xì)胞癌中陽(yáng)性率較高，進(jìn)一步證實(shí)p63、CK7、Syn、CK5/6、TTF-1、NCAM-1抗體在不同類型肺癌中的表達(dá)存在差異，臨床可根據(jù)各種抗體在肺癌中的陽(yáng)性率判斷患者腫瘤分型，以科學(xué)實(shí)施治療。

綜上所述，TCT聯(lián)合ICC對(duì)肺癌病理類型的診斷符合率較高，各種抗體在不同類型肺癌中陽(yáng)性率不同，可為臨床診斷和分型提供信息支持。