水產品生物活性肽的研究進展

蔡燕萍，余曉婉，張慶春，何瀟庭，邵天倫，韓眺，劉曄峰，丁玉庭,3，劉建華,3*

1(浙江工業(yè)大學 食品科學與工程學院，浙江 杭州， 310014)2(國家遠洋水產品加工技術研發(fā)分中心(杭州)，浙江 杭州， 310014)3(海洋食品精深加工關鍵技術省部共建協同創(chuàng)新中心，大連工業(yè)大學，遼寧 大連，116034)4(浙江養(yǎng)生堂天然藥物研究所有限公司，浙江 杭州，310024)

生物活性肽是以蛋白質為原料，經過水解及分離純化后得到的具有特殊生物活性的蛋白水解物。生物活性肽相比于蛋白質水解產物氨基酸而言，更容易被人體吸收利用。生物活性肽能夠調節(jié)機體生命活動，具有一定的藥用特性和營養(yǎng)特性，在日益關注健康與飲食的今天，越來越受到人們的重視。但是在親本蛋白序列中，肽是無活性的，必須釋放才能發(fā)揮其作用，目前主要通過直接提取法或酶水解法獲得。

國內外研究的活性肽主要來源于陸生動植物，如研究最早也是最深入的陸生動物乳、肉、蛋活性肽，以及植物來源的大豆肽、大米活性肽、玉米活性肽[1]。水產品生長環(huán)境獨特，是結構多樣的生物活性肽的豐富來源，近年來引起學者的極大興趣。

1 水產品生物活性肽概述

水產品生物由于其極端的生長環(huán)境，相較于陸生動植物蛋白來源于的蛋白質，顯示了出獨特的優(yōu)勢與特性。譬如，藻類生物為了防止嚴重的氧化損傷，可以產生抗氧化肽而提供自我保護[2]；水產品生物毒性較強的多肽類，通常作用于離子通道，具有特定的生理活性，如神經保護肽、鎮(zhèn)痛肽、抗病毒肽等[3]；研究顯示，大多數水產品加工副產物的蛋白水解產物中Gly、Pro、Val、Tyr和Glu的含量更高[4]。水產品生物活性肽的優(yōu)勢與特性見表1。

表1 水產品生物活性肽的優(yōu)勢與特性

目前，盡管已經報道了大量魚類來源的生物活性肽，但是其他水產品生物，例如甲殼類、軟體動物來源的生物活性肽尚未被大量研究。而以水產品魚、蝦、貝、甲殼類為主的抗菌、降血壓、抗癌活性肽也未進行過系統(tǒng)的概述。

2 水產品生物活性肽的制備、分離純化和結構鑒定方法

2.1 水產品生物活性肽的制備方法

通常從生物體中獲得生物活性肽主要有以下3種途徑：(1)通過提取直接從生物體內分離得到天然活性肽類；(2)通過體外水解蛋白質降解獲得具有生理功能的活性肽；(3)人工合成法制備生物活性肽，酶合成、化學合成或重組DNA技術。

目前在水產多肽的制備中酶法水解是一個熱門技術，尤其在食品與藥物中，因為該過程安全、可控，反應條件溫和。同時，蛋白質類物質在酶的催化下，降解產生的小肽，不會與體內氨基酸吸收產生競爭，因此可以用制備得到的多肽模擬人體蛋白的體外降解。

2.2 水產品生物活性肽的分離純化和結構鑒定方法

水解產物本身也可以用作生物活性化合物的商業(yè)來源。但是，從水產生物中提取的多肽，通常含量較低，而經分離純化后的肽其生物活性較高。因此，分離純化程度是水產活性肽研究的關鍵環(huán)節(jié)。目前，水產品生物活性肽已通過多種技術進行了研究，包括超濾、凝膠過濾、離子交換色譜和反相高效液相色譜技術[12]。

純化后的水產品生物活性肽一般需要深入進行結構鑒定的研究。通常采用質譜技術、凝膠過濾色譜、電噴霧串聯質譜、高效液相色譜分離或蛋白質測序闡明其一級結構用于檢測分子質量、氨基酸序列或氨基酸組成。

3 水產品生物活性肽的研究進展

3.1 抗氧化活性肽

區(qū)別于植物體中通過抑制線粒體損傷或抑制亞麻酸氧化體系的脂質過氧化和畜禽體中抑制必需脂肪酸的過氧化而具備的抗氧化功能，水產品中的抗氧化活性是由于疏水性氨基酸或小分子肽的抗氧化作用。目前，具有抗氧化能力的小分子活性肽已成為當前的研究熱點之一[13]。

3.1.1 源于魚類

魚類資源豐富易捕撈，是制備抗氧化肽最常見的水產資源。目前魚類抗氧化肽的制備多來源于低值魚及其下腳料。SAMPATH等[14]采用連續(xù)色譜分離技術從竹莢魚和黃花魚的皮膚蛋白水解物中純化出2種具有抗氧化特性的肽。并利用電子噴霧電離雙質譜法鑒定其肽序列分別為Asn-His-Arg-Tyr-Asp-Arg和Gly-Asn-Arg-Gly-Phe-Ala-Cys-Arg-His-Ala。結果表明與天然抗氧化劑α-生育酚相比，這2種肽均顯示出更高的抗多不飽和脂肪酸過氧化活性，可有效地用作食品添加劑和藥物。

3.1.2 源于貝類

貝類蛋白在水產品功能活性肽的研究中占比相對較多，但起步較晚。目前，酶法水解貝類多肽研究較多，主要集中在對扇貝、牡蠣和文蛤等重要貝類資源的利用。WANG等[15]采用凝膠過濾色譜法和反相高效液相色譜技術分離純化牡蠣水解物的抗氧化活性肽，采用新技術納米ESI-MS/MS分析氨基酸序列，得到2種新型抗氧化肽，Pro-Val-Met-Gly-Asp和Gln-His-Gly-Val，這2種肽在其序列中分別包含組氨酸和蛋氨酸，與當前其他抗氧化肽沒有任何顯著同源性，有助于中國工業(yè)更好地利用廉價的生物活性材料。

3.1.3 源于甲殼類

甲殼類動物不同于其他動物，外殼堅硬、體積較大，從蝦蟹殼中制備抗氧化肽，原料數量大。黃湛媛等[16]為實現竹節(jié)蝦的高值化利用，采用超聲輔助酶解工藝對其蝦頭副產物進行酶解，利用超高壓液相色譜串聯質譜技術對肽結構進行表征，結果顯示相對分子質量<3 kDa的組分具有顯著的抗氧化活性，采用超高壓液相色譜串聯質譜聯用技術對抗氧化肽的結構進行鑒定為Gly-Asn-Gly-Leu-Pro。

3.1.4 源于藻類

藻類被視為天然的生物反應器，是目前已知食品中蛋白質含量和質量最高的，是天然抗氧化肽的重要來源[17]。

ZHANG等[18]采用不同蛋白酶從藻類中制備抗氧化肽，結果顯示α-胰凝乳蛋白酶的水解產物具有最高的抗氧化活性，通過超濾、凝膠排阻色譜和反相高效液相色譜進行分離、純化后，再通過超高效液相色譜-串聯質譜(ultra performance liquid chromatography/tandem mass spectrometry，UPLC-MS/MS)鑒定抗氧化肽的序列為Glu-Leu-Trp-Lys-Thr-Phe，結果證實，Glu-Leu-Trp-Lys-Thr-Phe可以顯著清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH)自由基，自由基清除率為50%時所需樣品的濃度(EC50:concentration for 50% of maximal effect，EC50)為1.514 mg/mL。SHEIH等[19]采用胃蛋白酶酶解從藻類蛋白廢料中獲得抗氧化肽，通過反相高效液相色譜對目標肽段進行進一步的分離純化，用質譜儀鑒定其氨基酸序列為Val-Glu-Cys-Tyr-Gly-Pro-Asn-Arg-Pro-Gln-Phe，半抑制濃度(50% inhibiting concentration， IC50)為(256.4±1.2) μmol/L，研究顯示，廉價的藻類蛋白廢料可能是生產抗氧化肽的新選擇。

3.1.5 源于水產品加工副產物

中國水產資源豐厚，總魚蝦貝類的捕撈量居全球前列，然而近海岸的水產品加工廢棄物及低值蛋白質資源浪費嚴重，高值化利用低值水產資源越來越成為水產領域研究的熱點。HSU[20]，使用定向酶(orientase，OR)和蛋白酶(protease XXIII，PR) 這2種商業(yè)酶對金槍魚黑肌肉副產物進行酶解制備抗氧化肽。然后，對蛋白質水解物進行Sephadex G-25凝膠過濾層析并利用兩步高效液相色譜法進一步分離肽級分。結果表明，使用2種蛋白酶酶解后分子質量為390～1 400 Da的肽級分顯示出最高的抗氧化活性，來自OR和PR水解產物的2種抗氧化肽的氨基酸序列為Leu-Pro-Thr-Ser-Glu-Ala-Ala-Lys-Tyr和Pro-Met-Asp-Tyr-Met-Val-Thr。

抗氧化肽除了來自于水產品的下腳料外，還來自于部分副產物的膠原蛋白中。WU等[21]采用酶法水解鮭魚皮膚膠原蛋白，超濾后，通過尺寸排阻色譜法進一步純化，并使用質譜鑒定抗氧化肽級分。結果表明，從超濾級分中鑒定出一種新序列肽Pro-Met-Arg-Gly-Gly-Gly-Gly-Tyr-His-Tyr，是一種小分子質量的抗氧化肽，通過抗氧化能力指數(oxygen radical absorbance capacity，ORAC)分析顯示該肽具有抗氧化活性[(2.51±0.14)mmol TE/g]。同時，研究結果表明，超濾級分中的較大肽段(> 3 kDa)可被鑒定為潛在的冷凍保護劑。

3.2 降血壓活性肽

世界各國高血壓平均發(fā)病率為10%～20%，在我國目前，大約有25%的成年人患有此病，預計到2025 年這一比例將高達29%[22]。從水產品中分離純化得到的食源性降血壓肽，來源于生物體本身，相對于人工合成的降壓藥而言，具有對人體組織溫和、安全、親和力強，藥效持久，無副作用等優(yōu)點。因此從水產品中分離純化降血壓肽更加符合當代人的消費理念，具有較好的發(fā)展前景。

酶解水產品制備降血壓肽，最早是從帶魚和沙丁魚開始的，在接下來的數十年間，越來越傾向于向水產品中開發(fā)探索血管緊張素轉換酶抑制成分，發(fā)現蝦、螃蟹、藻類、貝類、羅非魚等水產品的酶解物中，都存在此物質。

3.2.1 源于魚類

水產生物中的降血壓肽，最早是從魚貝類中提取的，目前更多的是集中于對其降血壓機理的研究。部分研究表明血管緊張素轉化酶(angiotensin-converting enzyme，ACE)抑制肽的活性與其結構具有一定的關系，已經報道活性肽在N-末端具有脂肪族氨基酸如Val、Met和Ile，以及諸如Pro、Phe的芳香族氨基酸，將具有較強的抑制作用[23]。此外，大多數抑制ACE的肽至少有1個脯氨酸殘基。吳靖娜等[24]利用復合蛋白酶酶解制備羅非魚魚皮膠降血壓肽，為測定高ACE抑制率的氨基酸組分，通過超濾膜對不同分子質量組分截留純化，從而比較不同組分ACE抑制率。結果表明，ACE抑制活性最強的組分集中在相對分子質量小于2 000 Da以下，對該組分發(fā)揮作用的氨基酸主要是Gly和Pro。

3.2.2 源于貝類

某些海洋貝類肽能夠抑制ACE活性，這些活性多肽通常是加密在親本蛋白的一級結構中，只有當其被釋放出來后才表現出來。牡蠣因其高價值高產量等特點，一直是貝類生物活性肽研究的熱點。

WANG等[25]選用胃蛋白酶酶解牡蠣蛋白，從牡蠣蛋白中釋放出ACE抑制肽，并采用 Sephadex LH-20凝膠過濾色譜和反相高效液相色譜進行分離，制備出具有序列Val-Val-Tyr-Pro-Trp-Thr-Gln-Arg-Phe的九肽，通過給予動物口服實驗，證明其ACE抑制活性的有效性。LIU等[26]采用酶法從珍珠牡蠣肉蛋白中制備降血壓抑制肽，采用超濾，聚乙二醇甲基醚改性的固定化金屬離子親和介質，以及反相高效液相色譜對其水解產物進行分離純化得到2種新型的ACE抑制肽(His-Leu-His-Thr和Gly-Trp-Ala)。結果表明，2種肽均具有較高ACE抑制活性值，分別為(458.1±3.2) 和(109.3±1.5) μmol/L，可通過降低大鼠血壓來證明其降壓活性。

3.2.3 源于甲殼類

甲殼類降血壓肽具有分子質量小、易吸收等特點。李銳等[27]采用體外模擬腸胃消化的方法對克氏原螯蝦蝦頭進行酶解，并通過超濾、凝膠色譜、離子色譜、反向高效液相色譜相結合的方法對其降血壓肽進行分離純化，得到一種新型ACE降血壓肽，分子質量為225 u，肽序列為Pro-Val。朱國萍[28]采用自溶法從其蝦頭副產物中獲得降血壓肽。結果顯示，3 000 Da超濾膜產物的ACE抑制活性和肽含量的活性較高，通過Sephadex G-25、反相高效液相色譜(Reverse phase-high performance liquid chromatography，RP-HPLC)對該組分進行進一步的分離純化，經電噴霧離子源質譜鑒定，推測為2種二肽為Tyr-Pro和Leu- Pro與Ile -Pro。

3.2.4 源于藻類

藻類植物中具有降血壓活性的物質有多肽、胡蘿卜、多糖等，目前從藻類中提取降血壓肽研究較多。KO等[29]對海洋小球藻中的降壓肽進行了研究，結果發(fā)現堿性蛋白酶水解液具有最高的ACE抑制活性，并對堿性蛋白酶解液分子質量進行分級，范圍為低于5 kDa，5～10 kDa和高于10 kDa。結果顯示低于5 kDa的級分顯示出最高的ACE抑制活性，并用于隨后的分離純化；在對其進行進一步分離純化與結構鑒定時，發(fā)現一個降血壓四肽Val-Glu-Gly-Tyr(IC50128.4 μmol/L)。姚興存等[30]采用木瓜蛋白酶酶解條斑紫菜制備活性寡肽，并對其酶解液進行層析分析，測得相對分子質量小于2 000 Da活性肽具有降血壓活性，在最優(yōu)條件下測定ACE抑制肽的半抑制濃度IC50值為4.5 mg/mL。除此之外，國外不少研究人員也對藻類生物中的血管緊張素轉換酶抑制肽進行分離純化，鑒定其蛋白水解產物的降壓作用并通過了解它們的細胞作用機制，建立結構-抑制關系來評估它們在臨床前和臨床試驗中有效性[31]。

3.2.5 源于其他水產原料

除了對幾種常見種類生物的降血壓肽有研究外，軟體動物、腸腔動物中的降血肽也有研究。BALTI等[32]將烏賊肌肉蛋白質進行水解制備降血壓肽，通過各種類型的色譜分離純化活性肽，利用電噴霧質譜和電噴霧串聯質譜測定其分子質量和氨基酸序列，發(fā)現9種新的ACE抑制肽，其中最有效的肽的結構被鑒定為Val-Glu-Leu-Tyr-Pro，Ala-Phe-Val-Gly-Tyr-Val-Leu-Pro和Glu-Lys-Ser-Tyr-Glu-Leu-Pro。結果表明，最高活性的ACE抑制肽Val-Glu-Leu-Tyr-Pro作為ACE的非競爭性抑制劑，將成為營養(yǎng)保健品和藥物對抗高血壓及其相關疾病的有益成分。

3.3 抗菌性活性肽

與市面上流通的抗生素相比，抗菌肽不僅能夠高效殺死細菌，對部分真菌、原蟲、病毒、腫瘤細胞也具有很強的抑殺能力。并且大多數抗菌肽具有較好的水溶性以及穩(wěn)定性，對真核細胞具有低毒甚至無毒性，不容易產生耐藥性，僅含有十肽或者更短肽的氨基酸的寡肽序列，生產成本低[33]。

3.3.1 源于魚類

魚類抗菌肽分布范圍較廣，在魚體體表黏膜、皮膚、小腸、鰓等組織均有過分離得到抗菌肽的報道，因此魚類在受到病原入侵或損傷時能夠迅速進行防御并殺害有害物質。按其生化組織與結構，可將其分為四類。第一類為富含某種氨基酸的線性抗菌肽，不含半胱氨酸。此種類型的抗菌肽由于富含一些堿性氨基酸和α螺旋結構，有利于在細菌細胞膜形成穿孔，細胞膜內磷脂分子的極性端與抗菌肽的極性端相對螺旋翻轉，破壞細胞膜的完整性，使細胞的功能喪失，達到抗菌的目的，因此又可稱為穿孔螺旋模型，如Piscidins、Pleurocidins、Moronecidin，物種來源有鱖魚[34]等。第二類為具有β折疊結構，是由于含多個半胱氨酸折疊而形成，如Hepcidin、Cathelicidins，物種來源有大彈涂魚[35]等。第三類為多存在于魚類的皮膚黏膜中的組蛋白樣抗菌肽，如Parasin，物種來源有鰱魚[36]等。第四類為經酰胺化、糖基化修飾的抗菌肽，這類抗菌肽在相關酶的作用下，通過高爾基體加工時，會脫掉C端一個或多個氨基酸，或再與一些糖基結合，從而變成具有活性的成熟肽，物種來源有鯉魚[37]等。

3.3.2 源于貝類

在海洋貝類中，貽貝的抗菌肽研究較為透徹，它們多數是富含半胱氨酸的陽離子抗菌肽[38]。宋宏霞[39]以紫貽貝為原料，采用復配酶法制備抗菌肽，利用Cellulose-52離子交換柱對其進行分離純化，得到具有廣譜殺菌作用的抗菌肽，且其抗菌效果中革蘭氏陽性菌明顯優(yōu)于革蘭氏陰性菌。

3.3.3 源于甲殼類

1996年首次從甲殼類生物岸蟹(Carcinusmaenas)體內分離出一種小分子的具有殺菌作用的蛋白質[40]。不少研究報道顯示有3種類型的抗菌肽，一種是僅對革蘭氏陰性菌具有專一的殺菌作用，一種是僅對革蘭氏陽性菌具有專一的識別抑制作用，還有一種是對2種菌都起到抑制及殺死作用。EVANS等[41]將殺死的革蘭氏陰性桿菌注射到加利福尼亞刺龍蝦中時，在血液淋巴中出現誘導的殺菌素。

抗脂多糖因子(anti-lipopolysaccharide factor，抗菌肽ALF)，是一種小的堿性蛋白質，已被證明對革蘭氏陰性菌及陽性菌均具有抑制或殺死功能[42]。ENRIQUE等[43]從海洋蝦南美白對蝦中克隆了ALF，并檢測了它在細菌、真菌和病毒感染的先天免疫反應中的作用，這是通過使用體內RNA干擾方法(RNA interference，RNAi)分析ALF產生的表型來完成的。

3.4 其他水產品活性肽

傳統(tǒng)的治療手段對腫瘤細胞的專一性作用差，副作用大，并且長期服用抗癌藥物，人體會產生耐藥性。相對于傳統(tǒng)的藥物治療，抗腫瘤肽分子質量小，易被人體組織吸收利用。與傳統(tǒng)的抗癌藥物相比，其對腫瘤細胞具有較好的靶向作用，親和力強等優(yōu)點而備受研究人員的關注。CHI等[44]通過超濾分級及凝膠色譜技術從血蛤肌肉蛋白水解物中分離出的2種肽被鑒定為Trp-Pro-Pro和Gln-Pro，分子質量分別為398.4 Da和243.2 Da。結果表明，Trp-Pro-Pro具有顯著抑制脂質過氧化，并且在水解產物分級和純化的肽中表現出最高的自由基清除活性。該發(fā)現表明，Trp-Pro-Pro可用于消除在氧化應激條件下產生的過量活性氧(reactive oxygen species，ROS)，并預防由大量自由基引起的癌癥。此外，Trp-Pro-Pro還可以通過清除自由基和誘導癌細胞凋亡來用于癌癥治療。王竹君[45]也從螺旋藻粉末中提取到了抗腫瘤肽。

動脈和靜脈血栓形成是心血管發(fā)病和死亡的主要原因，抑制動脈血栓形成的策略主要集中在阻斷血小板功能上，抗凝血肽通過防止纖維細胞沉積形成血小板聚集來預防和治療血栓的形成。JUNG等[46]從藍貽貝的可食用部分分離出有效的抗凝血寡肽，M.edulis 抗凝血肽(MEAP)，約2.5 kDa分子質量類似于來自扇貝內收肌的鈣調蛋白的EF-手域的氨基酸序列，能有效地與血液中的凝血活性因子相結合，延長凝血酶和活化部分促凝血酶原激酶時間，增強機體抗凝血功能。

4 水產品生物活性肽的結構特征與生物活性關系

4.1 氨基酸序列與水產品生物活性肽活性關系

不同蛋白質水解物和生物活性肽的氨基酸組成的變化大多數受原材料、酶源和水解過程中所改變的參數等因素影響。ACE抑制肽的抑制作用通過氨基酸的N-或C-末端類型而改變，這完全取決于酶的一級結構和選擇[47]。已經報道活性肽在N-末端具有脂肪族氨基酸如Val、Met和Ile，以及Pro、Phe的芳香族氨基酸，將具有較強的抑制作用，肽C-末端存在Tyr、Phe、Trp、Ala、Gly和Pro有助于提高ACE抑制活性[48]。并且，大多數抑制ACE的肽至少有一個Pro殘基或一個Gly殘基。抗氧化活性與氨基酸種類，序列和疏水性有關，疏水性氨基酸中Lys和Met對抗氧化肽的影響最大[49]。迄今為止，大多數已鑒定的魚蛋白抗氧化肽較短(5～16個氨基酸)，并且在其N端和序列中的Pro、His或Tyr處含有疏水性氨基酸(Val和Leu)。Tyr主要清除自由基，因為它們的酚類側鏈充當有效的電子給體。因此，可以終止自由基鏈反應[50]。Pro和Hyp似乎在抑制脂質過氧化中起作用[51]。大多數水產品加工副產物膠原蛋白研究涉及抗氧化劑和ACE抑制活性的多肽結構中，重復了獨特的Gly-Pro-Hyp序列，因此抗氧化和ACE抑制活性可能與這種獨特的氨基酸組成有關[52]。

水產品中的膠原蛋白對黑色素的合成起顯著作用，酪氨酸酶是控制黑色素代謝和兒茶酚胺的關鍵酶，SCHURINK等[53]研究發(fā)現多肽的氨基酸組成，Leu、Val、Phe、Arg和Ala對抑制酪氨酸酶可能起主要作用，因此這些氨基酸的組成及序列對皮膚修復能力具有影響。

4.2 分子質量與水產品生物活性肽活性關系

低分子質量的肽比高分子質量的肽具有更高的生物活性，因為它們更容易被胃腸道吸收[54]。

UMAYAPARVATHI等[55]對從牡蠣蛋白水解物中分離出的生物活性肽進行了體外評估。牡蠣水解產物表現出很強的抗氧化潛力，利用Sephadex G-25凝膠色譜和UPLC-MS對其水解產物進行分離純化，其中DPPH自由基的清除能力最高的3種肽的分子質量均在500～1 500 Da，說明分子質量越小抗氧化活性越高，此外分子質量為515.29 Da的肽段對人結腸癌具有抗癌活性。ZHAO等[56]采用酶解法從海參中制備降血壓肽，通過超濾分級法將水解產物分成3個組分(<10 kDa、<5 kDa、<1 kDa)，其中分子質量<1 kDa的級分具有很高的血管緊張素-I轉換酶抑制活性，IC50值為0.35 mg/mL。KAO等[57]采用2種方法分別對比目魚等7種海水魚在不同分子質量大小的抗冷凍效果與來自短棘魚的2種不同大小的抗凍成分(2 900 Da和4 000 Da)進行比較。結果顯示，這2種方法中，抗凍肽活性都與分子質量呈正相關，但是，當抗凍肽分子量超過4000 Da，每毫克蛋白的抗凍活性下降。因此，就降低冷凍溫度的能力而言，小分子質量的抗凍肽似乎更具優(yōu)勢。

5 總結與展望

綜上所述，水產品生物活性肽由于其獨特的生理活性，已受到國內外研究學者的廣泛關注。產物的利用形式從起初的水產品蛋白，逐漸轉移到對其加工副產物的綜合利用?？寡趸摹⒔笛獕弘牡难芯块_發(fā)起步早已被廣泛報道，但是抗腫瘤肽、抗凝血肽以及高F值寡肽等還有待深入開發(fā)，新型的神經保護肽、抗糖尿病肽、鎮(zhèn)痛肽、抗肥胖肽等也成為研究的熱點。此外，水產生物活性肽的開發(fā)也存在許多共性難題：(1)對生物活性肽的安全性及穩(wěn)定性測試，已經在體外或動物模型試驗中觀察到生物活性肽大多數的生物學效應，但仍需進一步的進行人體和體內干預試驗以證明不同生物活性的功效；(2)原料生存環(huán)境惡劣，結構復雜，分離純化技術較難充分高效地回收功能活性物質，且蛋白原料利用率低，制備成本高；(3)開采復雜，所需設備投入高，受經費以及基礎理論研究的不足，有效開發(fā)利用還存在較多困難；(4)蛋白酶酶切位點廣泛，難以靶向酶解制備；(5)加工過程中存在不愉快的風味，如苦澀味、腥味等；(6)目標肽含量低，功效不顯著；(7)產品在研發(fā)階段與產業(yè)化生產過程中的差異；(8)原料來源廣泛以及提取方式未標準化，使得多肽得率難以實現產業(yè)化與規(guī)?；?。同時，對于作為功能性食品成分的水產品生物活性肽而言，需要考慮與不同食品基質的相容性、胃腸道穩(wěn)定性、生物利用度以及長期穩(wěn)定性等諸多因素。水產品生物活性肽具有廣闊的應用前景,尚有大量的研究工作需要去開展。