新疆博州部分地方羊泰勒蟲(chóng)病流行病學(xué)調(diào)查

寧東坡，張楊，肖培培，李敏，樊新麗，巴音查汗*

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830052；2.兵團(tuán)第五師八十一團(tuán)農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，新疆 博樂(lè)市 833400)

羊泰勒蟲(chóng)病(Ovine and caprine theileriosis)是由泰勒科泰勒屬(Theileria)的原蟲(chóng)寄居在綿羊及山羊的紅細(xì)胞及淋巴細(xì)胞等細(xì)胞內(nèi)，并引發(fā)動(dòng)物出現(xiàn)高熱、出血、淋巴結(jié)腫脹及消瘦為主要病癥的疾病[1]，該病多呈急性經(jīng)過(guò)。該病在亞洲、非洲和中東地區(qū)的傳播較為廣泛，主要通過(guò)中間宿主蜱傳播，故其暴發(fā)和流行與媒介蜱的活動(dòng)密切相關(guān)。目前，共有6種羊泰勒蟲(chóng)在國(guó)內(nèi)外流行，包括綿羊泰勒蟲(chóng)(T.ovis)、呂氏泰勒蟲(chóng)(T.luwenshuni)、尤氏泰勒蟲(chóng)(T.uilenbergi)、萊氏泰勒蟲(chóng)(Theilerialestoquardi)、隱藏泰勒蟲(chóng)(T.recondita)和分離泰蟲(chóng)(T.separata)[2-4]，而我國(guó)報(bào)道的多為綿羊、尤氏及呂氏泰勒蟲(chóng)感染[5-7]。自1958年我國(guó)首次在四川省發(fā)現(xiàn)該病后，隨后在青海、甘肅、陜西、內(nèi)蒙古等地均有發(fā)現(xiàn)[8，9]；新疆的喀什、伊犁、阿克蘇、阿勒泰、巴州等地也均有發(fā)現(xiàn)[10-12]。

作為中國(guó)重要的羊產(chǎn)業(yè)養(yǎng)殖區(qū)，新疆的存欄數(shù)在我國(guó)居于前列，而新疆的復(fù)雜地貌使得媒介蜱種類(lèi)及分布較為廣泛。本研究對(duì)新疆博爾塔拉蒙古自治州(簡(jiǎn)稱(chēng)博州)部分地區(qū)血液源性及蜱源性羊泰勒蟲(chóng)的感染情況進(jìn)行了調(diào)查，以期為新疆羊泰勒蟲(chóng)病采取有針對(duì)性的防控措施提供部分參數(shù)。

1 試驗(yàn)材料

1.1 樣本來(lái)源

2016—2019年，在博州地區(qū)的81團(tuán)、85團(tuán)、88團(tuán)、90團(tuán)、烏圖布拉格鎮(zhèn)、精河縣及溫泉縣采集綿羊(N=907)和山羊(N=613)血液及羊體表的蜱蟲(chóng)(N=1 088)，共計(jì)采集血液1 520份、蜱蟲(chóng)1 088只。血液樣品保存于EDTA抗凝管，-20℃儲(chǔ)存；蜱保存于采集管(提前在管蓋扎洞，并用紗布包裹管蓋，防止成蜱產(chǎn)卵掉落外界)中，標(biāo)注采集地點(diǎn)與采集時(shí)間，記錄后保存于實(shí)驗(yàn)室，待鑒定。

DNA Marker購(gòu)自 TaKaRa 公司，2×Eco Taq PCR SuperMix購(gòu)自北京全式金生物技術(shù)有限公司，DNA提取試劑盒及DNA膠回收試劑盒購(gòu)自天根生化科技有限公司。

1.2 DNA提取

將蜱蟲(chóng)研磨后進(jìn)行DNA提取，血液樣品直接進(jìn)行DNA提取，-20 ℃保存，備用。

1.3 綿羊泰勒蟲(chóng)的PCR擴(kuò)增

PCR參照Allsopp等[7,13-15]擴(kuò)增18S rRNA目的片段；對(duì)提取的總DNA先進(jìn)行泰勒蟲(chóng)18S rRNA擴(kuò)增(TE18S-F：5′-AGTTTCTGACCTATCAG-3′；TE18S-R：5′-TTGCCTTAAACTTCCTTG-3′；1 033 bp；53.8℃)，對(duì)擴(kuò)增為陽(yáng)性的樣品再次進(jìn)行呂氏(T1-F：5′-GGTAGGGTATTGGCCTACTGA-3′；T1-R：5′-TCATCCGGATAATACAAGT-3′；380 bp；51℃)、尤氏(T2-F：5′-GGTAGGGTATTGGCCTACCGG-3′；T2-R：5′-ACACTCGGAAAATGCAAGCA-3′；380 bp；55℃)及綿羊泰勒蟲(chóng)(T3-F：5′-TCGAGACCTTCGGGT-3′；T3-R：5′-TCCGGACATTGTAAAACAAA-3′；520 bp；53℃)18S rRNA 擴(kuò)增鑒定。

PCR擴(kuò)增體系為(退火溫度不同)：95 ℃ 5 min、94 ℃ 30 s、(53.8 ℃、51 ℃、55 ℃、53 ℃)30 s、72 ℃ 1 min，35個(gè)循環(huán)；72 ℃ 10 min；PCR 產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

1.4 羊泰勒蟲(chóng)18S rRNA 基因測(cè)序與序列分析

將PCR擴(kuò)增結(jié)果為陽(yáng)性的產(chǎn)物進(jìn)行基因目的片段純化后送往上海生工進(jìn)行測(cè)序，用NCBI提供的 BLAST 軟件進(jìn)行比對(duì)分析。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 羊泰勒蟲(chóng)病原PCR檢測(cè)結(jié)果

共采集到綿羊(N=907)和山羊(N=613)的血液1 520份和1 088只蜱，采用羊泰勒蟲(chóng)通用引物擴(kuò)增后，共有329份羊血和40只蜱組織DNA中PCR結(jié)果為陽(yáng)性，目的片段大小約1 033 bp，符合預(yù)測(cè)值(圖1)。特異性引物擴(kuò)增后，只出現(xiàn)約520 bp的目的條帶(圖2)。測(cè)序結(jié)果用BLAST比對(duì)，發(fā)現(xiàn)蜱源性和血源性綿羊泰勒蟲(chóng)之間相似性為100%，與綿羊泰勒蟲(chóng)18S rRNA基因序列(GenBank登錄號(hào)分別為：KT851435)的核苷酸相似性為98%(圖3)，最終確認(rèn)為綿羊泰勒蟲(chóng)。

M.DNA Marker 2000；1.陽(yáng)性對(duì)照；2.陰性對(duì)照；3-4.蜱蟲(chóng)樣品；5-7.血液樣品。

M.DNA Marker 2000；1.蜱蟲(chóng)樣品；2-3.血液樣品；4.陰性對(duì)照；5.陽(yáng)性對(duì)照。

圖3 18S rRNA基因序列核苷酸相似性分析

2.2 不同地區(qū)羊泰勒蟲(chóng)病的檢測(cè)結(jié)果

對(duì)新疆博州7個(gè)地區(qū)共1 520份血液檢測(cè)顯示，81團(tuán)、85團(tuán)、88團(tuán)、90團(tuán)、烏圖布拉格鎮(zhèn)、精河縣及溫泉縣的綿羊泰勒蟲(chóng)感染率分別為25.82%(63/244)、24.59%(45/183)、24.66%(36/146)、19.85%(54/272)、26.15%(51/195)、20.18%(44/218)、13.74%(36/262)。對(duì)蜱蟲(chóng)體內(nèi)攜帶綿羊泰勒蟲(chóng)檢測(cè)結(jié)果的陽(yáng)性率顯示：85團(tuán)、88團(tuán)、90團(tuán)、精河縣及溫泉縣分別為4.39%(5/114)、5.71%(10/175)、2.21%(3/136)、7.69%(15/195)、4.22%(7/166)；而81團(tuán)及烏圖布拉格鎮(zhèn)的蜱體內(nèi)均未檢測(cè)到羊泰勒蟲(chóng)。詳情見(jiàn)表1。

表1 新疆部分地區(qū)羊泰勒蟲(chóng)病的調(diào)查結(jié)果

2.3 不同飼養(yǎng)方式羊泰勒蟲(chóng)病的檢測(cè)結(jié)果

新疆博州7個(gè)地區(qū)共1 520份不同飼養(yǎng)方式的羊群血液樣品感染結(jié)果表明：共計(jì)采集舍飼羊血液651份，陽(yáng)性數(shù)為96份，感染率為14.75%；共計(jì)采集放牧羊血液869份，陽(yáng)性數(shù)為233份，感染率為26.81%。放牧羊的感染率高于舍飼羊。

表2 新疆部分地區(qū)不同飼養(yǎng)方式羊泰勒蟲(chóng)病的調(diào)查結(jié)果

3 討論與小結(jié)

博州位于我國(guó)新疆自治區(qū)準(zhǔn)噶爾盆地西緣，屬大陸性干旱半荒漠和荒漠氣候，日照時(shí)間長(zhǎng)，晝夜溫差大，夏季高溫，適宜蜱蟲(chóng)生長(zhǎng)和繁殖，蜱蟲(chóng)叮咬羊群后致使動(dòng)物長(zhǎng)期處于帶蟲(chóng)免疫狀態(tài)，且根除困難[1]。

患羊泰勒蟲(chóng)病的動(dòng)物治愈后出現(xiàn)生長(zhǎng)遲緩、產(chǎn)奶量以及產(chǎn)肉量下降，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展產(chǎn)生非常不利的影響。當(dāng)前，我國(guó)報(bào)道的羊泰勒蟲(chóng)主要為綿羊泰勒蟲(chóng)、尤氏泰勒蟲(chóng)及呂氏泰勒蟲(chóng)，新疆報(bào)道的羊泰勒蟲(chóng)病均為綿羊泰勒蟲(chóng)病[10-12,16]。本研究針對(duì)新疆博州地區(qū)的羊泰勒蟲(chóng)病感染分布情況進(jìn)行了調(diào)查。據(jù)不完全調(diào)查顯示，該區(qū)為羊泰勒蟲(chóng)病的流行地區(qū)，血液源性和蜱源性羊泰勒蟲(chóng)的感染率為21.64%(329/1 520)和3.68%(40/1 088)。但感染率低于之前報(bào)道的阿克蘇(58%)、伊犁(93.2%)及阿勒泰地區(qū)(22.41%)[10，11]。本次PCR檢測(cè)數(shù)據(jù)顯示，該區(qū)感染的是綿羊泰勒蟲(chóng)，這和李佳、朱玉濤等[10,12]調(diào)查的結(jié)果一致。對(duì)于不同飼養(yǎng)方式的羊群進(jìn)行調(diào)查發(fā)現(xiàn)，放牧羊(26.81%，233/869)的感染率明顯高于舍飼羊(14.75%，96/651)。對(duì)于該現(xiàn)象的原因可能是放牧地區(qū)多為草原，草坪上的蜱蟲(chóng)較多，更易引發(fā)感染，而對(duì)于舍飼羊來(lái)說(shuō)，環(huán)境衛(wèi)生相對(duì)較好，經(jīng)詢(xún)問(wèn)，大部分畜主一般會(huì)在春秋季節(jié)在舍內(nèi)噴灑藥物，故感染率比放牧羊低。

羊泰勒蟲(chóng)病的傳播和流行具有顯著的季節(jié)性與地區(qū)性，并和當(dāng)?shù)孛浇轵珙?lèi)的分布密切相關(guān)[17]。據(jù)報(bào)道，小亞璃眼蜱和森林革蜱是綿羊和山羊泰勒蟲(chóng)病的主要傳播媒介[18]，是否存在其他傳播媒介蜱，需要后期繼續(xù)開(kāi)展相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。

該病的防治工作重點(diǎn)是做好預(yù)防及早期診斷，在春秋季節(jié)，對(duì)羊體表及圈舍等可能接觸病原的地方進(jìn)行滅蜱工作，采集血液樣品通過(guò)早期診斷篩選陽(yáng)性病例并及時(shí)治療，最大限度地減少牧民的經(jīng)濟(jì)損失。