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    IL-23在念珠菌性陰道炎發(fā)病中的作用分析

    2020-09-04 06:21:36孫昌潔高愛(ài)莉代歆悅王煥麗
    關(guān)鍵詞:念珠菌分泌物氧化應(yīng)激

    孫昌潔 高愛(ài)莉 代歆悅 王煥麗

    臨床RVVC患者最常見的致病菌有白念珠菌,RVVC的主要發(fā)病機(jī)制是宿主的防御和毒力因素[1]。研究發(fā)現(xiàn),RVVC的發(fā)病因素有Nrf2信號(hào)通路參與。亮氨酸拉鏈轉(zhuǎn)錄因子家族的成員之一是Nrf2,在與上游抗氧化順式轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件(ARE)相結(jié)合后從而誘導(dǎo)抗氧化酶的基因轉(zhuǎn)錄及F游的Ⅱ相解毒酶。通過(guò)多機(jī)制,Nrf2信號(hào)通路可啟動(dòng)機(jī)體的適應(yīng)性免疫和固有免疫,以對(duì)念珠菌抑制,防止其感染。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 2016年12月~2018年12月來(lái)本所門診就診的105例性活躍期婦女VVC患者作為觀察組,選取同期60例體檢健康者作為對(duì)照組。對(duì)其年齡、婚育狀況等一般資料進(jìn)行登記,年齡均為18~50歲。觀察組患者均行婦科檢查,根據(jù)病史及癥狀嚴(yán)重程度、陰道分泌物涂片真菌鏡檢及真菌培養(yǎng),參照文獻(xiàn)SW對(duì)其臨床癥狀體征進(jìn)行評(píng)分。按單純型和復(fù)雜型(復(fù)發(fā)性、重度、非白色念珠菌所致)VVC進(jìn)行觀察;微生物學(xué)檢測(cè)結(jié)果為真菌涂片陽(yáng)性患者63.81%(67/105),真菌培養(yǎng)陽(yáng)性率80.00%(84/105)。排除標(biāo)準(zhǔn):患有細(xì)菌性陰道炎、滴蟲性陰道炎、性傳播疾病、糖尿病、高血壓、惡性腫瘤及自身免疫性疾病等影響抗氧化因子水平檢測(cè)及免疫指標(biāo)的一些疾病。

    1.2 方法

    1.2.1 收集、檢測(cè)陰道分泌物樣品 對(duì)兩組陰道分泌物進(jìn)行提取,對(duì)其所用的樣品都用棉拭子搜集兩份,并對(duì)其進(jìn)行相應(yīng)的有關(guān)檢測(cè)。對(duì)其中一份棉拭子的滴蟲細(xì)菌及念珠菌等微生物進(jìn)行檢查。備1 ml無(wú)菌磷酸鹽緩沖液(PBS)的離心管,將另一份棉拭子放入其中,并在-80℃的環(huán)境中儲(chǔ)存?zhèn)溆茫?]。

    微生物學(xué)檢測(cè):取載波片,將陰道分泌物置于其上,加入1~2滴的10%的KOH,在高倍鏡下選取10個(gè)及以上視野并對(duì)其檢查,看是否存在芽生砲子或菌絲。在沙氏培養(yǎng)基上對(duì)分泌物進(jìn)行接種,溫度:35℃,對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng),觀察 24~48 h,鑒定并行菌株。對(duì)于沙氏培養(yǎng)基中生長(zhǎng)直徑>1 mm的菌落挑選出來(lái)并對(duì)其進(jìn)行革蘭染色,利用顯微鏡對(duì)其進(jìn)行觀察,分析是霉菌或者酵母菌。如果其為酵母菌,對(duì)于純培養(yǎng)基所生長(zhǎng)的菌落用無(wú)菌接種環(huán)對(duì)其輕輕挑取,并將其接種到念珠菌顯色培養(yǎng)基上,溫箱溫度為37℃,持續(xù)培養(yǎng)48 h。綠色或翠綠色為白色念珠菌菌落顏色;熱帶念珠菌為藍(lán)色;光滑念珠菌為紫色;克柔假絲念珠菌粉紅色;其他念珠菌為白色。

    Nrf2信號(hào)通路下游抗氧化因子主要包括過(guò)氧化氫酶(CAT)、SOD、脂質(zhì)過(guò)氧化物丙二醛(MDA)以及GSH-Px等。檢測(cè)時(shí)可采用ELISA法。

    1.2.2 采集、檢測(cè)靜脈血 對(duì)兩組受試者靜脈血各抽取 3 ml,留取血清,保存 -80℃環(huán)境下備用。釆用ELISA法檢測(cè)氧化應(yīng)激標(biāo)記物AGE、AOPPS;釆用ELISA法檢測(cè)炎癥細(xì)胞因子IL-17、IL-23水平[3]。

    1.3 觀察指標(biāo) 比較兩組Nrf2信號(hào)通路下游抗氧化因子表達(dá)水平,觀察組不同程度VVC患者的陰道分泌物中IL-23水平以及氧化應(yīng)激標(biāo)記物AOPPS、AGE水平。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 兩組Nrf2信號(hào)通路下游抗氧化因子表達(dá)水平比較 所有VVC患者中,其中輕中度VVC患者51例,重度VVC患者21例,RVVC患者33例。治療前,觀察組患者Nrf2信號(hào)通路下游抗氧化因子GSH-Px、SOD、IL-17水平均高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表 1。

    表1 兩組Nrf2信號(hào)通路下游抗氧化因子表達(dá)水平比較 (±s)

    表1 兩組Nrf2信號(hào)通路下游抗氧化因子表達(dá)水平比較 (±s)

    注 :兩組比較,P<0.05

    組別 例數(shù) 抗氧化酶GSH-Px(U/ml)SOD(U/ml)IL-17(ng/L)對(duì)照組 60 0.52±0.18 0.55±0.221.03±0.28觀察組 輕中度VVC 51 0.71±0.22 0.66±0.271.26±0.33重度VVC 21 1.17±0.16 1.26±0.272.36±0.24 RVVC 33 1.12±0.27 0.67±0.351.36±0.08

    2.2 觀察組不同程度VVC患者陰道分泌物中IL-23水平比較 輕中度VVC、重度VVC、RVVC患者陰道分泌物中IL-23水平分別為(1.25±0.29)、(1.12±0.33)、(0.91±0.31)pg/ml,三類患者比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

    2.3 觀察組不同程度VVC患者氧化應(yīng)激標(biāo)記物AOPPS、AGE水平比較 觀察組不同程度VVC患者AOPPS、AGE水平比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

    表2 觀察組不同程度VVC患者氧化應(yīng)激標(biāo)記物AOPPS、AGE 水平比較 (±s)

    表2 觀察組不同程度VVC患者氧化應(yīng)激標(biāo)記物AOPPS、AGE 水平比較 (±s)

    注:不同程度VVC患者比較,P<0.05

    類型 例數(shù) AOPPS(μmol/L) AGE(μg/ml)輕中度VVC患者 51 24.33±2.16 3.14±0.54重度VVC患者 21 31.67±5.84 2.66±2.51 RVVC患者 33 25.22±6.91 3.52±1.74

    3 討論

    臨床中常見的皮膚疾病中VVC是的一種由念珠菌感染引起的黏膜疾病,難愈、頑固、易復(fù)發(fā)是該病的主要特征,婦女群體中75%的人曾患此病,當(dāng)中約8%最后轉(zhuǎn)化為了RVVC。該病給婦女身心、工作和生活等帶來(lái)諸多影響[4]。目前尚未明確VVC的具體發(fā)病原因,但大量的試驗(yàn)和數(shù)據(jù)說(shuō)明VVC的發(fā)病過(guò)程炎癥和氧化應(yīng)激參與了反應(yīng)。根據(jù)國(guó)內(nèi)外研究結(jié)果以及前期研究結(jié)果可以推測(cè)在VVC發(fā)生發(fā)展中Nr12通路有較好的調(diào)節(jié)作用[5]。本研究通過(guò)對(duì)VVC患者中GSH-Px等抗氧化酶表達(dá)水平、IL-17等表達(dá)水平及氧化應(yīng)激指標(biāo)AOPPS和AGE水平的系統(tǒng)性分析,梳理炎癥因子與Nr12通路直接的聯(lián)系和相互作用,并闡明在外陰陰道念珠菌病發(fā)病中宿主Nr12通路對(duì)其的調(diào)控機(jī)制,對(duì)于有效防治VVC提供了新的方案和理論研究依據(jù)。

    氧化應(yīng)激與炎癥參與了VVC的發(fā)生發(fā)展,Thl7和IL-17在念珠菌性陰道炎的發(fā)病過(guò)程中具有保護(hù)性免疫作用,而Nrf2通路是最重要的抗氧化通路,該通路不但可以啟動(dòng)內(nèi)源性和外源性應(yīng)激監(jiān)測(cè)途徑,且Nrf2尚可誘導(dǎo)IL-17表達(dá),已有研究證實(shí)NH2誘導(dǎo)IL-17D在介導(dǎo)腫瘤及病毒監(jiān)測(cè)方面具有重要作用,而1L-17在多種病原微生物尤其是細(xì)胞外病原體和真菌所致的感染性疾病中起著重要的抗感染作用,且IL-17對(duì)外陰陰道念珠菌病具有免疫保護(hù)作用。IL-23是新近發(fā)現(xiàn)的一種異二聚體新型蛋白質(zhì)分子,由IL-23p19和IL-12p40兩個(gè)亞單位通過(guò)二硫鍵組成的細(xì)胞因子,系IL-12家族成員,它主要由活化的樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌,IL-12R 1和IL-23R為其受體IL-23在天然免疫中和獲得性免疫中都發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。在天然免疫方面,IL-23可以激活機(jī)體未致敏T淋巴細(xì)胞,特異性的誘導(dǎo)INF-γ和IL-17的分泌,同時(shí),樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的IL-23反過(guò)來(lái)還會(huì)作用于樹突狀細(xì)胞,促進(jìn)IL-12和γ-INF的產(chǎn)生,盡而發(fā)揮對(duì)機(jī)體的保護(hù)功能,以抵御病原微生物的感染。在獲得性免疫方面,IL-23可以發(fā)動(dòng)另外一條T細(xì)胞發(fā)育途徑,對(duì)記憶性T細(xì)胞的反應(yīng)良好,在這一過(guò)程中扮演著非常重要的角色,促使T細(xì)胞亞單位分泌致炎性因子IL-17,再次激活巨噬細(xì)胞,在自身免疫反應(yīng)中有著重要作用。這些研究的發(fā)現(xiàn),說(shuō)明IL-23是連接機(jī)體天然免疫系統(tǒng)和獲得性免疫系統(tǒng)之間的一條重要的紐帶,具有十分復(fù)雜的生物學(xué)功能,在抗感染免疫、抗腫瘤免疫及自身免疫性疾病方面有著非常重要的作用。

    由于陰道感染,破壞了抗氧化物和氧化因子之間的平衡,氧化應(yīng)激促進(jìn)了陰道炎的發(fā)生發(fā)展。AGE和AOPPS是通過(guò)大分子的轉(zhuǎn)化而形成的化合物,是氧化應(yīng)激的新型標(biāo)志物,也是較好的炎癥介質(zhì),能更好地顯示急性氧化應(yīng)激過(guò)程,在多種疾病中可作為氧化應(yīng)激和炎癥標(biāo)志物的蛋白質(zhì)。

    綜上所述,Nrf2通路既可以保護(hù)宿主免受氧化應(yīng)激反應(yīng)所致的損傷及感染引發(fā)的炎癥,又增強(qiáng)了宿主免疫對(duì)念珠菌的清除能力,以降低RVVC的發(fā)生。

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