卵黃抗體的特性及其應(yīng)用研究

盛雅潔 肖春蘭 趙麗娟 周正宇

摘? 要：卵黃抗體具有化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，生產(chǎn)制備過程簡單、經(jīng)濟(jì)，產(chǎn)量高，適合大規(guī)模生產(chǎn)等優(yōu)勢。在動物疾病防治、醫(yī)藥衛(wèi)生等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用，隨著研究的不斷深入，卵黃抗體的應(yīng)用前景會更加廣闊。

關(guān)鍵詞：卵黃抗體;優(yōu)勢;應(yīng)用

中圖分類號：S852.4? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A? ? ?文章編號：1673-1085（2020）7-0056-03

卵黃抗體是一種存在于卵黃中的免疫球蛋白，目前研究較多的是雞卵黃抗體。當(dāng)禽類機(jī)體受到外來抗原刺激后，法氏囊內(nèi)的B細(xì)胞分化成為漿細(xì)胞，分泌特異性抗體進(jìn)入血液循環(huán)，當(dāng)血液流經(jīng)卵巢時，特異性抗體在卵黃中逐漸蓄積，形成卵黃抗體[1]。

1? 卵黃抗體的生物學(xué)特性及理化性質(zhì)

卵黃抗體是經(jīng)血清中免疫球蛋白轉(zhuǎn)移至卵黃中積累的，因此其分子結(jié)構(gòu)和性質(zhì)與哺乳動物的免疫球蛋白結(jié)構(gòu)相似，但是又存在一些差異[2]。卵黃抗體大部分分子結(jié)構(gòu)與哺乳動物的免疫球蛋白IgG類似，均包括2條輕鏈和2條重鏈，中間由二硫鍵連接。與IgG一樣，F(xiàn)c片段是卵黃抗體的抗原結(jié)合部位，但是卵黃抗體的Fc片段上有2條糖側(cè)鏈，而IgG只有一條。并且卵黃抗體與IgG在Fc片段上的氨基酸組成也具有較大的差異，卵黃抗體不能夠與蛋白A或蛋白G結(jié)合，不能與人類風(fēng)濕因子結(jié)合，也不能激活補(bǔ)體，因而應(yīng)用于哺乳動物后很少引起過敏反應(yīng)[3]。

卵黃抗體具有較強(qiáng)的化學(xué)穩(wěn)定性，變性溫度在70℃以上，能耐巴氏殺菌，在常溫或低溫冷藏條件下，抗體的活性能夠保留幾個月甚至幾年的時間。同時，也有較強(qiáng)的耐酸堿的能力，其穩(wěn)定的pH范圍很大，具有抗胃蛋白酶和胰蛋白酶降解的能力，這為口服被動免疫治療提供了條件[4]。

2? 卵黃抗體優(yōu)勢

與產(chǎn)生于哺乳動物血清中抗體相比，卵黃抗體具有許多獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)：①制備簡單、無需采血、只需收集免疫蛋雞所產(chǎn)下的雞蛋即可，避免了常規(guī)的采血行為，對實驗動物無傷害，符合動物福利要求;②產(chǎn)量大，使用少量的免疫原免疫蛋雞即可獲得大量特異性的卵黃抗體;③抗體制備過程簡單，不需要特殊的儀器設(shè)備，成本低，一般實驗室均可滿足;④不激活哺乳動物的補(bǔ)體系統(tǒng)，不與類風(fēng)濕因子或Fc受體結(jié)合，避免在免疫檢測過程中產(chǎn)生假陰性或假陽性結(jié)果。

3? 卵黃抗體的提取

卵黃中的主要成分為蛋白質(zhì)和脂肪，其中大部分蛋白質(zhì)與脂肪相結(jié)合以脂蛋白的形式存在，而水溶性蛋白只有α活性蛋白、β活性蛋白以及γ活性蛋白，γ活性蛋白即卵黃抗體，因此，分離純化卵黃抗體需要去除卵黃中的脂蛋白及脂質(zhì)，再從水溶性成分中提取。卵黃抗體的分離純化方法較多，選擇何種提取及分離純化方法，需綜合考慮以下幾個方面：終產(chǎn)品的用途、純化時間、純化成本、抗體數(shù)量以及抗體活性保留要求等。目前卵黃抗體的主要提取方法包括水稀釋法、鹽析法、聚乙二醇沉淀法、硫酸葡聚糖沉淀法等[5]。

3.1? 水稀釋法? 是在中性pH和低濃度的離子環(huán)境析出卵黃中的脂蛋白，從而分離出IgY。此法具有簡便、產(chǎn)量高、經(jīng)濟(jì)成本低等特點(diǎn)。

3.2? 鹽析法? 是指溶液中加入無機(jī)鹽而使原溶液中的某種物質(zhì)溶解度降低而析出的過程，鹽析破壞蛋白質(zhì)周圍的水膜，暴露疏水基團(tuán)，蛋白質(zhì)的溶解性隨著鹽濃度的不斷增加而下降并析出。鹽析法的優(yōu)點(diǎn)為對設(shè)備和條件要求低、操作簡便，但是分離能力不高。

3.3? 聚乙二醇沉淀法? 屬于有機(jī)物沉淀法。由于聚乙二醇溶解時具有散熱低，形成沉淀平衡時間短等特點(diǎn)，常用于蛋白質(zhì)的提取。

3.4? 硫酸葡聚糖沉淀法? 是將卵黃液用Tris緩沖液稀釋后，加入定量葡聚糖和氯化鈣，室溫作用30min后，離心除去沉淀，經(jīng)過飽和硫酸鈉鹽析后，可以獲得80%左右的IgY。

4? 卵黃抗體的應(yīng)用

4.1? 作為飼料添加劑? 卵黃抗體具有較強(qiáng)的免疫功能，在飼料中添加含有針對腸道病原菌的卵黃抗體可以為動物提供被動保護(hù)作用，抑制腸道中病原菌的粘附增殖、中和毒素，能夠調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡、有效降低病原菌對動物的損害，此外還有一定的營養(yǎng)補(bǔ)充作用，能夠促進(jìn)動物生長[6]。在仔豬飼料中加入卵黃抗體，能夠為仔豬提供被動免疫保護(hù)作用，可以預(yù)防細(xì)菌性和病毒性腹瀉，還能促進(jìn)仔豬的生長發(fā)育。在牛飼料中加入卵黃抗體，可以預(yù)防犢牛腹瀉和奶牛乳房炎。在禽飼料中加入卵黃抗體的主要目的是防治禽細(xì)菌、病毒和寄生蟲性疾病。

4.2? 預(yù)防及治療口腔、咽喉疾病? 齲齒的主要致病菌為變形鏈球菌，在齲齒的發(fā)生過程中該細(xì)菌首先粘附于牙齒表面參與牙菌斑的形成，然后通過代謝糖類物質(zhì)產(chǎn)生有機(jī)酸引起牙齒硬組織的脫落，最終導(dǎo)致齲齒的發(fā)生，通過特異性卵黃抗體可以作用于變形鏈球菌，影響其粘附性可以有效預(yù)防細(xì)菌對牙齒的傷害[7]。

4.3? 作為食品添加劑? 卵黃抗體已逐漸應(yīng)用于食品工業(yè)，目前卵黃抗體主要用于嬰幼兒和老年人的食品中，以提高這些免疫弱勢群體對疾病的抵抗能力。將卵黃抗體添加到食品中，可以間接阻止食品在加工和運(yùn)輸過程中受到病原微生物的污染，保護(hù)人體健康。此外，在食品中加入卵黃抗體后對幽門螺旋桿菌的生長有明顯的抑制作用，可以用來預(yù)防或者治療胃炎、胃潰瘍及十二指腸潰瘍等疾病。

4.4? 免疫分析檢測應(yīng)用? 二十世紀(jì)80年代以來，由于商品試劑的廣泛應(yīng)用，諸如卵黃抗體特異性純化試劑盒、卵黃抗體標(biāo)準(zhǔn)化和標(biāo)簽化的抗體，卵黃抗體才開始被廣泛使用。由于卵黃抗體化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、產(chǎn)量高、成本低，滿足動物福利的要求，以及具有動物種系發(fā)生距離的優(yōu)勢，因此更適于生成特異性抗體[8，9]。此外，由于卵黃抗體不激活哺乳動物的補(bǔ)體系統(tǒng)，不與類風(fēng)濕因子或Fc受體結(jié)合，從而可以避免在免疫檢測過程中產(chǎn)生假陰性或假陽性結(jié)果，在免疫檢測中可提高檢測的特異性及敏感性，基于卵黃抗體這一獨(dú)特的生物學(xué)特性，使其在免疫檢測領(lǐng)域有很大的應(yīng)用潛力。目前，卵黃抗體已應(yīng)用于酶聯(lián)免疫吸附試驗、膠體金層析檢測試驗、免疫沉淀、免疫印跡等免疫分析各個方面[10]。

5? 展望

雖然卵黃抗體具有制備簡單、產(chǎn)量大、無需屠宰動物、使用安全等獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，符合動物福利的理念，但是目前卵黃抗體的生產(chǎn)還沒形成統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)程以及相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。隨著研究的不斷深入以及生產(chǎn)方法的不斷改進(jìn)，相信卵黃抗體的應(yīng)用前景會更加廣闊。

參考文獻(xiàn)：

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[4]? 王新穎，周鶴峰，邵敏.卵黃抗體在國內(nèi)外醫(yī)藥方面的研究現(xiàn)狀[J].中國人獸共患病學(xué)報，2015，31（2）：179-182.

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[6]? 王業(yè)華， 單春喬，馮柳柳，等.卵黃抗體在病毒性疾病防治中的應(yīng)用[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2019，40：120-124.

[7]? 況小靈.抗齲齒卵黃抗體預(yù)防青少年齲齒的臨床效果[J].醫(yī)療裝備，2018，31：90-91.

[8]? 王剛，呂殿紅.卵黃抗體應(yīng)用研究進(jìn)展[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2002，16-18：23.

[9]? 易全茂，謝艷霞.雞卵黃抗體研究進(jìn)展[J].動物科學(xué)與動物醫(yī)學(xué)，2004，21：44-45.

[10]? 張璐，劉珍珍，寧長申，等.IgY在免疫檢測及治療中的應(yīng)用進(jìn)展[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2017，38：78-81.